昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的影響

秦 樂(lè)，陳新梅，邢佰穎，岳志敏

(山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的影響

秦 樂(lè)，陳新梅，邢佰穎，岳志敏

(山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

研究昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響。以胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)為測(cè)量指標(biāo)，觀察不同濃度昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠免疫功能的影響作用。低、中、高劑量昆侖雪菊總黃酮可不同程度的增加小鼠胸腺和脾臟的質(zhì)量，其中，與空白對(duì)照組比較，高劑量昆侖雪菊總黃酮組能顯著提高小鼠脾臟指數(shù)(P<0.05)；但對(duì)胸腺指數(shù)的作用結(jié)果不明顯。以胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)作為檢測(cè)指標(biāo)，昆侖雪菊總黃酮可增強(qiáng)小鼠胸腺和脾臟的臟器指數(shù)，提高小鼠的免疫功能。

昆侖雪菊總黃酮；胸腺指數(shù)；脾臟指數(shù)

昆侖雪菊為菊科金雞菊屬(Coreopsis)，具有獨(dú)特功效的稀有高寒植物，現(xiàn)代研究表明其主要活性成分為包括馬里苷、黃諾馬苷等黃酮類(lèi)物質(zhì)[1]，已有研究報(bào)道昆侖雪菊總黃酮具有較為明確的降血糖、降血脂[2]、抗氧化[3]的藥理作用。本課題組前期研究也表明昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠記憶[4]和抗疲勞作用[5]有一定的積極影響，其作用機(jī)制可能與昆侖雪菊總黃酮的抗氧化能力有關(guān)。有研究表明總黃酮對(duì)免疫功能的影響與其抗氧化活性和清除自由基能力有關(guān)，因此，為進(jìn)一步探索昆侖雪菊總黃酮的作用機(jī)制及藥用價(jià)值，本試驗(yàn)以小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)為指標(biāo)，初步研究昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠免疫功能的影響。

1 材料

1.1 儀器

恒溫不銹鋼水浴鍋(上海樹(shù)立儀器儀表有限公司)；JM-A3002電子天平(諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司)；UV-5100紫外可見(jiàn)光分光光度儀(上海元析儀器有限公司)。

1.2 試劑

雪菊(新疆潤(rùn)元本草有限公司，批號(hào)：20170210，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)李寶國(guó)老師鑒定為昆侖雪菊)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào):Y01M7S10307)；氯化鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：20160902);氫氧化鈉(天津市廣成化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):20140907)；亞硝酸鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào):20160509)；三氯化鋁(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有公司，分析純，批號(hào):20141215)。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

體質(zhì)量28～32g的SPF級(jí)昆明種小鼠，購(gòu)于山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司質(zhì)檢中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。動(dòng)物合格證編SCXK魯(20170006)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 昆侖雪菊總黃酮的提取

精密稱(chēng)取粉碎后過(guò)60目網(wǎng)篩的昆侖雪菊5.00g于三角燒瓶中，以料液比1∶10加入50 mL蒸餾水，水浴鍋90℃下熱浸20min，過(guò)濾，如此重復(fù)2次，合并兩次浸出液，得到昆侖雪菊總黃酮溶液。

2.2 昆侖雪菊總黃酮供試品的制備[6]

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品得到標(biāo)準(zhǔn)曲線A=11.515C-0.0078，相關(guān)系數(shù)R=0.995，NaNO2-AlCl3-NaOH顯色法測(cè)得上述昆侖雪菊總黃酮含量為29.8%，濃度為11.14mg/mL，以此作為高劑量雪菊總黃酮溶液，稀釋兩次，各稀釋1倍，得到濃度為5.57 mg/mL的中劑量雪菊總黃酮溶液和2.78mg/mL低劑量雪菊總黃酮溶液。

2.3 動(dòng)物分組及給藥

健康小鼠40只隨機(jī)分為空白對(duì)照組，昆侖雪菊總黃酮低、中、高劑量組，共4組，每組10只。空白對(duì)照組以0.1 mL/10 g的生理鹽水給給予灌胃，其余各組給予等量的低、中、高劑量雪菊總黃酮，每日灌胃給藥兩次，連續(xù)給藥45天。各組小鼠等量喂食普通飼料，自由飲水。

2.4 小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的測(cè)定[7]

各組小鼠末次給藥后禁食不禁水12 h，稱(chēng)取其體質(zhì)量，脫頸椎處死，解剖摘取胸腺和脾臟，去除脂肪和結(jié)締組織后稱(chēng)重，計(jì)算各組小鼠的胸腺和脾臟指數(shù)，計(jì)算公式如下：

胸腺指數(shù)(mg/g)=胸腺質(zhì)量(mg)/小鼠體質(zhì)量(g)；

脾臟指數(shù)(mg/g)=脾臟質(zhì)量(mg)/小鼠體質(zhì)量(g)。

2.5 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±方差(X±S)表示，利用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用單因素方差分析。

3 結(jié)果與分析

不同濃度的雪菊總黃酮對(duì)各組小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響(X±S)Table 1 The effect of flavonoids on the immune organ index in mice

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05。

由表1可知，小鼠給藥45天后，與空白對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組小鼠胸腺和脾臟的質(zhì)量均有所提高。其中，胸腺指數(shù)方面，各組昆侖雪菊總黃酮組的小鼠胸腺指數(shù)隨昆侖雪菊濃度增加而呈上升趨勢(shì)，但差異不顯著；脾臟指數(shù)方面，低、中、高劑量昆侖黃酮組的脾臟指數(shù)與空白對(duì)照組比較均有提高，隨昆侖雪菊濃度增加而增加，且高劑量組脾臟指數(shù)提高顯著(*P<0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的提高有一定積極作用，且具有劑量效應(yīng)關(guān)系，昆侖雪菊濃度越高,胸腺和脾臟質(zhì)量增加越明顯，其中，高劑量的昆侖雪菊總黃酮作用效果最為顯著。

4 討論

胸腺和脾臟是哺乳動(dòng)物免疫細(xì)胞分布的主要器官，胸腺是誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖分化成免疫活性細(xì)胞的場(chǎng)所，是構(gòu)建細(xì)胞免疫功能的車(chē)間；脾臟是成年動(dòng)物最大的免疫器官，在體液免疫和細(xì)胞免疫中發(fā)揮著重要作用[8]。機(jī)體免疫功能表現(xiàn)亢進(jìn)或抑制時(shí)，胸腺細(xì)胞和脾臟細(xì)胞也相應(yīng)的增殖或萎縮[9]。因此，采用胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)作為檢測(cè)指標(biāo)可在一定程度上反映機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答水平，體現(xiàn)藥物對(duì)機(jī)體免疫功能的影響。

本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定不同濃度的昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的影響程度，以研究昆侖雪菊總黃酮在小鼠免疫功能上的作用，結(jié)果表明與空白對(duì)照組相比，低、中、高劑量雪菊總黃酮均可在不同程度上促進(jìn)小鼠免疫器官的生長(zhǎng)，提高其質(zhì)量，且其增長(zhǎng)程度隨昆侖雪菊總黃酮濃度的升高而增大。其中，高劑量的昆侖雪菊總黃酮可顯著提高小鼠的脾臟指數(shù)，但對(duì)胸腺指數(shù)的影響差異不顯著，說(shuō)明就胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)這一方面而言，昆侖雪菊總黃酮在一定程度上可增強(qiáng)小鼠免疫功能，且與昆侖雪菊總黃酮的劑量有關(guān)。其作用機(jī)制可能與總黃酮良好的抗氧化活性和清除自由基的能力抑制了脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，降低過(guò)氧化損傷對(duì)小鼠免疫細(xì)胞造成的風(fēng)險(xiǎn)，從而在一定程度上提高小鼠免疫能力有關(guān)[10]。

[1] 張彥麗,王 艷,李新霞,等. 高效液相色譜法測(cè)定昆侖雪菊中綠原酸和黃芩苷的含量[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012(4):107-109.

[2] 方 煊,李雅麗,陳新梅. 雪菊黃酮對(duì)脂肪變肝細(xì)胞的降脂效果[J]. 溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,46(10):720-723.

[3] 宋燁威,金紅娜,徐 潔,等. 昆侖雪菊中黃酮類(lèi)化合物的提取分離及抗氧化活性評(píng)價(jià)[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2016(4):220-223.

[4] 秦 樂(lè),陳新梅,邢佰穎,等. 雪菊總黃酮對(duì)小鼠體重及記憶再現(xiàn)障礙的影響[J]. 化工時(shí)刊,2017(2):10-12.

[5] 邢佰穎,陳新梅,秦 樂(lè),等. 昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠負(fù)重游泳的影響[J]. 化工時(shí)刊,2017(1):9-11.

[6] 邢佰穎,陳新梅,秦 樂(lè),等. 兩種顯色法測(cè)定昆侖雪菊總黃酮含量的比較研究[J]. 化工時(shí)刊,2016(12):23-25.

[7] 李海珊,劉麗喬,聶少平. 茶多糖對(duì)小鼠腸道健康及免疫調(diào)節(jié)功能的影響[J]. 食品科學(xué),2017(7):187-192.

[8] 趙志強(qiáng),賈麗霞,張慶波,等. 黃酮對(duì)免疫功能影響的體內(nèi)研究[J]. 臨床薈萃,2014(1):49-51.

[9] 皮建輝,譚 娟,胡朝暾,等. 金銀花黃酮對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J]. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志,2015(1):89-92.

[10] 毛 媛,呂留莊,劉克武,等. 東紫蘇(Elsholtiza bodinieri Vaniot)總黃酮的提取及其抗氧化、免疫活性的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2016(9):85-88.

(本文文獻(xiàn)格式：秦 樂(lè)，陳新梅，邢佰穎，等.昆侖雪菊總黃酮對(duì)小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的影響[J].山東化工,2017,46(15):41-42.)

Effects of Total Flavonoids from Coreopsis Tinctoria on Thymus Index and Spleen Index in Mice

QinLe,ChenXinmei,XingBaiying,YueZhimin

(College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji'nan 250355,China)

To study the effects of total flavonoids fromcoreopsis tinctoria on thymus index and spleen index of the mice.Using the thymus index and the spleen index to observe the effects of different concentrations total flavonoids fromcoreopsis tinctoria on the immune function of the mice.Low,medium and high dose of total flavonoids fromcoreopsis tinctoria can increase the thymus and spleen in mice of different level of quality,and compared with blank control group,high dose of total flavonoids from coreopsis tinctoriagroup can significantly improve the index of spleen in mice (P < 0.05); But the effect on the thymus index was not obvious.As the thymus index and the spleen index was used as test indicators,the total flavonoids from coreopsis tinctoriacan enhance the index of the thymus and spleen and improve the immune function of mice.

total flavonoids fromcoreopsis tinctoria; thymus index; spleen index

2017-05-31

山東省教育廳2015年度山東省本科高校教學(xué)改革研究項(xiàng)目(2015M189)；山東省卓越工程師教育培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(魯教高字[2013]3號(hào))

秦 樂(lè)(1995—)，女,2014級(jí)制藥工程專(zhuān)業(yè)本科；通訊作者：陳新梅(1973—)，女，博士，副教授，碩導(dǎo)，研究方向：中藥新制劑與制藥新技術(shù)研究。

R284

A

1008-021X(2017)15-0041-02