制作漿膜腔積液標(biāo)本液基細(xì)胞學(xué)病理涂片相關(guān)技術(shù)探討

李孜孜　朱淑琴

【摘要】 漿膜腔積液液基薄層細(xì)胞涂片制作是一項(xiàng)需要謹(jǐn)慎的態(tài)度和高超技巧的工作， 在實(shí)際工作中采用不同的制片方式， 制作出優(yōu)質(zhì)的漿膜腔液基細(xì)胞學(xué)涂片， 可為病理診斷提供支持。

【關(guān)鍵詞】 漿膜腔積液；液基薄層細(xì)胞制片術(shù)；病理

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.23.117

Investigation of related production techniques of serous effusion specimens liquid-based cytology pathology smear LI Zi-zi， ZHU Shu-qin. Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat - sen University， Zhuhai 519000， China

【Abstract】 Serous fluid-based thin-layer cell smear production needs careful attitude and superb skills. Different production methods should be adopted in practical work to produce high-quality serous liquid-based cytology smear and provide support for pathological diagnosis.

【Key words】 Serous effusion； Liquid based thin-layer cell preparation； Pathology

液基薄層細(xì)胞制片術(shù)是一種較先進(jìn)的細(xì)胞學(xué)檢查（病理學(xué)檢查）， 通過分離提取和細(xì)胞的自然沉降， 克服了傳統(tǒng)制片技術(shù)存在的材料太厚、細(xì)胞重疊、背景模糊和染色不佳等問題[1-4]。而細(xì)胞學(xué)檢查以標(biāo)本容易獲得、無創(chuàng)在臨床廣泛的應(yīng)用。

1 標(biāo)本采集

從患者中抽取約120 ml標(biāo)本至細(xì)胞保存瓶， 擰緊瓶蓋， 并適當(dāng)搖晃， 以便保存瓶中的抗凝劑與標(biāo)本混勻。在瓶壁上備注患者姓名、年齡、取樣日期， 填寫好申請(qǐng)單并及時(shí)送檢。

2 方法

2. 1 機(jī)器法 ①在50 ml離心管、12 ml離心管及申請(qǐng)單上注上相應(yīng)編號(hào)， 搖勻標(biāo)本后轉(zhuǎn)移50 ml樣本至50 ml離心管。②第一次離心600 g、10 min。③棄上清液， 置漩渦混合器上震蕩約30 s， 往50 ml離心管中加入3～4 ml細(xì)胞保存液（對(duì)細(xì)胞起固定作用）， 用軟吸管將標(biāo)本混勻后轉(zhuǎn)移至12 ml離心管。④第二次離心600 g、5 min。⑤棄上清液， 置漩渦混合器上震蕩約30 s。⑥將處理好的載玻片放置染色板上并扣上制片染色艙， 在載玻片上注上相應(yīng)編號(hào)。使用LBP SYSTEM液基細(xì)胞沉降式自動(dòng)制片染色系統(tǒng)進(jìn)行制片及染色， 采用巴氏染色法：染色時(shí)間與婦科不同， 一般建議蘇木素染色8～15 s， EA-OG染色35～55 s[5]。⑦拆除制片染色艙， 將完成制片染色的樣片插入無水乙醇缸中的玻片架上進(jìn)行脫水約30 s。放入透明劑透明約5 min以上， 中性樹膠濕式封片（透明劑有二甲苯、環(huán)保脫蠟透明劑TO等）。

備注：血性標(biāo)本處理方法（第一次離心并棄上清液后血紅細(xì)胞≥1 ml）：第一次離心后用軟吸管棄上清液（注意傾倒力度）， 用軟吸管將50 ml離心管中的中間細(xì)胞層（即血紅細(xì)胞與上清液的交界處， 約1～2 mm高）轉(zhuǎn)移至12 ml離心管， 往12 ml離心管中加入3～4 ml細(xì)胞保存液（對(duì)細(xì)胞起固定作用）。

2. 2 手工法 ①收集標(biāo)本：震蕩>30 s（目的：使宮頸刷上的細(xì)胞震落到保存液當(dāng)中；打散黏液和血液）。②編號(hào)：把保存瓶中上的編號(hào)信息轉(zhuǎn)移到12 ml離心管上。③用自動(dòng)樣本轉(zhuǎn)移機(jī)轉(zhuǎn)移標(biāo)本：12 ml離心管加入4 ml細(xì)胞分離提取液， 把離心管、移液器、保存瓶放到樣本轉(zhuǎn)移機(jī)相對(duì)應(yīng)的位置。設(shè)置相關(guān)參數(shù)， 運(yùn)行。④第一次離心：程序一， 離心力200 g， 時(shí)間2 min（目的：去除雜質(zhì)）[6， 7]。⑤用真空廢液裝置洗掉上層雜質(zhì)。⑥第二次離心：程序二， 離心力800 g， 時(shí)間10 min（目的：富集細(xì)胞）。⑦倒掉上清液， 觀察細(xì)胞量的多少。較多者加1～2滴緩沖液， 較少者做標(biāo)記。⑧在震蕩器上震散細(xì)胞團(tuán)。⑨手工染色操作：a.在手工染色板上放好載玻片， 套上制片染色倉， 寫好編號(hào)；b.往制片染色倉中加入少量緩沖液（目的：為了在后面沉降過程中， 使細(xì)胞平鋪均勻）；c.用移液槍轉(zhuǎn)移標(biāo)本置于制片染色倉當(dāng)中（轉(zhuǎn)移量視標(biāo)本中的細(xì)胞量而定）；d. 自然沉降（10 min）——無水乙醇（固定作用）——緩沖液沖洗（2次）——蘇木素染色（60～80 s， 染細(xì)胞核）——緩沖液洗（2次）——無水乙醇洗（2次）——EA-OG染色（120～180 s， 染胞漿）——無水乙醇洗（2次）[8]；e.取片， 浸泡在無水乙醇中進(jìn)行脫水， 浸泡在透明劑中進(jìn)行透明[常用透明劑：二甲苯（5 min）、TO生物透明劑（10 min）]， 封片晾干。

3 討論

天氣較為炎熱時(shí)， 待檢測(cè)漿膜腔積液的保存瓶存放時(shí)間≤6 h， 如果需要過夜需在冷藏（4℃）。血性標(biāo)本應(yīng)先用緩沖液稀釋， 第一次離心并棄上清液后血紅細(xì)胞≥1 ml， 第一次離心后用軟吸管棄上清液（注意傾倒力度）， 用軟吸管將50 ml離心管中的中間細(xì)胞層（即血紅細(xì)胞與上清液的交界處， 約1～2 mm

高）轉(zhuǎn)移至12 ml離心管， 往12 ml離心管中加入3～4 ml細(xì)胞保存液（對(duì)細(xì)胞起固定作用）[9-11]。

總之， 制作漿膜腔積液液基薄層細(xì)胞涂片制作是一項(xiàng)需要謹(jǐn)慎的態(tài)度和高超技巧的工作， 需要病理技術(shù)人員長(zhǎng)期的練習(xí)和摸索， 并在實(shí)際工作中針對(duì)不同送檢采用不同的制片方式， 不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)問題及解決問題。這不僅體現(xiàn)了醫(yī)務(wù)者精益求精的態(tài)度， 更體現(xiàn)了醫(yī)務(wù)工作者的責(zé)任心。只有通過這樣不斷的努力和鉆研才能制作出精良的病理切片， 為病理診斷提供保障。

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[收稿日期：2017-05-02]endprint