食管癌組織中VEGF與MMP- 2的表達及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

葛 威 于在誠 張仁泉 康寧寧 萬 軍 司盼盼

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科，安徽 合肥 230000)

食管癌組織中VEGF與MMP- 2的表達及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

葛 威 于在誠 張仁泉 康寧寧 萬 軍 司盼盼

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科，安徽 合肥 230000)

目的 探討食管癌組織中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)- 2的表達水平及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 133例食管癌患者為實驗組，30例食管良性病變患者為對照組，采用免疫組織化學(xué)法測定兩組組織標(biāo)本中VEGF、MMP- 2表達水平，并分析其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果 VEGF、MMP- 2主要在病變組織細胞的胞質(zhì)中表達陽性，且實驗組陽性表達率高于對照組(P<0.05)。高分化、Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者組織標(biāo)本VEGF、MMP- 2陽性表達率高于中、低分化、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌患者(P<0.05)。經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，VEGF與MMP- 2呈正相關(guān)(r=0.339，P<0.05)。結(jié)論 食管癌組織中VEGF、MMP- 2水平呈高表達，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，聯(lián)合檢測有助于早期診斷食管癌、評估患者預(yù)后。

食管癌；血管內(nèi)皮生長因子；基質(zhì)金屬蛋白酶- 2；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

食管癌早期缺乏特異性的臨床癥狀和體征，很多患者被確診時已處于中晚期，延誤了治療的最佳時機。研究表明，多種因素共同作用參與了惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，其中腫瘤浸潤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩個生物學(xué)特征對惡性腫瘤的治療以及預(yù)后有重要的影響〔1〕。在腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤組織內(nèi)的血管生成與其聯(lián)系緊密。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是血管通透性因子，主要在乳腺癌、大腸癌等惡性腫瘤組織中呈高度表達，在血管通透能力提高后引起新血管快速繁殖擴散，VEGF的高表達是影響患者預(yù)后以及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素〔2〕?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)- 2是一種可使各種細胞外基質(zhì)以及基底膜降解的未被糖化的明膠酶，主要功能是使Ⅳ型膠原降解。報道顯示〔3〕，MMP- 2可在一定程度上促進惡性腫瘤細胞向其他組織侵襲以及轉(zhuǎn)移。關(guān)于VEGF、MMP- 2在食管癌組織中的表達情況及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究，目前相關(guān)的報道相對較少。本文旨在探討其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年8月至2016年8月安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的133例食管癌患者的組織標(biāo)本為實驗組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診；②術(shù)前未經(jīng)任何放化療治療；③未接受可能影響本研究結(jié)果的藥物治療者；④患者及家屬簽署知情同意書；⑤獲得醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期及哺乳期的婦女；②心功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④合并有其他惡性腫瘤。其中男72例，女61例；年齡43～79〔平均(51.37±12.50)〕歲；分化程度：高分化45例，中、低分化88例；TNM分期〔4〕：Ⅰ+Ⅱ期73例，Ⅲ+Ⅳ期60例；組織學(xué)類型：57例鱗癌，41例腺癌，35例小細胞癌；57例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，76例未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。于同期隨機選取30例術(shù)后經(jīng)病理組織學(xué)檢查證實為食管良性病變患者的組織標(biāo)本為對照組，其中男19例，女11例；年齡38～75〔平均(48.92±14.11)〕歲。兩組性別及年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 試劑 兔抗人VEGF抗體(美國Antibody diagnosis公司)、鼠抗人MMP- 2抗體(美國Chemicon公司)。

1.2.2 檢測方法 對組織標(biāo)本采用免疫組織化學(xué)染色，即將制作好的組織切片標(biāo)本經(jīng)過脫蠟和水化處理，采用組織抗原微波進行修復(fù)，加入10%的羊血清封閉，滴加一抗后在4℃的環(huán)境下過夜，然后加入生物素標(biāo)記的二抗，在室溫下孵育10 min后滴加過氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min，各個步驟之間均以磷酸鹽緩沖液(PBS)持續(xù)沖洗5 min，連續(xù)沖洗3次，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色后進行脫水、透明以及封片處理。以PBS代替一抗染色的標(biāo)本作為陰性對照標(biāo)本，以VEGF、MMP- 2表達結(jié)果顯示為陽性的食管癌組織為陽性標(biāo)本。

1.3 評價標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)細胞的染色程度進行評分，其中0分為細胞未顯色，1分為細胞染色為黃色，2分為細胞染色為棕黃色，3分為細胞染色為明顯的棕褐色；根據(jù)VEGF、MMP- 2陽性細胞數(shù)目占切片細胞的比例進行評分，其中0分為陽性細胞數(shù)目的比例≤5%，1分為比例在6%～25%，2分為比例在26%～50%，3分為比例在51%～75%，4分為比例≥76%。將染色程度評分與陽性細胞比例評分相加，陽性為評分之和>3分，陰性為評分之和≤3分〔5〕。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件進行t及χ2檢驗、Spearman秩相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF與MMP- 2在病變組織中的表達情況 VEGF、MMP- 2主要在病變組織細胞的胞質(zhì)中表達陽性，并且實驗組陽性表達率〔105例(78.95%)，79例(59.40%)〕高于對照組〔7例(23.33%)，5例(16.67%)；χ2=35.216,17.896；均P<0.001〕。

2.2 VEGF、MMP- 2陽性表達率與臨床病理特征的關(guān)系 高分化、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者組織標(biāo)本中VEGF、MMP- 2陽性表達率高于中、低分化、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者(P<0.05)，不同性別、年齡、組織學(xué)類型食管癌患者組織標(biāo)本中VEGF、MMP- 2陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3 VEGF、MMP- 2的相關(guān)性分析 VEGF與MMP- 2呈正相關(guān)(r=0.339，P<0.05)。

表1 VEGF、MMP- 2陽性表達率與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

在血源性擴散時，腫瘤細胞通過淋巴細胞進行擴散進而形成淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，臨床上確診的食管癌多數(shù)伴有淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，頸部淋巴結(jié)狀態(tài)是決定預(yù)后和治療方法的關(guān)鍵之一〔6〕。惡性腫瘤細胞的擴散轉(zhuǎn)移過程中，蛋白類物質(zhì)以及多種細胞因子參與到其中。VEGF作為血小板源性生長因子家族成員，具有高度的特異性，可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞的分裂和增殖，作為重要的血管內(nèi)皮生長刺激因子參與了腫瘤血管的形成過程，同時，VEGF還可增加血管的通透性，促進血管的生成以及新基質(zhì)的形成〔7〕。研究表明〔8〕，VEGF的表達可以評估血管上皮細胞的增殖、生長以及轉(zhuǎn)移，同時還能有效評估病變部位腫瘤細胞的生長速度以及轉(zhuǎn)移方向等。在惡性腫瘤細胞中，VEGF呈高度表達，并且其與腫瘤的侵襲性轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)〔9〕。MMP具有使細胞外基質(zhì)降解的功能，同時也能促進腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移以及血管的生成。MMP- 2屬于Ⅳ型膠原酶，在腫瘤細胞基底膜、外基質(zhì)存在的Ⅳ型膠原降解過程中，MMP- 2作為關(guān)鍵酶在其中發(fā)揮重要作用，并進一步損傷細胞外基質(zhì)而促進惡性腫瘤細胞快速的浸潤至其他組織并且擴散〔10〕。研究認為〔11〕，因MMP- 2在Ⅳ型膠原降解過程中發(fā)揮的特異性作用，將其作為腫瘤侵襲程度以及轉(zhuǎn)移的評價指標(biāo)有重要價值。有報道發(fā)現(xiàn)〔12〕，在泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤、乳腺癌等惡性腫瘤中，MMP- 2均呈高水平表達，同時參與了病變部位腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移、浸潤等。本研究結(jié)果提示VEGF、MMP- 2可能參與了食管癌的發(fā)生過程，早期檢測有助于早期輔助診斷食管癌。進一步的結(jié)果提示VEGF、MMP- 2參與了食管的發(fā)生發(fā)展過程，聯(lián)合檢測VEGF和MMP- 2可評估食管癌患者的病情進展和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況，進而判斷預(yù)后。研究顯示〔13〕，VEGF的表達上調(diào)可促進MMP- 2的表達，兩者協(xié)同作用促進新生血管的形成以及細胞外基質(zhì)的降解。本研究相關(guān)性分析顯示，VEGF與MMP- 2通過協(xié)同作用，使新生血管生成以及細胞外基質(zhì)降解，進而促進惡性腫瘤細胞的侵襲以及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1 王 琳,李蘇宜.食管鱗癌干細胞相關(guān)標(biāo)志物的研究進展〔J〕.世界華人消化雜志,2013;21(6):490- 7.

2 劉思杰,陳應(yīng)泰,賈純增,等.卡培他濱聯(lián)合參芪扶正注射液對食管癌術(shù)后VEGF表達及生活質(zhì)量的影響〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展,2016;16(24):4783- 6.

3 Miao C,Ma J,Zhang Y,etal.Perfluorooctanoic acid enhances colorectal cancer DLD- 1 cells invasiveness through activating NF- κB mediated matrix metalloproteinase- 2/- 9 expression〔J〕.Int J Clin Exp Pathol,2015；8(9):10512- 22.

4 Shao Y,Geng Y,Gu W,etal.Assessment of lymph node ratio to replace the pN categories system of classification of the TNM system in esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.J Thorac Oncol,2016；11(10):1774- 84.

5 洪英財,陳懷生,林少霖.VEGF、CD44v6、MMP- 2在食管癌中的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性〔J〕.海南醫(yī)學(xué),2016；27(6):888- 90,891.

6 Leng XF,Zhu Y,Wang GP,etal.Accuracy of ultrasound for the diagnosis of cervical lymph node metastasis in esophageal cancer:a systematic review and meta- analysis〔J〕.J Thorac Dis,2016；8(8):2146- 57.

7 Li YL,Zhao H,Ren XB.Relationship of VEGF/VEGFR with immune and cancer cells:staggering or forward〔J〕.Cancer Biol Med,2016;13(2):206- 14.

8 Zhang L,Wang Y,Bai G,etal.The relationship between the expression of VEGF,EGFR,and HER- 2 mRNA in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC)and clinicopathological features of different ethnic groups in Xinjiang〔J〕.Tumour Biol,2015；36(12):9277- 83.

9 Quagliata L,Klusmeier S,Cremers N,etal.Inhibition of VEGFR- 3 activation in tumor- draining lymph nodes suppresses the outgrowth of lymph node metastases in the MT- 450 syngeneic rat breast cancer model〔J〕.Clin Exp Metastasis,2014;31(3):351- 65.

10 Giganti MG,Tresoldi I,Sorge R,etal.Physical exercise modulates the level of serum MMP- 2 and MMP- 9 in patients with breast cancer〔J〕.Oncol Lett,2016;12(3):2119- 26.

11 Aroner SA,Rosner BA,Tamimi RM,etal.Plasma matrix metalloproteinase 2 levels and breast cancer risk〔J〕.Cancer Epidemiol,2015;39(3):321- 7.

12 Radenkovic S,Konjevic G,Jurisic V,etal.Values of MMP- 2 and MMP- 9 in tumor tissue of basal- like breast cancer patients〔J〕.Cell Biochem Biophys,2014;68(1):143- 52.

13 Suh YG,Lee EJ,Cha H,etal.Prognostic values of vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase- 2 in hepatocellular carcinoma after radiotherapy〔J〕.Dig Dis,2014;32(6):725- 32.

〔2017- 05- 15修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

于在誠(1957- )，男，主任醫(yī)師，主要從事食管癌的外科治療研究。

葛 威(1983- )，男，主治醫(yī)師，主要從事食管癌的外科治療研究。

R73

A

1005- 9202(2017)15- 3792- 02；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.066