狍脫毛癥血液生理生化指標(biāo)和微量元素的分析

李長生 宋百軍 竇鳳鳴 陳曉霞 史繼勇

(吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，左家，132109)

狍脫毛癥血液生理生化指標(biāo)和微量元素的分析

李長生 宋百軍 竇鳳鳴 陳曉霞 史繼勇

(吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，左家，132109)

稿件運(yùn)行過程

狍； 血液生理生化指標(biāo)； 微量元素； 脫毛病

狍(Capreoluscapreolus)是一種常見的鹿科動(dòng)物，在動(dòng)物分類學(xué)上隸屬哺乳綱(Mammalia)、偶蹄目(Artiodactyla)、鹿科(Cervidae)、狍屬[1]。對(duì)狍亞種的劃分，國外學(xué)者將世界范圍的狍劃分為歐洲狍(Capreoluscapreolus)和遠(yuǎn)東狍(Capreoluspygargus)[2]，我國學(xué)者將中國境內(nèi)的狍分為4個(gè)亞種，即中亞亞種(C.c.tianschanicus)、華北亞種(C.c.bedfordi)、東北亞種(C.c.mantschurivus)和西北亞種(C.c.melanotis)[3]。狍在我國經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)占有重要地位。長期以來，由于人們對(duì)野生狍的盲目獵捕和獵殺，導(dǎo)致野生狍資源的急劇減少。國家林業(yè)局已于2004年將狍列為有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的保護(hù)物種，《中國生物多樣性紅色名錄》(2015年脊椎動(dòng)物卷)將該種列為低危物種。目前，狍已經(jīng)馴化成可進(jìn)行人工飼養(yǎng)的動(dòng)物，其產(chǎn)品具有廣泛的市場開發(fā)前景，同時(shí)養(yǎng)狍具有較大的觀賞價(jià)值，但由于狍的人工馴化時(shí)間短，目前仍具有很強(qiáng)的野性，容易在外界因素刺激下發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，甚至死亡[4]。

隨著養(yǎng)狍產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，在我國東北地區(qū)的一些養(yǎng)狍場(戶)陸續(xù)出現(xiàn)狍脫毛癥，發(fā)病范圍及數(shù)量逐步擴(kuò)大，呈現(xiàn)明顯季節(jié)性，嚴(yán)重發(fā)病個(gè)體出現(xiàn)死亡，已經(jīng)威脅到狍種群的健康。本研究在實(shí)驗(yàn)室條件下，排除體表寄生蟲、傳染性疾病和系譜間親緣關(guān)系的遺傳病等引起的局部脫毛原因基礎(chǔ)上，從血液生理生化指標(biāo)、微量元素含量進(jìn)行分析測定，探索狍因微量元素缺乏導(dǎo)致營養(yǎng)代謝紊亂進(jìn)而引起脫毛病及其死亡的原因，為人工飼養(yǎng)狍因一些微量元素缺乏導(dǎo)致的營養(yǎng)代謝障礙病的診斷提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)資料[5]。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物來源

試驗(yàn)動(dòng)物采樣吉林省遼源地區(qū)某養(yǎng)狍場、吉林省敦化地區(qū)某養(yǎng)狍場、吉林省吉林地區(qū)養(yǎng)狍場共30只狍，其中患狍20只(♀14只，♂6只)、健康狍10只(♀6只，♂4只)。

1.2主要儀器設(shè)備和試劑

BS-200型全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)、BC-5300 vet 型全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)、TAS-986原子吸收分光光度計(jì)(北京普析儀器有限責(zé)任公司)，TU-1901紫外可見分光光度計(jì)(北京普析儀器有限責(zé)任公司)，RF-5301熒光分光光度計(jì)(日本島津)，SCR20BC低溫高速離心機(jī)(日本日立)，Sartorius精密電子分析天平(德國)。

2-3-二氨基萘(DAN)(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司)；環(huán)己烷(C6H1004)(上海鼓臣生物技術(shù)有限公司)；T-SOD試劑盒、Cu-Zn-SOD試劑盒、GSH-Px試劑盒(上海鼓臣生物技術(shù)有限公司)。

1.3方法

規(guī)劃是學(xué)校事業(yè)發(fā)展的指引和目標(biāo)，指導(dǎo)和規(guī)范各類建設(shè)項(xiàng)目。學(xué)校按照一體化發(fā)展思路，以資源共建共享為指導(dǎo)思想，編制了《廣東開放大學(xué)“創(chuàng)新強(qiáng)校工程”（2016-2020年）發(fā)展規(guī)劃》《廣東理工職業(yè)學(xué)院“創(chuàng)新強(qiáng)校工程”（2016-2020年）發(fā)展規(guī)劃》，對(duì)非學(xué)歷的繼續(xù)教育明確了建設(shè)項(xiàng)目、建設(shè)內(nèi)容、建設(shè)任務(wù)以及預(yù)期取得的成效。

1.3.1血液采集和處理

在早晨空腹情況下，按0.02～0.025 mL/kg體重標(biāo)準(zhǔn)用鹿眠寶和吹管針注射麻醉狍，頸靜脈采血，分別用 5 mL的KHB真空采血管(含促凝劑，批號(hào)∶20120804，上海科華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司)，收集靜脈血2 mL，3 000 r/min離心20 min，收集血清，使用BS-200型全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)測定血液的18項(xiàng)生化指標(biāo)。另用5 mL的一次性真空采血管(含EDTAK2，生產(chǎn)批號(hào)：120501，江蘇康健醫(yī)療用品有限公司)，收集靜脈血液2 mL，并輕輕將血液與抗凝劑混勻，30 min內(nèi)使用BC-5300 vet 型全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)進(jìn)行計(jì)數(shù)，測定血液生理指標(biāo)23項(xiàng)[6-7]。

1.3.2血液生理指標(biāo)測定

采用BC-5300 vet 型全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀完成23項(xiàng)血液生理指標(biāo)測定，測定指標(biāo)如表1。

1.3.3血清生化指標(biāo)測定

采用BS-200型全自動(dòng)生化分析儀測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、鈣(Ca)15項(xiàng)生化指標(biāo)(表2，表3)。此外，硫含量的測定采用黃有德等介紹的比濁法，銅、鋅、錳含量的測定采用原子吸收分光光度法；硒的測定采用DAN-熒光分光光度計(jì)法；T-SOD活性的測定采用黃嘌呤氧化酶法，Cu-Zn-SOD活性的測定采用嘌呤氧化酶法，GSH-Px活性的測定采用DTNB顯色法；測定方法均嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作進(jìn)行[8-10]。

1.4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著時(shí)用LSD法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)結(jié)果用LSD表示。

2 測定結(jié)果

表1試驗(yàn)檢測狍血液生理指標(biāo)的分析

Tab.1 Analysis of blood cell in roe deer

續(xù)表1

注：同行中，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

表2 試驗(yàn)狍檢測血液生化指標(biāo)檢測

Tab.2 Blood biochemical indices of roe deer

續(xù)表2

注：同行中，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

表3 試驗(yàn)雌雄狍血清礦物質(zhì)元素檢測

Tab.3 Analysis of trace element in roe deer

注：同行中，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

3 討論

3.1 本研究從3個(gè)地區(qū)養(yǎng)狍場(戶)選取30只狍(其中20只發(fā)病狍，10只健康狍)為研究對(duì)象，在排除體表寄生蟲、傳染性疾病[10-11]等原因引起的局部脫毛原因基礎(chǔ)上，經(jīng)血液生理、生化和微量元素的檢測，發(fā)現(xiàn)：患狍的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白量下降，中性粒細(xì)胞百分比上升而淋巴細(xì)胞百分比下降；血液生化指標(biāo)顯示丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、肌酸激酶活性升高，總超氧化物歧化酶、銅鋅超氧化物歧化酶、 堿性磷酸酶、尿酸含量和谷胱甘肽過氧化物酶活力顯著下降；微量元素Se、Cu、Zn、S水平在血清中降低，可以判定患狍脫毛癥應(yīng)該屬于微量元素代謝障礙性疾病[12-15]。

3.1.1 患狍血液紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白的含量下降，這是因?yàn)槿蔽鴮?dǎo)致紅細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸受到體內(nèi)自由基的攻擊，使得脂質(zhì)過氧化，膜損傷，進(jìn)而細(xì)胞破裂、溶解，使得紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白的含量降低，患狍中性粒細(xì)胞百分比上升而淋巴細(xì)胞百分比下降，這與王俊廷和楊淑清指出成年馬缺硒的嗜中性粒細(xì)胞增多[16]和韋旭斌等報(bào)道梅花鹿因缺Se、Cu導(dǎo)致“晃腰病”相關(guān)研究相吻合[17]。Se是構(gòu)成GSH-Px 的活性中心，而Se的一部分功能正是通過 GSH-Px 的機(jī)制發(fā)揮作用的。研究表明，GSH-Px 的活性與血硒水平呈正相關(guān)，通過檢測GSH-Px 的活性可作為評(píng)價(jià)體內(nèi)硒的營養(yǎng)狀況的敏感指標(biāo)。由表 3 可知，患狍體內(nèi) GSH-Px 活性低于健康狍對(duì)應(yīng)值，表明患狍的抗氧化能力較健康狍低。

3.1.2 患狍肝功能及心肌酶譜異常，主要表現(xiàn)在 ALT、 AST、CK 活性升高。血清TP和ALB是反映消化吸收功能和免疫的重要指標(biāo)[9，18-19]。血清蛋白質(zhì)的合成與機(jī)體營養(yǎng)狀況密不可分，當(dāng)缺合成蛋白質(zhì)的原料或蛋白質(zhì)消耗增加，都會(huì)致使血清蛋白質(zhì)下降和機(jī)體免疫力下降。由表2 可知，患狍血清TP和ALB均低于健康狍，說明該地區(qū)患狍體內(nèi)血清蛋白質(zhì)有缺乏的可能，造成這一結(jié)果與患狍日糧蛋白質(zhì)含量有關(guān)，狍在人工圈養(yǎng)條件下，飼料主要為秸稈或青貯，精料為玉米，少量豆粕，飼料品種單一。從而造成狍血清中總蛋白和白蛋白含量下降。

3.1.3 SOD能有效清除超氧化物自由基，抵御OFR對(duì)細(xì)胞造成的破壞，維持體內(nèi) OFR 產(chǎn)生與消除的動(dòng)態(tài)平衡。Cu、Zn缺乏可降低 Cu-Zn-SOD 的活性，使T-SOD 活性下降。SOD 活性可反映機(jī)體免疫力和抗病力的大小。由表3 可知，患狍體內(nèi) T-SOD、Cu-Zn-SOD 含量均低于參考值，表明患狍易受過氧化物和自由基損害，間接反映患狍缺乏Cu、Zn元素。GSH-Px重要功能是通過非特異地催化過氧化氫，清除體內(nèi)有害氫過氧化物，保護(hù)生物膜結(jié)構(gòu)免受過氧化物損傷。堿性磷酸酶(AKP)是一種含鋅金屬酶。當(dāng)體內(nèi)鋅含量降低時(shí)，AKP活性迅速下降，活力與機(jī)體鋅水平呈正相關(guān)。因此，動(dòng)物機(jī)體中AKP含量可以作為反映機(jī)體內(nèi)鋅含量的靈敏指標(biāo)。

3.1.4 S在動(dòng)物所有組織中都以含硫氨基酸的形式存在，如胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸等。S的作用是通過體內(nèi)這些含硫氨基酸實(shí)現(xiàn)的，參與體蛋白、乳蛋白的合成、脂肪代謝和碳水化合物代謝，起著組織蛋白質(zhì)和各種生物活性物質(zhì)(如激素、維生素)的功能。特別是S參與角質(zhì)蛋白的合成，而毛(絨)纖維的主要成分是角蛋白，因此S的含量和存在的形式及結(jié)構(gòu)對(duì)毛纖維的品質(zhì)有著重要作用。

3.2 患狍血清中微量元素Se、Cu、Zn、S水平降低，會(huì)發(fā)生營養(yǎng)代謝障礙。

3.2.1 Se是生物體必需的微量元素，同時(shí)硒蛋白作為哺乳動(dòng)物酶系統(tǒng)的基本成分，可以分解正常代謝過程中產(chǎn)生的有毒過氧化物，進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞中重要的膜結(jié)構(gòu)不受損害[18-19]。當(dāng)動(dòng)物體內(nèi)缺硒或者供給不足時(shí)，就會(huì)造成動(dòng)物機(jī)體在生理生化、營養(yǎng)代謝過程中發(fā)生紊亂，引起機(jī)體細(xì)胞變性壞死，出現(xiàn)一系列疾病，如常見于幼畜的營養(yǎng)性肌病或白肌病等[20-21]。

3.2.2 Cu作為酪氨酸酶的輔基，而酪氨酸酶可催化產(chǎn)生黑色素。Cu缺乏時(shí)，動(dòng)物酪氨酸酶的活性降低，致使皮膚、毛發(fā)色澤減退。同時(shí)Cu缺乏還可引起角化作用的破壞，使皮膚和毛發(fā)在生長和外觀上都發(fā)生改變，造成被毛光澤暗淡，彎曲度下降，形成所謂“直毛”或“鋼絲毛”，從而使被毛易折斷，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)生脫毛癥狀。Cu還具有重要的抗氧化作用，主要通過Cu對(duì)機(jī)體的抗氧化酶(血漿銅藍(lán)蛋白(CP)和Cu-Zn-SOD)的活性的高低來發(fā)揮作用的，動(dòng)物Cu缺乏時(shí)，可導(dǎo)致組織內(nèi)Cu-Zn-SOD活性降低，使機(jī)體過氧化物和自由基增多，從而加速代謝及免疫機(jī)能紊亂，導(dǎo)致動(dòng)物的抗病能力降低[22]。

3.2.3 Zn是動(dòng)物的必需微量元素，參與動(dòng)物體內(nèi)200多種酶的組成，參與維持上皮細(xì)胞和皮毛的正常形態(tài)、生長和健康。Zn對(duì)免疫的影響最明顯，Zn的缺乏使機(jī)體的免疫功能受損，對(duì)疾病的敏感性增加，可產(chǎn)生食欲、采食量和生產(chǎn)性能下降以及皮膚和被毛損害。缺Zn最敏感的部位是皮膚和被毛系統(tǒng)。動(dòng)物缺Zn可發(fā)生脫毛及皮膚角化不全，發(fā)病動(dòng)物的被毛纖維變直、變細(xì)，被毛松散，易脫落，嚴(yán)重者造成成片脫落[14，22]。

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Roe deer； Blood cell and blood biochemical； Trace elements； Alopecia

以吉林省遼源、敦化和吉林3地區(qū)狍養(yǎng)殖場戶20只脫毛癥患狍為研究對(duì)象，同時(shí)用10只健康狍作為對(duì)照組，對(duì)血液細(xì)胞、血液生化指標(biāo)和血清中微量元素(Se、Cu、Zn、S)進(jìn)行了分析對(duì)照，探討狍在人工飼養(yǎng)條件下脫毛癥的發(fā)生原因。結(jié)果表明：患狍的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白量下降，中性粒細(xì)胞百分比上升而淋巴細(xì)胞百分比下降；血液生化指標(biāo)顯示丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、肌酸激酶活性升高，總超氧化物歧化酶、銅鋅超氧化物歧化酶、 堿性磷酸酶、尿酸含量和谷胱甘肽過氧化物酶活力顯著下降；微量元素Se、Cu、Zn、S水平在血清中降低，以上結(jié)果導(dǎo)致狍脫毛癥。顯然，這對(duì)該病的診斷具有重要意義。

Analysis of Blood Physiological and Biochemical Indexes，and Microelements in Alopecia Roe Deer

Li Changsheng Song Baijun Dou FengmingChen Xiaoxia Shi Jiyong

(College of Animal Science and Technology，Jilin Agriculture Science And Technology College，Zuojia，132109，China)

We analyzed the blood cells，blood biochemical indexes and serum trace elements (Se，Cu，Zn，S)of blood sampled from 20 captive rearing roe deer with alopecia from three roe deer farms at Liaoyuan，Dunhua，and Jilin areas in Jilin Province.Blood samples of 10 healthy roe deer were used as a control.Our objective was to identify the cause of alopecia in captive roe deer.The blood of alopecia roe deer showed reduced numbers of red blood cells，lower hemoglobin content，higher percentage of neutrophil cells，and lower percentage of lymphocytes.Blood biochemical analysis showed that the enzymatic activity of alanine aminotransferase，aspartate aminotransferase，and creatine kinase increased，while the enzymatic activity of total superoxide dismutase，copper zinc superoxide dismutase，alkaline phosphatase，and glutathione peroxidase decreased significantly.Blood content of uric acid also decreased.Levels of Se，Cu，Zn and S in serum decreased.

吉林省教育廳十二五重點(diǎn)科研項(xiàng)目“東北地區(qū)狍規(guī)?；曫B(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)的研究”(吉教科合字[2012]第307號(hào))；吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院種子基金項(xiàng)目“母狍妊娠過程胚泡滯育生理機(jī)制的研究”(吉農(nóng)院合字[2014]第Z10號(hào))

李長生，男，53歲，副教授；主要從事特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖研究。E-mail：csli-64@163.com

2016-10-25

Q959.9

A

修回日期：2016-12-15

發(fā)表日期：2017-05-10

2310-1490(2017)02-175-07