4種血清腫瘤標(biāo)志物及糞便隱血的聯(lián)合檢測(cè)在Dukes B期結(jié)腸癌診斷中的應(yīng)用*

湯 軍,歐俐蘋(píng)，陳 玲，翁亞光，徐增偉，張明昊Δ

(重慶醫(yī)科大學(xué)：1.實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理中心；2.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院/臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400016)

論著·臨床研究

4種血清腫瘤標(biāo)志物及糞便隱血的聯(lián)合檢測(cè)在Dukes B期結(jié)腸癌診斷中的應(yīng)用*

湯 軍1,歐俐蘋(píng)2，陳 玲1，翁亞光2，徐增偉2，張明昊1Δ

(重慶醫(yī)科大學(xué)：1.實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理中心；2.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院/臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400016)

目的 探討血清癌胚抗原(CEA)、糖鏈抗原199(CA199)、糖鏈抗原125(CA125)、甲胎蛋白(AFP) 和糞便隱血聯(lián)合檢測(cè)在Dukes B期結(jié)腸癌中的診斷價(jià)值。方法 檢測(cè)2013年3月至2015年8月56例結(jié)腸癌患者(結(jié)腸癌組)、35例結(jié)腸息肉良性疾病患者(息肉組)、41例體檢健康者(健康對(duì)照組)的上述指標(biāo)及其對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性檢出率。分析5項(xiàng)指標(biāo)單個(gè)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度。結(jié)果 結(jié)腸癌組的血清CEA、CA125、CA199及糞便隱血水平均明顯高于息肉組和健康對(duì)照組(P<0.05)。與息肉組相比，AFP水平及其血清陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血清CEA、CA125、CA199及糞便隱血入選 Logistic回歸方程，對(duì)應(yīng)的曲線下面積分別為0.745、0.886、0.792、0.864，陽(yáng)性檢出率分別為48.2%、35.7%、39.3%和78.6%；聯(lián)合檢測(cè)可使靈敏度、特異度、曲線下面積分別提高到87.5%、92.1%、0.957，顯著優(yōu)于單項(xiàng)檢測(cè)。結(jié)論 CEA、CA199、CA125、隱血聯(lián)合檢測(cè)能為早期診斷結(jié)腸癌提供有力的依據(jù)。

結(jié)腸腫瘤；Logistic模型；癌胚抗原；甲胎蛋白類(lèi)；受試者特征曲線；糞便隱血

結(jié)腸癌是常見(jiàn)的癌癥之一，由于其早期癥狀隱匿，患者就診時(shí)多數(shù)已是中晚期，臨床療效有限，因此早期的診斷與篩查變得尤為重要[1-2]。血清腫瘤標(biāo)志物具有高效、無(wú)創(chuàng)等特點(diǎn)，其在癌癥的診斷中發(fā)揮了重要作用。目前結(jié)腸癌常用輔助診斷的腫瘤標(biāo)志物有癌胚抗原(CEA)、糖鏈抗原199(CA199)、糖鏈抗原 125(CA125)和甲胎蛋白(AFP)等。糞便隱血試驗(yàn)簡(jiǎn)單易行，《中國(guó)結(jié)直腸腫瘤的篩查、早期治療和綜合性預(yù)防共識(shí)意見(jiàn)》推薦進(jìn)行序貫隱血試驗(yàn)[3]。在檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物基礎(chǔ)上加做隱血試驗(yàn)聯(lián)合診斷可提高患者的檢出率，本文探討了血清CEA、CA199、CA125、AFP與隱血的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)腸癌的診斷價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年3月至2015年8月在重慶醫(yī)科大學(xué)北碚附屬醫(yī)院住院的結(jié)腸癌患者56例，男34例，女22例，年齡34～83歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)手術(shù)病理學(xué)確診均為腺癌，Dukes分期(1935年)為B期[4]，排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病、高血壓、冠心病、慢性呼吸系統(tǒng)疾病和其他癌癥患者。結(jié)腸癌中早期特別是Dukes B期患者比例較高，早期診斷、早治療疾病對(duì)預(yù)后有積極作用。因此探討此期患者的血清腫瘤標(biāo)志物、隱血及聯(lián)合診斷的意義在于提高結(jié)腸癌的診斷率，并提高患者的生存率。

表1 各組糞便隱血及各腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果[M(Q1～Q3)]

a：3代表隱血+++，2代表隱血++，0代表隱血-；P1為息肉組與結(jié)腸癌組比較，P2為健康對(duì)照組與結(jié)腸癌組比較

表2 各組糞便隱血、及各腫瘤標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率[n(%)]

χ12、P1為息肉組與結(jié)腸癌組比較，χ22、P2為健康對(duì)照組與結(jié)腸癌組比較

同期結(jié)腸息肉或健康對(duì)照組的檢驗(yàn)結(jié)果作為對(duì)照，排除標(biāo)準(zhǔn)同上。息肉組35例：男25例，女10例，年齡49～88歲。健康對(duì)照組41例:男30例，女11例，年齡49～84歲。各組在性別比例和年齡結(jié)構(gòu)上比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有對(duì)象均知情同意，研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 儀器與試劑 采集受試者清晨空腹靜脈血3 mL，5 000 r/min離心10 min，分離血清。采用美國(guó)亞培公司Archetecti2000sr全自動(dòng)免疫分析儀，上機(jī)檢測(cè)CEA、CA199、CA125和AFP；采用HALO-F180全自動(dòng)大便分析儀，化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)隱血。試劑均為廠家配套的原裝進(jìn)口產(chǎn)品，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按規(guī)程進(jìn)行。血清腫瘤標(biāo)志物正常參考范圍為CEA<5 ng/mL，CA199<37 U/mL，CA125<35 U/mL，AFP<13.4 ng/mL，隱血的靈敏度閾值為0.3 ng/mL。將各標(biāo)志物水平大于或等于臨界值判定為陽(yáng)性，聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，其中任何一項(xiàng)陽(yáng)性即視聯(lián)合檢測(cè)為陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.1 不同標(biāo)志物在各組間的表達(dá)水平及差異 糞便隱血、CEA、CA125、C199、AFP數(shù)據(jù)均為偏態(tài)分布，其數(shù)據(jù)采用[M(Q1～Q3)]來(lái)表示。結(jié)腸癌組5項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果和健康對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與息肉組相比，糞便隱血、CEA、CA125、CA199的檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而AFP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 糞便隱血及腫瘤標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率 糞便隱血、CA125、CEA、CA199在結(jié)腸癌組陽(yáng)性檢出率分別為78.6%、35.7%、48.2%、39.3%，均高于息肉組或健康對(duì)照組(P<0.05)；5項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率高達(dá)87.5%，高于息肉組與健康對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)腸癌組的AFP陽(yáng)性率為8.9%，與息肉組AFP陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但高于健康對(duì)照組(由于健康對(duì)照組樣本量大于息肉組，所以差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)的AFP陽(yáng)性率(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)及糞便隱血的Logistic回歸 單因素Logistic回歸分析，糞便隱血可導(dǎo)致患結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)約為健康人群的4倍(4.330，95%CI：2.819～6.651)，而CA125、CEA、CA199、AFP的增高可使患結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)為健康人群的1倍多，見(jiàn)表3。

表3 糞便隱血、CA125、CEA、CA199和AFP與結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系

根據(jù)表2，AFP在結(jié)腸癌組及息肉組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，因此，剔除AFP，以糞便隱血、CA125、CEA和CA199為協(xié)變量生成新變量，以病理診斷結(jié)果為應(yīng)變量，用向后刪除法作二項(xiàng)分類(lèi) Logistic 回歸分析。根據(jù)4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷結(jié)腸癌,預(yù)測(cè)疾病概率，計(jì)算其靈敏度和特異度。

因變量為二分類(lèi)變量，息肉組與健康對(duì)照組均為0，結(jié)腸癌標(biāo)記為1，自變量分別為隱血、CA199、CEA和CA125檢測(cè)值。得到Logistic 回歸方程為：LogitP=-3.242+1.28X1+0.08X2+0.071X3+0.015X4；其中生成的新變量為4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷結(jié)腸癌的預(yù)測(cè)概率，X1=糞便隱血，X2=CEA，X3=CA125，X4=CA199。多因素Logistic分析結(jié)果顯示CA125值(P<0.05)和隱血值(P<0.05)的升高為結(jié)腸癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表4。

2.4 各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物及隱血對(duì)結(jié)腸癌診斷的靈敏度、特異度和ROC曲線 采用SPSS17．0對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，做出ROC曲線，得出AUC，隱血、CEA、CA125、CA199、AFP曲線下面積均大于0.5(圖1)。單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)中，CA125的AUC最大為0.886，靈敏度為85.7%，特異度為75.0%。隱血的AUC為0.864.靈敏度為78.6%，特異度為93.4%。CEA的特異度最高為94.7%,見(jiàn)表5。CA199、CEA、CA125及隱血聯(lián)合的Logistic回歸曲線轉(zhuǎn)化參數(shù)Y1繪制ROC曲線，發(fā)現(xiàn)4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的AUC大于各單項(xiàng)檢測(cè)的AUC，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的AUC達(dá)到0.957,靈敏度為87.5%，特異度為92.1%。

表4 多因素Logistic 回歸方程變量系數(shù)及結(jié)果

表5 隱血、CEA、CA125、CA199和AFP對(duì)診斷結(jié)腸癌的靈敏度、特異度和AUC

圖1 預(yù)測(cè)結(jié)腸癌的ROC曲線

3 討 論

在2010年，我國(guó)有超過(guò)27萬(wàn)的新發(fā)結(jié)直腸癌患者，死亡病例超過(guò)13萬(wàn)[5]。2015年文獻(xiàn)報(bào)道，結(jié)腸癌在所有癌癥中的發(fā)病率及病死率分別占8%，均排到第3位[1]。因此針對(duì)結(jié)腸癌早期篩查尤為關(guān)鍵。腫瘤標(biāo)志物是在腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中由腫瘤細(xì)胞生物合成、釋放或是宿主對(duì)癌類(lèi)反應(yīng)性的一類(lèi)物質(zhì)，它只是與腫瘤有相關(guān)的抗原，而非腫瘤的特異性抗原，在一定程度上能夠反映腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，可在腫瘤病變組織、血液和排泄物中檢出[6]。目前指南推薦使用糞便檢查和結(jié)構(gòu)性檢查篩查大腸癌，與結(jié)腸鏡檢查相比，糞便隱血試驗(yàn)具有簡(jiǎn)便性和低成本等特點(diǎn)[7]。然而有研發(fā)現(xiàn)糞便隱血檢測(cè)與結(jié)腸癌檢測(cè)并無(wú)相關(guān)性[8]。有學(xué)者檢索從1990年6月1日至2014年12月31日正式發(fā)表的803 000篇文獻(xiàn)，最終入選19篇文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)免疫化學(xué)法分析糞便隱血對(duì)結(jié)直腸癌診斷的靈敏度范圍為0.42～0.94，特異度范圍為0.40～1.00。Guaiac試驗(yàn)測(cè)試糞便隱血對(duì)結(jié)腸息肉診斷的靈敏度為0.05～0.69，特異度為0.67～0.98[9]。本研究中隱血診斷Dukes B期結(jié)腸癌的靈敏度、特異度和ROC曲線下面積分別是78.6%、93.42%、0.864。為進(jìn)一步證實(shí)糞便隱血對(duì)于Dukes B期結(jié)腸癌及癌前病變的早期篩查有重要意義。

CA199是一種對(duì)胰腺癌具有高度特異性的標(biāo)志物[10]。潘桂蘭等[6]報(bào)道指出在結(jié)腸癌診斷方面，CA199可以作為結(jié)腸癌患者獨(dú)立判斷預(yù)后的指標(biāo)，但其靈敏度較CEA低。CEA是一種酸性糖蛋白，其升高常見(jiàn)于胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌等[11]。顧勇等[12]研究顯示CEA在結(jié)腸癌患者血清中的靈敏度為54.1%、特異度為85.7%。本研究中CA199與CEA診斷Dukes B期結(jié)腸癌的靈敏度、特異度和AUC分別為85.7%、64.5%、0.792，46.4%、94.7%、0.745。本研究中發(fā)現(xiàn)CA199在診斷Dukes B期結(jié)腸癌時(shí)靈敏度高于CEA，與CA125一致。CA125早在1983 年被發(fā)現(xiàn)，一般用作卵巢癌診斷的腫瘤標(biāo)志物[13]。近年來(lái)也把血清CA125的測(cè)定應(yīng)用于結(jié)腸癌的研究。本研究顯示CA125在診斷Dukes B期結(jié)腸癌時(shí)的靈敏度、特異度和AUC分別為85.7%、75.0%和0.886。通常采用AUC來(lái)評(píng)價(jià)指標(biāo)的價(jià)值，AUC值越大，試驗(yàn)的準(zhǔn)確度越大，AUC超過(guò)0.5，診斷有意義；AUC在0.5～<0.7，代表其診斷準(zhǔn)確度較低；AUC在0.7～0.9，代表其準(zhǔn)確度中等；AUC>0.9 時(shí)，診斷具有高準(zhǔn)確度。CA125的AUC、靈敏度和特異度均較好。

在本研究中比較結(jié)腸癌與息肉組時(shí)，兩者血清AFP水平無(wú)明顯差異。結(jié)腸癌組與息肉組或健康對(duì)照組比較時(shí)，AFP陽(yáng)性檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。顧勇等[12]研究同樣提示結(jié)腸癌患者血清CEA、CA19-9和CA125水平明顯升高,而AFP無(wú)明顯差異。因此在聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，本研究剔除AFP指標(biāo)，聯(lián)合隱血、CEA、CA125及CA199進(jìn)行Logistics回歸預(yù)測(cè)結(jié)腸癌發(fā)病率，繪制ROC曲線，ROC曲線縱坐標(biāo)為不同截?cái)帱c(diǎn)的靈敏度，橫坐標(biāo)為1-特異度，4項(xiàng)標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，可使敏感度、特異度、AUC分別提高到87.5%、92.1%、0.957，明顯優(yōu)于單項(xiàng)檢測(cè)。為結(jié)腸癌的聯(lián)合檢測(cè)診斷提供有力的依據(jù)。

結(jié)腸癌通常在晚期被確診，給疾病治療帶來(lái)巨大的困難，因此早期診斷尤為重要。本研究選取Dukes B期的結(jié)腸癌患者，分析其隱血指標(biāo)及血清腫瘤標(biāo)志物，研究其靈敏度、特異度、有效率，取得了一定的成果。但由于數(shù)據(jù)采集中嚴(yán)格控制入組患者疾病分期，并且確保臨床樣本年齡結(jié)構(gòu)一致性，導(dǎo)致入組樣本量較小。期待后期試驗(yàn)?zāi)軘U(kuò)大樣本量，并聯(lián)合結(jié)直腸鏡及隨訪深入研究，為結(jié)腸癌的早期診斷、療效評(píng)估提供更有力的依據(jù)。

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Application of combined detection of serum CEA,CA199,CA125AFP and fecal occult blood in diagnosis of Dukes B stage colon carcinoma*

TangJun1,OuLiping2,ChenLing1,WengYaguang2,XuZengwei2,ZhangMinghao1△

(1.CenterforLabTeaching&Management;2.KeyLaboratoryofMedicalDiagnosticsofMinistryofEducation,CollegeofLaboratoryMedicine,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

Objective To study the diagnostic value of combined detection of serum CEA,CA199,CA125,AFP and fecal occult blood(FOB) in Dukes B stage colon carcinoma．Methods The above indicators in 56 patients with colon carcinoma (colon carcinoma group),35 patients with colonic polyp benign disease and 41 healthy individuals undergoing physical examination were measured.Then the sensitivity,and specificity of single index detection and their combined detection were analyzed.Results The levels and positive rates of CEA,CA199,CA125 and FOB in the colon cancer group were significantly higher than those in the colonic polyp group and healthy control group (P<0.05),but the AFP level and positive rate had no statistical difference compared with the colonic polyp group.Serum CEA,CA125,CA199 and FOB were selected into the Logistic regression equation.The corresponding areas under the curve (AUC) were 0.745,0.886,0.792 and 0.864 respectively;the positive detection rates were 48.2%,35.7%,39.3% and 78.6% respectively.The combined detection could increased the specificity，sensitivity and AUC to 87.5%，92.1% and 0.957，which were more superior to that in the single index detection.Conclusion The combined detection of serum CEA,CA199,CA125 and FOB can provide the powerful basis for early diagnosing colonic cancer.

colonic neoplasms;Logistic model;carcinoembryonic antigen；alpha-fetoproteins；receiver operative characteristic curve；fecal occult blood

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.22.015

重慶市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)社會(huì)事業(yè)與民生保障科技創(chuàng)新專(zhuān)項(xiàng)(cstc2015shmszx120069)；重慶市衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)會(huì)重點(diǎn)項(xiàng)目(YWJK2017-1)；重慶市沙坪壩區(qū)科學(xué)技術(shù)委員會(huì)科技項(xiàng)目(KP201513,KP201610)；重慶醫(yī)科大學(xué)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)基金項(xiàng)目(2015-56)。 作者簡(jiǎn)介：湯軍(1983-)，助理實(shí)驗(yàn)師，碩士，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化在疾病診療中的價(jià)值研究?！?/p>

，E-mail:346360049@qq.com。

R753.3+5

A

1671-8348(2017)22-3073-04

2016-12-23

2017-03-11)