NMBzAz誘導(dǎo)大鼠食管癌動物模型相關(guān)的分子機(jī)制探討

賀嬋婷+張玲

[摘要] 目的 探討甲基芐基亞硝胺（NMBzAz）誘導(dǎo)大鼠食管癌動物模型相關(guān)的分子機(jī)制。方法 2015年1月—2016年10月期間，該校病理學(xué)教研室選擇90只健康清潔級 SD 大鼠作為研究動物，隨機(jī)將90只大鼠分為觀察組和對照組，各45只。該組大鼠雌雄各半，均為8 周齡。觀察組大鼠：將甲基芐基亞硝胺（按5 mg/kg）加入2 mL純凈水中，食管內(nèi)灌注；對照組大鼠：食管灌注2 mL純凈水；兩組均灌注1次/周，連續(xù)灌注30周。實(shí)驗(yàn)后10、20周和30周時(shí)間點(diǎn)，兩組各宰殺15只大鼠，取食管組織，常規(guī)行病理學(xué)檢查，查看兩組食管癌發(fā)病情況。同時(shí)，提取食管組織總RNA，統(tǒng)計(jì)兩組不同時(shí)間段大鼠survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 經(jīng)病理證實(shí)：對照組無大鼠罹患食管癌，觀察組實(shí)驗(yàn)10周（26.67%）、20周（53.33%）、30周（86.67%）后食管癌發(fā)病率均高于對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組實(shí)驗(yàn)10周（0.25±0.09）、20周（0.26±0.11）、30周后（0.24±0.10）食管組織survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平均高于對照組[（0.44±0.18）、（0.46±0.16）、（0.47±0.017）]，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 NMBzAz誘導(dǎo)大鼠食管癌動物模型與survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平提升存在密切聯(lián)系，可為食管癌分子靶向治療提供參考依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] NMBzAz；大鼠食管癌；動物模型；分子機(jī)制

[中圖分類號] R735.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）06（b）-0030-03

[Abstract] Objective To study the NMBzAz induced rat esophageal cancer animal model related molecular mechanism. Methods 90 cases of healthy SD rats in the pathological teaching and research room in our school from January 2015 to October 2016 were selected and randomly divided into two groups with 45 cases in each， and half of rats were females and half of rats were males， and all rates were 8 weeks， the rats in the observation group： methylbenzylnitrosamine 5 mg/kg was put into 2ml pure water， esophageal infusion， rats in the control group： esophageal infusion of 2ml pure water， once every two weeks for consecutive 30 weeks， and 15 rats were killed in 10 weeks， 20 weeks and 30 weeks after test and the esophageal tissues were taken and were given the routine pathological examination， and the incidence of esophageal cancer was searched， at the same time， the total RNA of esophageal tissues was taken out， and the survivin mRNA transcriptional level of rats at different time phases was counted. Results The pathology proved that there were no rats with esophageal cancer， and the morbidity of esophageal cancer in 10 weeks （26.67%）， 20 weeks （53.33%）and 30 weeks （86.67%）were higher than those in the control group（P<0.05）， and the survivin mRNA transcriptional levels in 10 weeks （0.25±0.09）， 20 weeks （0.26±0.11） and 30 weeks （0.24±0.10） in the observation group were higher than those in the control group[（0.44±0.18）、（0.46±0.16）、（0.47±0.017）]， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion NMBzAz induced rat esophageal cancer animal model is closely related to the improvement of survivin mRNA transcriptional level， which can provide basis for the targeted treatment of esophageal cancer molecules.

[Key words] NMBzAz； Rat esophageal cancer； Animal model； Molecular mechanism

NMBzAz是一種亞硝胺類化合物，是與食管癌發(fā)病關(guān)系最密切的硝酸鹽類物質(zhì)，其在誘導(dǎo)動物食管癌試驗(yàn)中應(yīng)用較多，建模效果較好[1]。但是，目前尚未探明NMBzAz誘導(dǎo)食管癌動物模型的分子機(jī)制，而這一機(jī)制的探明對于人類食管癌治療具有重要意義[2]。為此，2015年1月—2016年10月期間，該校病理學(xué)教研室探索NMBzAz誘導(dǎo)大鼠食管癌的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

選擇河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心購進(jìn)的90只健康清潔級 SD 大鼠作為研究動物，隨機(jī)將90只大鼠分為觀察組和對照組，各45只。該組大鼠雌雄各半，均為8 周齡。觀察組，雌雄各半，體重 160～210 g，平均（185.13±25.01）g。對照組，雌雄各半，體重 170～210 g，平均（180.03±20.12）g。兩組樣本在體重、性別等一般資料方面，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

觀察組大鼠：自由取食，將甲基芐基亞硝胺（國藥準(zhǔn)字H32026237）（按5 mg/kg）加入2 mL純凈水中，食管內(nèi)灌注，1次/周，連續(xù)灌注30周；對照組大鼠：自由取食，食管灌注2 mL純凈水，1次/周，連續(xù)灌注30周。兩組大鼠實(shí)驗(yàn)室平均溫度為（22±2）℃，相對濕度60% ，均使用普通飼料。

1.3 研究方法

實(shí)驗(yàn)后10、20周和30周時(shí)間點(diǎn)，兩組各宰殺15只大鼠，戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后處死，將食管縱行剖開，取食管組織，常規(guī)行病理學(xué)檢查，查看兩組食管癌發(fā)病情況。同時(shí)，取100 mg中段食管保存于RNA-guard中，提取食管組織總RNA，采用異硫氰酸肌法（Trizol法）進(jìn)行survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測，統(tǒng)計(jì)兩組不同時(shí)間段大鼠survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

該次研究采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析所有數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，用（x±s）表示；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，用[n（%）]表示，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組不同時(shí)間段大鼠食管癌發(fā)病率比較

經(jīng)病理證實(shí)：對照組無大鼠罹患食管癌，觀察組實(shí)驗(yàn)10周（26.67%）、20周（53.33%）、30周（86.67%）后食管癌發(fā)病率均高于對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組實(shí)驗(yàn)30周后食管癌發(fā)病率最高，顯著高于10周和20周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組不同時(shí)間段大鼠survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平

觀察組實(shí)驗(yàn)10、20、30周后食管組織survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平均高于對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組實(shí)驗(yàn)10、20、30周后survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

亞硝胺類化合物是一種極強(qiáng)的強(qiáng)致癌污染物，可誘導(dǎo)食管癌發(fā)生，而在大鼠食管癌動物模型誘導(dǎo)中，NMBzAz最為常用，可較好的大鼠食管癌動物模型[3]。曾有專家提出，采用NMBzAz誘導(dǎo)了大鼠食管癌動物模型可明顯提高食管癌發(fā)病率，周期越長發(fā)病率逐漸增加，經(jīng)過10周后觀察其發(fā)病率僅有28.70%，20周后發(fā)病率有所增加達(dá)到58.20%，30周后可高達(dá)88.50%[4]。該文結(jié)果顯示，觀察組食管癌發(fā)病率均高于對照組（無大鼠罹患食管癌），與專家提出數(shù)據(jù)相符合，且觀察組實(shí)驗(yàn)30周后食管癌發(fā)病率最高，顯著高于10周和20周（P<0.05），可知經(jīng)過30周的NMBzAz誘導(dǎo)，可成功建立大鼠食管癌模型，而10周和20周效果不夠理想，NMBzAz灌注后10周→20周→30周，食管癌發(fā)病率呈持續(xù)上升趨勢。

食管癌的發(fā)生與最強(qiáng)凋亡抑制因子——surviving密切相關(guān)，而大鼠食管癌動物模型存在明顯的survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高表現(xiàn)，較正常大鼠升高50%～200%[5]。該次研究可知NMBzAz誘導(dǎo)后大鼠食管組織始終處于survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平較高的水平，同時(shí)出現(xiàn)了食管癌發(fā)病率呈持續(xù)上升表現(xiàn)，可知大鼠食管癌發(fā)病與survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高存在密切聯(lián)系。但是，目前survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平導(dǎo)致大鼠食管癌發(fā)病的作用機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步探明[6-7]。NMBzAz誘導(dǎo)大鼠食管癌后survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高，為現(xiàn)代分子靶向治療提供新的作用點(diǎn)，可以通過靶向治療抑制survivin，從而控制食管癌進(jìn)展，臨床應(yīng)用前景較好[8]。

綜上所述，NMBzAz誘導(dǎo)大鼠食管癌動物模型與survivin mRNA轉(zhuǎn)錄水平提升存在密切聯(lián)系，可為食管癌分子靶向治療提供參考依據(jù)。

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（收稿日期：2017-03-19）