胃癌前病變不同階段胃黏膜DNA甲基化表達分析及臨床意義

胡美慶 陶茂根 胡建生

胃癌前病變不同階段胃黏膜DNA甲基化表達分析及臨床意義

胡美慶 陶茂根 胡建生

目的 探討胃癌前病變不同階段胃黏膜DNA甲基化表達差異及臨床意義。方法 選取2011年1月至2012年12月病理檢查診斷為慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生、輕-中度異型增生、重度異型增生、胃癌患者196例；另選擇慢性淺表性胃炎患者55例（病理結(jié)果確診為慢性淺表性胃炎，HP感染陰性）為對照。分別提取所有患者的DNA，酚/氯仿抽提法提??；采用甲基化特異聚合酶鏈反應（MSP）法檢測胃黏膜組織c-myc，p16，hMLH1DNA甲基化表達并比較。結(jié)果 慢性淺表性胃炎組均未發(fā)生p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化；隨著病理嚴重程度的增加，p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達的病例數(shù)逐漸增多，胃癌組患者中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達均為最高（P＜0.05）。結(jié)論 隨著病理嚴重程度的遞增，各項DNA甲基化表達情況也逐漸增多，這對于胃癌的早期診斷、早期治療、預后分析均有重要意義；且可以對胃癌前病變進行早期干預治療，以及定期的隨訪觀察，減少胃癌的發(fā)生。

胃癌前病變 DNA甲基化 p16基因 c-myc基因 hMLH1基因

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，居全球腫瘤發(fā)病率和病死率的第二位［1］。嚴重危害人類的健康。我國是胃癌的高發(fā)國，其病死率占各腫瘤的首位。由于胃癌目前療效尚難令人滿意，癌前發(fā)現(xiàn)、癌前診斷和癌前治療已成為減少胃癌發(fā)病率的重要策略。作者應用甲基化特異聚合酶鏈反應（MSP）法及免疫組化（SP法），檢測不同階段胃癌前病變患者的胃黏膜c-myc，p16，hMLH1DNA甲基化表達情況，分析在不同階段的胃癌前病變中各項DNA甲基化表達的差異及其臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2011年1月至2012年12月本院病理檢查結(jié)果明確為慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生、輕中度異型增生、重度異型增生、胃癌的患者196例，男105例，女91例；年齡18～70歲。同時選取慢性淺表性胃炎患者55例（病理結(jié)果確診為慢性淺表性胃炎，HP感染陰性）為對照組，男30例，女25例；年齡20-82歲。分析不同病變階段各組p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達情況。

1.2 方法 （1）組織DNA的提?。翰捎贸Ｒ?guī)的酚-氯仿方法提取組織DNA。（2）p16、c-myc、Hmlh1基因DNA甲基化的檢測：采用甲基化特異性-PCR擴增（MSP）法檢測胃黏膜組織c-myc，p16，hMLH1DNA甲基化表達。檢測結(jié)果分為陰性和陽性。結(jié)果提示有DNA甲基化表達為陽性，結(jié)果提示無DNA甲基化表達為陰性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。陽性表達率的組間比較用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

慢性淺表性胃炎組均未發(fā)生p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化；不同階段病變各組的p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化均有表達，慢性萎縮性胃炎組中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達患者最少，隨著病理嚴重程度的增加，p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達的病例數(shù)逐漸增多，胃癌組患者表達最高（P＜0.05）。慢性淺表性胃炎組中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化均未發(fā)生；其余各組中p16基因甲基化發(fā)生率均為最高，c-myc基因甲基化發(fā)生率次之，hMLH1基因甲基化發(fā)生率最低。

表1 P16、c-myc、hMLH1DNA甲基化與不同階段胃癌前病變病理特征的關(guān)系

3 討論

胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，嚴重的危害人類的健康。我國是胃癌的高發(fā)國，其病死率仍占各種腫瘤的首位。其發(fā)生系多因素、多階段、多基因異常累積導致，是一個由量變到質(zhì)變的多步驟變化的過程，即由慢性胃炎—胃黏膜萎縮腸化—異型增生—胃癌逐步演變而成［2］。由于胃癌療效尚難令人滿意，癌前發(fā)現(xiàn)、癌前診斷和癌前治療已成為減少胃癌發(fā)病率的重要策略。

c-myc基因是一種高度保守的DNA結(jié)合蛋白類癌基因，具有刺激細胞增生、誘導細胞凋亡的雙重功能。P16基因是一種重要的抑癌基因，直接參與細胞周期，并在細胞周期的許多環(huán)節(jié)起關(guān)鍵的調(diào)控作用。p16蛋白可抑制激酶的活性，阻礙細胞由G1期向S期的過渡。hMLH1是一種DNA錯配修復基因，其缺陷可導致復制錯誤的大量增加，導致細胞惡變，腫瘤形成。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，作為表遺傳學的重要組成部分，DNA甲基化是腫瘤中最常見的分子改變之一，5’CpG島甲基化致抑癌基因失活是引起細胞惡化的重要步驟［3-5］。目前，國內(nèi)外的一些研究主要在發(fā)現(xiàn)各種不同的腫瘤相關(guān)基因參與了胃癌、胃癌前病變的發(fā)生，為胃癌、早期胃癌的診斷提供更多的信息。舍雅莉等［6］研究發(fā)現(xiàn)p16基因啟動子區(qū)甲基化導致的基因沉默可能與胃癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)；王維等［7］研究認為c-myc基因產(chǎn)物在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用；鄒葉青等［8］研究認為胃癌中存在hMLH1基因啟動子甲基化，hMLH1基因啟動子甲基化在胃癌前病變階段就已經(jīng)存在，可能是胃癌的早期事件之一。

本資料結(jié)果顯示，慢性淺表性胃炎組均未發(fā)生p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化；不同階段胃癌前病變各組的p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化均有表達情況，慢性萎縮性胃炎組中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達的患者最少，隨著病理嚴重程度的增加，p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達的病例數(shù)逐漸增多，胃癌組患者中p16甲基化、c-myc基因甲基化、hMLH1基因甲基化表達均為最高。隨著病理嚴重程度的遞增，各項DNA甲基化表達情況也逐漸增多，這對于胃癌的早期診斷、早期治療、預后分析均有重要意義；且可以對胃癌前病變進行早期干預治療及定期隨訪觀察，以減少胃癌的發(fā)生。

［1］ Capuzzi D,Santoro E,Hauck WW,et al．Fhit Expression in Gastric Adenocarcinoma correlation with disease stage and survival．Cancer,2000,88(10):24-34

［2］ 軒菡,顧康生．基因甲基化與胃癌前病變和胃癌的相關(guān)性．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,15(12):1866-1868．

［3］ Gebhard C,Benner C,Ehrich M,et al．General transcription factor binding at CpG islands in normal cells correlates with resistance to de novo DNA methylation in cancer cells．Cancer Res, 2010, 70(4):1398-1407．

［4］ Portela A,Liz J,Nogales V,et al．DNA methylation determines nucleosome occupancy in the 5′-CpG islands of tumor suppressor genes．Oncogene,2013,32(47):5421-5428．

［5］ Irizarry RA,Ladd-Acosta C,Wen B,et al．The human colon cancer methylome shows similar hypo-and hypermethylation at conserved tissue-specific CpG island shores．Nat Genet,2009,41(2):178-186．

［6］ 舍雅莉,張煦,李能蓮,等．胃癌組織中p16基因甲基化與其蛋白表達的相關(guān)性及臨床意義．腫瘤,2010,30(12):1038-1041．

［7］ 王維,羅和生,余保平．人胃癌及癌前病變中NF-KappaB和c-myc蛋白的表達與意義．腫瘤防治研究,2202,29(4):285-287．

［8］ 鄒葉青,張善忠,劉川,等．胃癌及癌前病變組織中hmLH1基因啟動子甲基化與MSI的關(guān)系．江西醫(yī)學院學報,2008,48(3):16-23．

Objective To explore the clinical significance of gastric mucosal DNA methylation expression at different stages of pathological changes before gastric carcinoma. Methods 196 patients who were diagnosed as chronic atrophic gastritis, intestinal metaplasia, mild to moderate dysplasia, severe dysplasia and gastric carcinoma by pathological examination from January 2011 to December 2011 in our hospital were selected as study group; other 55 cases of patients with chronic superficial gastritis （pathological results diagnosed with chronic superficial gastritis，HP infection negative）were chosen as control group. The DNA of all subjects were extracted respectively by phenol/chloroform extraction. The expression of c-myc, p16 and hMLH1DNA methylation in gastric mucosa was detected and compared by methylation specific polymerase chain reaction (MSP). Results The p16 methylation，c - myc gene methylation and hMLH1 gene methylation were not detected in the chronic superficial gastritis group；and with the increase of pathological severity，the number of cases with p16 methylation，c - myc gene methylation and hMLH1 gene methylation gradually increased. The expression of P16 methylation,c-myc gene methylation and hMLH1 gene methylation were highest in gastric cancer group（P＜0.05）. Conclusion With the increase of pathological severity，the DNA methylation expression is also gradually increased，for the analysis of the early diagnosis，early treatment and prognosis of gastric cancer has important significance. The early intervention treatment and regular follow-up observations can be used to treat precancerous lesions of gastric cancer and to reduce the occurrence of gastric cancer.

Precancerous lesion of stomach DNA methylation p16 gene C-myc gene hMLH1 gene

321100 浙江省蘭溪市人民醫(yī)院