豬瘟感染病例的診斷與防控

彭 濤 ，古金元，胡東方，陳同煜，王玉超，劉思當(dāng)＊

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安 271000）

豬瘟感染病例的診斷與防控

彭 濤 ，古金元，胡東方，陳同煜，王玉超，劉思當(dāng)＊

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安 271000）

豬瘟仍是嚴(yán)重危害我國(guó)乃至全球養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。通過(guò)對(duì)一小型規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟臨床病例的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，剖檢診斷、病理組織觀察及病原學(xué)的檢測(cè)等進(jìn)行綜合診斷，分析了疾病的發(fā)生原因，制定防控方案，使疫情迅速得到了控制。

豬瘟；流行病學(xué)調(diào)查；診斷；防控

豬瘟是由黃病毒科豬瘟病毒 ( classical sw ine fever virus ， CSFV )引起的一種豬的急性、發(fā)熱、接觸性傳染病和致死性病毒病，具有高度傳染性和致死性。在我國(guó)曾稱(chēng)之為“爛腸瘟”，而歐洲稱(chēng)之為“古典豬瘟”，這主要是為了區(qū)別非洲豬瘟[1]。根據(jù)臨床癥狀可將該傳染病分為急性、亞急性、慢性、非典型性和隱型豬瘟。2016年11月山東聊城市某豬場(chǎng)外購(gòu)40 d左右保育豬1 000頭，進(jìn)行育肥，購(gòu)進(jìn)豬只前被告知已經(jīng)免疫過(guò)豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病疫苗，故購(gòu)進(jìn)后再未進(jìn)行疫苗免疫。引進(jìn)豬場(chǎng)15～20 d后，豬場(chǎng)陸續(xù)開(kāi)始出現(xiàn)豬只死亡，未死亡發(fā)病豬只出現(xiàn)發(fā)燒、呼吸道癥狀，個(gè)別豬只消瘦，被毛雜亂，軀干末端呈紫紅色，豬場(chǎng)養(yǎng)殖人員懷疑豬群遭到豬瘟病毒感染，因此對(duì)發(fā)病情況比較嚴(yán)重的豬只進(jìn)行了緊急接種，劑量為50頭份/頭，然而病豬情況沒(méi)有好轉(zhuǎn)。通過(guò)對(duì)發(fā)病豬剖檢診斷、病理組織學(xué)觀察及病原學(xué)檢測(cè)，最終診斷為豬瘟病毒感染。

1 材料與方法

1.1 材料

取發(fā)病豬場(chǎng)病死豬2頭，剖檢并采集病豬的淋巴結(jié)、脾、肺、腎、腸道等器官組織，一部分用磷酸鹽緩沖液（PBS）研磨提取病毒DNA/RNA進(jìn)行病毒檢測(cè)；一部分置于10%福爾馬林溶液中固定，用于組織病理學(xué)檢查。

1.2 病理組織學(xué)觀察

將用福爾馬林固定好的組織，進(jìn)行沖水、脫水、透明、石蠟包埋、切片等步驟做成組織切片，然后將組織切片用蘇木素-伊紅(HE)染色法進(jìn)行染色，最后在光鏡下觀察組織病理學(xué)變化。

1.3 DNA/RNA提取

將凍存的淋巴結(jié)、脾、肺、腎、腸道等組織，各取豆粒大置于滅菌的勻漿器中，加入1 mL冰浴的滅菌PBS，研磨至組織液黏稠無(wú)明顯顆粒時(shí)，將勻漿物轉(zhuǎn)移至滅菌1．5 mL離心管中。而后置于-20 ℃冰箱中進(jìn)行反復(fù)冷凍3次后，將勻漿液9 000 r/min離心3 min后將上清吸入新的滅菌離心管內(nèi)備用。

病料中病毒DNA或RNA的提取采用北京全式金 Easy Pure Viral DNA/ RNA Extraction kit，操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 RT-PCR檢測(cè)

用提取的DNA/RNA，分別對(duì)豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病毒、偽狂犬病病毒和豬圓環(huán)病毒進(jìn)行RT-PCR/PCR擴(kuò)增檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 臨床表現(xiàn)

豬場(chǎng)內(nèi)發(fā)病豬群精神沉郁，發(fā)熱，體溫在40～42 ℃之間，呈現(xiàn)稽留熱，喜臥、弓背、寒顫及行走搖晃；食欲減退或廢絕，有的發(fā)生嘔吐，初期便秘，后期腹瀉，糞便惡臭，帶有黏液或血液；結(jié)膜發(fā)炎，流膿性分泌物，鼻流膿性鼻液；病豬的耳后、腹部及四肢內(nèi)側(cè)等出現(xiàn)針尖狀出血點(diǎn)，腹股溝淋巴結(jié)腫大，有的病豬極度消瘦。

2.2 剖檢變化

剖檢可見(jiàn)陰鞘積尿，包皮出血；下頜淋巴結(jié)腫脹、充血、出血，外表呈紫紅色，切面如大理石狀；膀胱積尿，脾臟淤血腫大，邊緣有暗紅色出血性梗死灶，腎臟散在分布陳舊性針尖大出血點(diǎn)，剖開(kāi)結(jié)腸可見(jiàn)腸黏膜覆蓋假膜，剝離后可見(jiàn)結(jié)腸黏膜出血潰瘍，盲腸見(jiàn)隆起狀紐扣樣潰瘍，胃黏膜充血、出血，散在潰瘍?cè)?，桃體出血散在壞死灶（圖1）。

圖1 病豬剖檢病變

2.3 組織病理學(xué)觀察

肺泡壁增厚，結(jié)締組織增生，毛細(xì)血管充血。腎小球充血、出血，腎間質(zhì)出血，腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落。腸絨毛上皮細(xì)胞壞死、脫落，黏膜固有層充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（圖2）。

圖2 病豬組織病理學(xué)變化

2.4 RT-PCR診斷

采取下頜淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)、肺臟、脾臟、腎臟、大腦等組織研磨，用研磨液提取DNA/ RNA，利用RT-PCR/PCR方法，對(duì)豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病毒、偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒2型進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為豬瘟病毒陽(yáng)性（圖3)。

圖3 凝膠電泳圖

3 討論

根據(jù)剖檢診斷、病理組織學(xué)觀察及病原學(xué)的檢測(cè)結(jié)果，最終確定該豬場(chǎng)為豬瘟感染。

一旦易感豬群發(fā)生了豬瘟，基本上沒(méi)有特效的藥物可以治療，將會(huì)造成非常嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，只有進(jìn)行有效的疫苗接種，使機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力和對(duì)豬瘟病毒的抵抗力，才有抵御豬瘟病毒侵害的可能[2]。

首先，要制定一個(gè)科學(xué)合理的免疫程序。仔豬一般在30日齡和60日齡時(shí)，各接種1次疫苗，有些污染嚴(yán)重的豬場(chǎng)，可以進(jìn)行超前免疫。種豬一般每年3次普免或跟胎免疫[3]。

第二，需要加強(qiáng)免疫監(jiān)測(cè)。 免疫監(jiān)測(cè)是減少豬瘟流行的重要方法，從免疫豬群中定期抽樣，檢測(cè)豬群抗體是否達(dá)到保護(hù)水平。豬場(chǎng)在生產(chǎn)實(shí)踐過(guò)程中，要根據(jù)自身情況，綜合發(fā)病季節(jié)、發(fā)病日齡、母源抗體水平等多方面因素，制定一個(gè)科學(xué)合理的免疫接種方案。疫苗免疫接種后，要加強(qiáng)豬群的抗體水平監(jiān)測(cè)，不僅能了解豬群免疫的效果，有利于豬場(chǎng)合理科學(xué)的免疫，而且還能通過(guò)抗體水平，檢查疫苗免疫的效果，避免因各方面因素干擾出現(xiàn)豬瘟免疫失敗的情況[4]。

第三，同時(shí)要加強(qiáng)病原監(jiān)測(cè)。 病原監(jiān)測(cè)是疫病防治的重要基礎(chǔ)。目前豬瘟的發(fā)病特點(diǎn)和流行趨勢(shì)與之前相比發(fā)生了重大的改變，以點(diǎn)狀散發(fā)為主，非典型豬瘟病例較多，而典型發(fā)病病例較少，主要表現(xiàn)是免疫耐受、持續(xù)感染和隱性感染。因?yàn)辄c(diǎn)狀散發(fā)和死亡病例少，往往不能引起豬場(chǎng)的重視，造成對(duì)豬瘟防控的忽視，從而造成豬瘟疫情長(zhǎng)期持續(xù)存在。加強(qiáng)豬瘟病原監(jiān)測(cè)，既可及時(shí)了解豬瘟病毒的現(xiàn)實(shí)存在，增強(qiáng)對(duì)豬瘟的重視；又能隨時(shí)掌握流行毒株遺傳基因的變異，監(jiān)控新毒株或變異株的出現(xiàn)，為相關(guān)機(jī)構(gòu)提供科學(xué)的制定豬瘟防控決策的數(shù)據(jù)。

最后，豬場(chǎng)種豬群的凈化尤為重要。帶毒的隱性感染的母豬，可以通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播到胎兒，或水平傳播豬瘟病毒。帶毒的隱性感染的種公豬也會(huì)傳播豬瘟病毒，既可水平傳播豬瘟，又可通過(guò)配種或精液傳播給母豬；并經(jīng)母豬垂直感染仔豬，帶毒的仔豬又可以繼續(xù)水平傳播豬瘟，這是造成豬瘟病毒持續(xù)感染的重要原因，也是造成我國(guó)豬瘟長(zhǎng)期持續(xù)存在，以及散發(fā)流行惡性循環(huán)的主要根源。所以引種時(shí)，必須要選擇無(wú)豬瘟流行的種豬場(chǎng)，經(jīng)過(guò)隔離檢疫，及時(shí)淘汰感染種豬，在確保引進(jìn)豬群安全健康的情況下，進(jìn)行本場(chǎng)常規(guī)免疫后，方可轉(zhuǎn)入生產(chǎn)區(qū)進(jìn)行飼養(yǎng)。豬場(chǎng)最好應(yīng)堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的原則，最好是建立無(wú)特定病原體豬群。事實(shí)證明，采取科學(xué)合理的免疫程序、定期進(jìn)行抗體的監(jiān)測(cè)、定期進(jìn)行病原的監(jiān)測(cè)以及堅(jiān)決淘汰感染種豬和無(wú)害化處理病死豬等綜合的防控措施，逐步凈化種豬群，實(shí)現(xiàn)無(wú)帶毒健康種群是目前我國(guó)控制豬瘟流行的一條有效途徑[5]。

[1] 殷震，劉景華．動(dòng)物病毒學(xué)[M]． 2版．北京：科學(xué)出版社，1997：1197-1206．

[2] 涂長(zhǎng)春．中國(guó)豬瘟流行病學(xué)現(xiàn)狀與防制研究[D]．北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004 ．

[3] 王琴．豬瘟流行現(xiàn)狀及中國(guó)豬瘟凈化策略[J]．中國(guó)豬業(yè)，2012 (10)：45-47．

[4] 韋顯凱，鄒聯(lián)斌，屈素潔，等．廣西部分地區(qū)豬群主要疫病免疫抗體監(jiān)測(cè)和免疫效果分析[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37(1)：161-163．

[5] 蔡奕琪，朱燕秋，王銳彬．2001-2008年豬瘟抗體和豬瘟病毒監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J]．養(yǎng)豬，2009(3)： 73-74．

2017-06-01）

本研究由國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“豬重要疫病免疫防控新技術(shù)研究”子課題“規(guī)?；i場(chǎng)科學(xué)合理的免疫程序的研究（2017YFD0500605）”支持。

彭濤（1995-），男，山東淄博人，碩士，主要從事動(dòng)物臨床病理學(xué)研究.

*通訊作者簡(jiǎn)介：劉思當(dāng)，山東省農(nóng)業(yè)大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師.E-mail:liusidang@126.com