10 854例珠蛋白生成障礙性貧血基因篩查結(jié)果及基因類型分析

何 麗,朱曉芳,王 薇,黃 嬋,朱 欣,呂虹潔,錢 婧,張海燕

(重慶市婦幼保健院婦保科 400010)

10 854例珠蛋白生成障礙性貧血基因篩查結(jié)果及基因類型分析

何 麗,朱曉芳,王 薇,黃 嬋,朱 欣,呂虹潔,錢 婧,張海燕△

(重慶市婦幼保健院婦保科 400010)

目的 了解重慶地區(qū)進行孕前檢查人群的珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率、基因類型和構(gòu)成比情況。方法 對2014年4月至2016年3月在該院進行孕前體檢的10 854人進行珠蛋白生成障礙性貧血篩查，篩查包括：平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)水平,血紅蛋白電泳，對篩查結(jié)果任意一項異常者行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測。結(jié)果 在10 854人中，珠蛋白生成障礙性貧血初篩陽性者1 117人，篩查陽性率10.29%。珠蛋白生成障礙性貧血基因陽性者共458例，珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率4.21%。其中檢測出單純α珠蛋白生成障礙性貧血253例，α珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率2.33%，其中α珠蛋白生成障礙性貧血以--SEA最常見，構(gòu)成比為52.17%。檢測出單純β珠蛋白生成障礙性貧血197例，β珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率1.81%，其中β珠蛋白生成障礙性貧血以CD17 (A→T)最常見，構(gòu)成比為31.47%。檢測出攜帶αβ復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因11例。結(jié)論 重慶是珠蛋白生成障礙性貧血高發(fā)地區(qū)，做好孕前珠蛋白生成障礙性貧血篩查工作，對提高人口素質(zhì)，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育具有重要作用。

α珠蛋白生成障礙性貧血；β珠蛋白生成障礙性貧血;遺傳篩查

珠蛋白生成障礙性貧血是一種比較常見的單基因遺傳病[1]，主要是由于遺傳基因缺陷所致的一種或多種珠蛋白肽鍵合成缺乏或者不足所致的一組遺傳性溶血性貧血病[2-3]。本病最初發(fā)生于地中海地區(qū)，以后世界各地都有發(fā)現(xiàn)，東南亞即為高發(fā)區(qū)之一。我國廣東、廣西、四川、重慶等地多見，長江以南各省區(qū)有散發(fā)病例，北方則少見。根據(jù)珠蛋白肽鏈缺乏的種類及程度，珠蛋白生成障礙性貧血可分為α、β、δ、δβ和γδβ等不同類型，常見的主要是α和β兩大類型。珠蛋白生成障礙性貧血目前尚無有效的治療方法,但它是人類近7 000多種遺傳病中預(yù)防效果最好的幾種遺傳病之一。重慶是珠蛋白生成障礙性貧血高發(fā)地區(qū)，因此做好孕前珠蛋白生成障礙性貧血篩查，為珠蛋白生成障礙性貧血的診斷、治療、預(yù)防咨詢提供了理論依據(jù),對提高人口素質(zhì)、減少出生人口缺陷有重大意義。本文對本院2014年4月至2016年3月10 854例孕前檢查對象進行珠蛋白生成障礙性貧血篩查，對珠蛋白生成障礙性貧血基因的攜帶率，基因類型及構(gòu)成比等情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年4月至2016年3月在本院行孕前優(yōu)生健康檢查的育齡患者共10 854例，年齡20～45歲，男女不限，均自愿參加此項目檢查。

1.2 珠蛋白生成障礙性貧血篩查方法 抽取孕前優(yōu)生檢查人群外周靜脈血3 mL,行血常規(guī)檢查，以平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)為篩查指標，血常規(guī)MCV 參考范圍82～100 fL，MCH 參考范圍27～34 pg，若 MCV<82 fL或MCH<27 pg，認定為珠蛋白生成障礙性貧血篩查陽性；血紅蛋白電泳檢測，若血紅蛋白A2(HbA2)>3.5%或HbA2<2.5%，和(或)血紅蛋白F(HbF)增高，或出現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶，為血紅蛋白電泳異常，亦認定為珠蛋白生成障礙性貧血篩查陽性。對MCV、MCH和血紅蛋白電泳分析有任意一項異常者，則行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測。

1.3 儀器設(shè)備

1.3.1 血細胞分析 采用日本Sysmex公司生產(chǎn)的XN-1000型全自動血細胞分析儀及配套試劑對MCH、MCV進行測定。

1.3.2 血紅蛋白電泳 使用法國Sebia公司生產(chǎn)的Capillarys型全自動毛細管電泳儀及配套試劑，對各血紅蛋白成分和比例進行分離。

1.3.3 珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測 采用gap-PCR技術(shù)檢測--SEA、-α3.7、-α4.23種常見缺失型α珠蛋白生成障礙性貧血，采用PCR結(jié)合反向雜交(PCR-RDB)技術(shù)檢測αCSα、αQSα、αWSα 3種非缺失型α珠蛋白生成障礙性貧血和17種β珠蛋白生成障礙性貧血，即CD41-42(-TCTT)、CD43(G→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、-29(A→G)、-30(T→C)、-32(C→A)、CD71-72(+A)、βE(GAG→AAG)、CD17(A→T)、CD31(-C)、CD14-15(+G)、CD27-28(+C)、IVS-Ⅰ-1(G→A，G→T)、IVS-I-5(G→C)、CAPM、IntM等。診斷α缺失型珠蛋白生成障礙性貧血的試劑盒購買于中山大學達安基因股份有限公司，診斷α非缺失型及β珠蛋白生成障礙性貧血的試劑盒購買于亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司。

2 結(jié) 果

在10 854例中，珠蛋白生成障礙性貧血初篩陽性者1 117例，篩查陽性率10.29%。珠蛋白生成障礙性貧血篩查陽性者均行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測，陽性者共458例，珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測陽性占初篩人數(shù)的比例為41.00%，珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率4.21%。其中檢測出單純α珠蛋白生成障礙性貧血253例，α珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測陽性占初篩人數(shù)的比例為22.65%，α珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率2.33%，其中α珠蛋白生成障礙性貧血以--SEA最常見，構(gòu)成比為52.17%。檢測出單純β珠蛋白生成障礙性貧血197例，β珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測陽性占初篩人數(shù)的比例為17.64%，β珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率1.81%，其中β珠蛋白生成障礙性貧血以CD17 (A→T)最常見，構(gòu)成比為31.47%。檢測出αβ復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因11例，αβ復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測陽性占初篩人數(shù)的比例0.99%。α、β及αβ復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測具體結(jié)果見表1～3。

表2 β珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果 (n=197)

表3 αβ珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測結(jié)果(n)

3 討 論

珠蛋白生成障礙性貧血是臨床上最為常見的,并且危害較大的一種遺傳病,夫妻攜帶同型珠蛋白生成障礙性貧血基因，每次妊娠都有1/4的概率生育重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒。重型珠蛋白生成障礙性貧血可引起死胎、死產(chǎn)，新生兒出生不久死亡[4-5]，目前尚無根治的辦法,臨床上主要以輸血、去鐵對癥處理為主，這對社會家庭帶來了巨大的經(jīng)濟負擔及精神壓力[6]。預(yù)防重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生成為控制該病的有效方法。目前取消了婚前檢查，失去了防控計劃的第一道屏障，因此抓住孕前檢查這道防線，盡早發(fā)現(xiàn)珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶并做出科學及時的生育指導(dǎo)，顯得至關(guān)重要。

本研究中對每位孕前檢查者均進行了詳細的病史詢問及體格檢查。458例確診為珠蛋白生成障礙性貧血的患者均無不適癥狀，其中僅14例有珠蛋白生成障礙性貧血家族史，查體均無黃疸、臉色萎黃、蒼白、發(fā)育不良、全身水腫或頭顱增大、顴骨突出、眼距增寬、鼻梁低平等體征。很大比例的人不知曉珠蛋白生成障礙性貧血相關(guān)知識及危害，有一部分確診為珠蛋白生成障礙性貧血的患者反應(yīng)曾予補鐵劑治療。故在孕前檢查中，加強珠蛋白生成障礙性貧血的宣傳教育，提高人們對珠蛋白生成障礙性貧血篩查的重視，擴大醫(yī)務(wù)人員培訓隊伍，避免珠蛋白生成障礙性貧血的漏診誤診，均是開展珠蛋白生成障礙性貧血防控計劃的重要內(nèi)容。

本研究對2014年4月至2016年3月在本院進行孕前體檢的10 854例進行珠蛋白生成障礙性貧血篩查，珠蛋白生成障礙性貧血初篩陽性者1 117例，篩查陽性率10.29%。檢測珠蛋白生成障礙性貧血基因陽性者共458例，珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率4.21%，較文傳芳等[7]報道重慶璧山地區(qū)的3.24%偏高，與李良瓊等[8]報道重慶東北部地區(qū)的4.74%相近，較李娟等[9]報道本地區(qū)的珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)生率5.6%偏低。檢測出單純α珠蛋白生成障礙性貧血253例，α珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率2.33%，與李良瓊等[8]報道2.06%相近及以往報道的四川地區(qū)α珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)生率為2%左右相符[10]。其中α珠蛋白生成障礙性貧血以--SEA最常見，構(gòu)成比為52.17%，與重慶、廣東、廣西、貴陽等多地報道的常見α缺失類型相符[11-14]。α非缺失型珠蛋白生成障礙性貧血少見，3種非缺失類型構(gòu)成比為7.91%，與Ko等[15]及Xu等[16]報道的一致。 檢測出單純β珠蛋白生成障礙性貧血197例，β珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率1.81%，與姚秀云等[17]報道的重慶地區(qū)β珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為1.51%相近。本研究共檢測出11種基因型，常見的幾種類型分別為：CD17 (A→T)、CD41-42(-TCTT)、 IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、βE(GAG→AAG)，與本地區(qū)之前杜偉等[18]報道的結(jié)果一致。β珠蛋白生成障礙性貧血中以CD17 (A→T)最常見，與同處我國西南地區(qū)的貴州報道[19]相同，而與同屬亞熱帶地區(qū)的廣東[12]、廣西[20]、海南[21]等地報道不同，這3個地區(qū)變異位點頻率最高的則是CD41-42(-TCTT)。研究表明β珠蛋白生成障礙性貧血是受瘧疾選擇最明顯的基因之一，由于地理位置、氣候條件，瘧疾的不同等原因而造成β珠蛋白生成障礙性貧血的基因分別有明顯的地域和種族差異[22]。檢測出αβ復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血基因11例，陽性率0.99%，由于αβ復(fù)合型珠蛋白生成障礙性貧血，往往呈現(xiàn)β珠蛋白生成障礙性貧血的基因特征，容易掩蓋α珠蛋白生成障礙性貧血的一些特征，當β珠蛋白生成障礙性貧血檢測陽性時，建議同時行α珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測，提高其檢測率[23]。本研究中常見的α及β基因缺失類型與文獻報告相符，但本研究中α珠蛋白生成障礙性貧血檢測陽性率高于β珠蛋白生成障礙性貧血，與之前對重慶地區(qū)的報道又有所不同[8，18，24]，可能與重慶經(jīng)濟發(fā)展快人口流動較大、構(gòu)成比例多元化相關(guān)，且本研究數(shù)據(jù)來源僅限于在本院行孕前檢查的患者，這一結(jié)果還不能全面準確反應(yīng)重慶市總的珠蛋白生成障礙性貧血的發(fā)病率、基因類型及分布情況，需要更多區(qū)域的合作研究和更大規(guī)模篩查。但此數(shù)據(jù)資料對本地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血防控計劃提供了有價值的參考。

按國際標準珠蛋白生成障礙性貧血篩查應(yīng)為MCH<27 pg和MCV<78 fL，但往往會造成一部分珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢[25-26]，為提高篩查的靈敏度，本研究取MCV<82 fL或MCH<27 pg為珠蛋白生成障礙性貧血初篩陽性。盡管如此，據(jù)李愛敏等[27]報道在MCV≥82 fL、MCH≥27 pg血液學表型陰性的人群中仍有14.21% 的珠蛋白生成障礙性貧血漏診。研究表明對珠蛋白生成障礙性貧血的診斷MCV或MCH的靈敏度較高，而血紅蛋白電泳的特異度較高，若聯(lián)合檢查，能互補單項檢查的不足，可使篩查結(jié)果更加可靠[28]。故本研究取MCV、MCH、血紅蛋白電泳，任意一項篩查結(jié)果異常者行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測。在制訂珠蛋白生成障礙性貧血防控方案時，為降低后代重型珠蛋白生成障礙性貧血風險，一旦發(fā)現(xiàn)一方為珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者，無論配偶血液學篩查是否陽性均建議行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測。本研究中還發(fā)現(xiàn)，有些血液學篩查陽性高度懷疑珠蛋白生成障礙性貧血者，但基因檢測結(jié)果卻是陰性，據(jù)呂榮鈺等[29]報道常規(guī)基因檢測可能存在1.8%的漏診率，還有5.6%的罕見基因突變。建議對基因檢測陰性又疑似珠蛋白生成障礙性貧血的患者，必要時行常規(guī)基因復(fù)測及罕見基因檢測。由于本研究的不足及技術(shù)條件所限，未行常規(guī)基因復(fù)測及罕見突變基因測序和突變類型分析，故對檢測結(jié)果可能會造成一定影響。

綜上所述，重慶為珠蛋白生成障礙性貧血高發(fā)地區(qū)，珠蛋白生成障礙性貧血篩查是孕前檢查的一項重要內(nèi)容。因此，加強對珠蛋白生成障礙性貧血知識的宣傳普及，做好珠蛋白生成障礙性貧血防治篩查工作,避免漏檢而造成重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒的出生，對提高人口素質(zhì)，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育具有重要作用。

[1]Holmes GP,Kaplan JE,Gantz NM,et al.Chronic fatigue syndrome:a working case definition[J].Ann Intern Med,1988,108(3):387-389.

[2]Fukuda K,Straus SE,Hickie I,et al.The chronic fatigue syndrome:a comprehensive approach to its definition and study.International Chronic Fatigue Syndrome Study Group[J].Ann Intern Med,1994,121(12):953-959.

[3]Smets EM,Garssen B,Bonke B,et al.The multidimensional fatigue inventory (MFI) psychometric qualities of an instrument to assess fatigue[J].J Psychosom Res,1995,39(3):315-325.

[4]徐湘民，廖燦，劉忠英，等．β地中海貧血的大人群篩查及產(chǎn)前診斷[J]．中華醫(yī)學遺傳學雜志，1996，13(5)：258-261,322．

[5]Ghosh A,Tang MH,Lam YH,et al.Ultrasound measurement of placental thickness to detect pregnancies affected by homozygous alpha-thalassaemia-1[J].Lancet,1994,344(8928):988-989.

[6]韋桂源．地中海貧血患兒家長心理健康調(diào)查[J]．廣西醫(yī)學，2012，34(8)：1066-1067．

[7]文傳芳，戴卓婭，陶才莉，等．重慶市璧山區(qū)孕期人群地中海貧血流行病學研究[J]．重慶醫(yī)學，2015，44(9)：1201-1202,1205．

[8]李良瓊，熊見，王長本，等．渝東北區(qū)地中海貧血常見基因類型的調(diào)查研究[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2015，36(6)：753-754,757．

[9]李娟，黃楠．血常規(guī)及Hb電泳在孕期篩查地中海貧血的臨床價值分析[J]．瀘州醫(yī)學院學報，2015，38(3)：264-266．

[10]全國血紅蛋白病研究協(xié)作組．20省、市、自治區(qū)60萬人血紅蛋白病調(diào)查[J]．中華醫(yī)學雜志，1983，63(6)：382-385．

[11]于潔，憲瑩，姚秀云，等．重慶市學齡前兒童α地中海貧血的分子流行病學研究[J]．中華血液學雜志，2014，35(5)：419-423．

[12]藍少華．7 842對孕前優(yōu)生夫婦地中海貧血篩查情況分析[J]．中國醫(yī)藥科學，2015，5(7)：211-213．

[13]劉富華，賈藝聰，陳潔晶，等．廣西地區(qū)13589例地中海貧血篩查結(jié)果及基因突變類型分析[J]．臨床血液學雜志，2015，28(6)：966-969．

[14]林靖，許吟，劉興梅，等．貴陽市新生兒α-地中海貧血篩查及基因型分析[J]．中華圍產(chǎn)醫(yī)學雜志，2015，18(10)：786-788．

[15]Ko TM,Xu X.Molecular study and prenatal diagnosis of alpha-and beta-thalassemias in Chinese[J].J Formos Med Assoc,1998,97(1):5-15.

[16]Xu XM,Zhou YQ,Luo GX,et al.The prevalence and spectrum of alpha and beta thalassaemia in Guangdong Province:implications for the future health burden and population screening[J].J Clin Pathol,2004,57(5):517-522.

[17]姚秀云，張渝美，秦蓁子，等．重慶市漢族兒童β-地中海貧血的分子流行病學研究[J]．中華兒科雜志，2013，51(7)：518-522．

[18]杜偉，歐陽小峰，甘承文，等．重慶地區(qū)8 024例地中海貧血篩查結(jié)果及地貧基因型分析[J]．重慶醫(yī)科大學學報，2014，39(5)：694-697．

[19]黃盛芳，羅盛娟，阮錚艷，等．貴州省都勻市布依族中學生地中海貧血基因攜帶率調(diào)查[J]．中國計劃生育學雜志，2015，23(10)：667-669．

[20]李東明，胡雪樺，黃戰(zhàn)，等．β-地中海貧血表型兒童地中海貧血基因突變分析[J]．中國婦幼保健，2015，30(3)：370-372．[21]許少珍，吳玉，孫有剛，等．瓊海市育齡人群地中海貧血篩查及基因分析[J]．中國熱帶醫(yī)學，2015，15(2)：234-235,240．

[22]杜若甫．中國人群體遺傳學[M]．北京：科學出版社，2004：247-251．

[23]劉綺婷，何秋賢．αβ復(fù)合型地中海貧血的血液學和基因型相關(guān)分析[J]．中國醫(yī)藥指南，2015，13(27)：85-85,86．

[24]何建維，黃恒柳，張燕，等．重慶地區(qū)地中海貧血基因突變類型分析[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35(18)：2488-2489．

[25]張永良，汪偉山，周玉球，等．α-地中海貧血基因型和紅細胞參數(shù)關(guān)系的研究[J]．中華檢驗醫(yī)學雜志，2012，35(5)：418-422．

[26]周麗芳，唐芳，徐建華，等．不同突變型β-地中海貧血基因攜帶者血液學特征分析[J]．中國熱帶醫(yī)學，2014，14(6)：657-660．

[27]李愛敏，唐曙明，陳海霞，等．血液學初篩表型陰性的孕婦地中海貧血基因檢測結(jié)果分析[J]．實驗與檢驗醫(yī)學，2015，33(5)：576-577,591．

[28]梁瑞蓮，周遠青，江秀蘭，等．MCV和Hb電泳聯(lián)合檢測在地中海貧血篩查中的臨床價值[J]．黑龍江醫(yī)學，2013，37(4)：249-252．

[29]呂榮鈺，飛球，陳小文，等．常規(guī)基因檢測陰性的地中海貧血疑似病例再行進一步基因檢測仍有7%的陽性發(fā)現(xiàn)[J]．中國循證兒科雜志，2014，9(4)：274-277．

Analysis on result of genetic screen and gene types of 10 854 cases with thalassemia

HeLi,ZhuXiaofang,WangWei,HuangChan,ZhuXin,LvHongjie,QianJing,ZhangHaiyan△

(DepartmentofWomen′sHealthCare,ChongqingHealthCenterforWomenandChildren，Chongqing400010,China)

Objective To investigate the gene carrying rate,gene type and composition ratio of thalassemia among pre-pregnant population in Chongqing area.Methods A total of 1 054 people were enrolled in the hospital from April 2014 to March 2016 for thalassemia screening.The content of screening included mean corpuscular volume(MCV),mean corpuscular hemoglobin(MCH) and hemoglobin electrophoresis.Thalassemia gene was examined in people with any abnormal term of screening result.Results In 10 854 cases,1 117 cases showed positive in thalassemia primary screening,and the positive rate was 10.29%.458 cases were tested positive of thalassemia gene,the carrying rate of thalassemia was 4.21%.In which,253 cases of pure α-thalassemia were tested.The carrying rate of α-thalassemia was 2.33%.The most common kind in α-thalassemia was --SEAwhose constituent ratio were 52.17%.197 cases of pure β-thalassemia were tested,the carrying rate of β-thalassemia was 1.81%.The most common kind in β-thalassemia was CD17 (A→T),whose constituent ratio were 31.47%.11 cases were diagnosed with αβ-thalassemia.Conclusion Chongqing is high-prevalence area of thalassemia.It is important to conduct thalassemia genetic screen before pregnancy which plays a vital role in improving population quality and achieving prepotency.

alpha-thalassemia;β-thalassemia;genetic screening

何麗(1986-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事婦產(chǎn)科臨床、保健研究。

△通信作者，E-mail:zhangdodo1975@126.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.23.026

R715.5

A

1671-8348(2017)23-3251-03

2017-03-18

2017-04-23)

·調(diào)查報告·