肥胖與雄性小鼠生殖系統(tǒng)慢性炎癥的相關(guān)性研究

徐雅麗張正清劉 悅丁之德*

1. 上海交通大學醫(yī)學院解剖學與組織胚胎學系（上海 200025）

2. 上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院檢驗科

·論 著·

肥胖與雄性小鼠生殖系統(tǒng)慢性炎癥的相關(guān)性研究

徐雅麗1張正清2劉 悅1丁之德1*

1. 上海交通大學醫(yī)學院解剖學與組織胚胎學系（上海 200025）

2. 上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院檢驗科

目的研究肥胖誘導的雄性小鼠生殖系統(tǒng)炎癥反應(yīng)以及相關(guān)分子機制。方法建立肥胖小鼠模型。通過Real-time PCR檢測其睪丸和附睪內(nèi)促炎細胞因子白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子- α（tumor necrosis factor，TNF-α），炎癥小體3（NOD-like receptor family pyrin domain containing-3，NLRP3）的mRNA表達水平，運用HE染色觀察肥胖小鼠睪丸組織的結(jié)構(gòu)變化，采用ELISA實驗檢測小鼠血清中性激素，IL-6，TNF-α，皮質(zhì)酮，免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）以及免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）濃度變化，最后通過Western blot檢測肥胖小鼠睪丸中炎癥反應(yīng)相關(guān)信號通路蛋白p38，核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）, 細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK），c-Jun氨基末端激酶（Jun N-terminal kinase，JNK）的含量變化。結(jié)果與正常組小鼠相比，肥胖小鼠睪丸和附睪內(nèi)IL-6，TNF-α和NLRP3的含量顯著上升，肥胖小鼠血清中性激素水平紊亂，表現(xiàn)為雌激素水平上升，睪酮和孕酮水平下降。血清中IL-6、TNF-α、皮質(zhì)酮、IgG和 IgM濃度也明顯增高。此外，肥胖小鼠睪丸發(fā)育異常，且睪丸中p38、NF-κB、ERK和JNK含量顯著上升。結(jié)論肥胖會誘導雄性小鼠睪丸和附睪發(fā)生炎癥反應(yīng)，而該炎癥反應(yīng)可導致小鼠生育力的損傷。

小鼠, 肥胖; 睪丸 ; 附睪; 炎癥; 生育力

肥胖是一個全球性的健康問題，在過去幾年中，肥胖的患病率大幅上升，2013年的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，世界范圍內(nèi)，超質(zhì)量和肥胖的人口數(shù)從1980年的8.57億上升到21億，其中超質(zhì)量男子的比例從1980年的28.8%上升到36.9%[1]。肥胖是一種行為和遺傳因素共同作用所導致的代謝性疾病，并與一些慢性疾病息息相關(guān)，包括代謝綜合征、高血脂、糖尿病、癌癥以及不孕癥等[2]。另一方面，過去幾年的調(diào)查顯示脂類代謝與機體的免疫功能關(guān)系密切[3]，并且這種代謝與免疫系統(tǒng)之間的相互作用是由免疫細胞和脂肪細胞共同調(diào)控[4]。研究表明，脂肪細胞功能紊亂很可能會引起全身性的炎癥反應(yīng)[5]，并且肥胖與一種慢性炎癥反應(yīng)有關(guān)，這種炎癥反應(yīng)的特征是促炎細胞因子，如腫 瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor, TNF-α）和白細胞介素-6（interleukin-6, IL-6）等的分泌異常，以及促炎癥信號通路的激活[4]。有文獻報道，嚙齒動物的脂肪細胞可以直接分泌TNF-α從而導致肥胖個體炎癥反應(yīng)的發(fā)生，這一發(fā)現(xiàn)與人類研究中顯示肥胖個體的脂肪組織中TNF-α含量增加，減肥后TNF-α隨之下降的現(xiàn)象相一致[6]。此外，炎癥小體3（NOD-like receptor family pyrin domain containing-3, NLRP3，NLRP3）炎癥小體也與肥胖和肥胖引起的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[7]。

近年來，有多項研究發(fā)現(xiàn)男性肥胖會降低精子質(zhì)量，進而損害男性生育力[8-10]。然而，肥胖是如何對精子產(chǎn)生影響及其影響的機制如何？現(xiàn)有的文獻并無明確的答案。因此，本研究通過高脂飲食構(gòu)建肥胖小鼠模型模擬人類由不良生活方式所致的肥胖癥；其后通過觀察分析雄性肥胖小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)的變化，并進一步檢測睪丸和附睪等組織和血清中促炎細胞因子的表達水平及其相關(guān)信號通路來探討肥胖所致慢性炎癥對雄性生殖的不良影響。

材料與方法

一、實驗動物與材料

雄性C57BL/6小鼠，3周齡，訂購于上海斯萊克實驗動物有限公司。10% fat Kcal%的對照組飼料（MD12031）和45% fat Kcal%的高脂組飼料（MD12032）訂購于江蘇美迪森公司。

二、主要試劑與儀器

（一）試劑

Trizol（Invitrogen），逆轉(zhuǎn)錄酶DRR037A（TaKaRa），SYBR Premix Ex Taq (2x)（TaKaRa），ROX Reference Dye II （TaKaRa），雄激素檢測試劑盒（R&D Systems），雌激素檢測試劑盒（Cayman chemical），孕酮檢測試劑盒（Cayman chemical），皮質(zhì)酮檢測試劑盒（ALPCO），IgG 檢測試劑盒（ICL），IgM檢測試劑盒（ICL），TNF-α檢測試劑盒 (Anogen)，IL-6檢測試劑盒 (Anogen)，RIPA lysis buffer（Thermo Fisher Scientific），Protease Inhibitor tablet（Thermo Fisher Scientific），兔抗鼠actin抗體（Cell Signaling Technology），兔抗鼠p38抗體（Cell Signaling Technology），兔抗鼠NF-κB抗體（Cell Signaling Technology），兔抗鼠JNK抗體（Cell Signaling Technology），兔抗鼠ERK抗體（Cell Signaling Technology），辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗兔IgG（Abgent）。

（二）儀器

數(shù)碼顯微鏡（Nikon E600），生化自動分析儀（Roche Diagnostics），Applied Biosystems 7500（Thermo Fisher Scientific），全波長酶標儀 Multiskan GO（Thermo Fisher Scientifc），1000/500型電泳儀和轉(zhuǎn)移儀（Bio-Rad），凝膠圖像分析系統(tǒng)（Bio-Rad）。

三、方法

（一）肥胖小鼠模型構(gòu)建

購置3周齡C57BL/6雄鼠60只于醫(yī)學院實驗動物科學部飼養(yǎng)。將60只鼠隨機分為兩組，即正常飲食對照組（control diet，CD）和高脂飲食組（high-fat diet，HFD），每組各30只，且每籠中的小鼠均用苦味酸標記，用以觀察不同組小鼠體質(zhì)量的改變。兩組小鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，CD組繼續(xù)給予正常飼料，而HFD組則給予高脂飼料，兩組小鼠每周測量體質(zhì)量一次并記錄，與此同時，記錄兩組小鼠每周攝食飼料的質(zhì)量，直至第14周。

（二）小鼠肝臟和睪丸形態(tài)學觀察

成功構(gòu)建肥胖小鼠模型后，對其過量麻醉處死，取其肝臟和睪丸組織并浸入Bouin氏液中固定過夜。后經(jīng)梯度乙醇脫水后進行石蠟包埋，二甲苯脫蠟后梯度乙醇復水，室溫晾干后HE染色等步驟，最終經(jīng)中性樹膠封片后置于數(shù)碼顯微鏡下觀察并拍照。

（三）小鼠血脂水平檢測

小鼠麻醉后心臟取血，室溫靜置30 min后，置于小型臺式離心機中4 ℃，845×g，離心15min，吸取血清，分裝后置于-80 ℃低溫冰箱保存。待所有的血清收集完畢后送上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院檢驗科檢測血脂水平。

（四）實時熒光定量PCR

采用Trizol法分別提取睪丸、附睪頭部和附睪尾部的總RNA，并用RT Master Mix試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA。引物設(shè)計采用PRIMER 5.0軟件，IL-6引物：上游引物5’-TTCTTGGGACTGATGCTGGT-3’，下游引物5’-CCTCC-GACTTGTGAAGTGGT-3’；TNF-α引物：上游引物5’-ACGGCATGGATCTCAA A G A C-3’，下游引物5’- G T G G G T GAGGAGCACGTAGT-3’；NLRP3引物：上游引物5’-CATCAATGCTGCTTCGACAT-3’，下游引物5’-T C A G T C C C A C A C AC A G C A AT-3’；β-a c t i n引物：上游引物5’-GGGAATGGGTCAGAAGGACT-3’，下游引物5’-CTTCTCCATGTCGTCCCAGT-3’。檢測系統(tǒng)為Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR，反應(yīng)條件為：stage1 預(yù)變性，Reps: 1, 95°C 30s；stage2 PCR反應(yīng)，Reps: 40, 95°C 5s, 60°C 34s；Dissociation Stage。通過實驗測定的Ct值表示目的基因mRNA表達量，實驗組和對照組目的基因表達量的相對變化水平使用2-△△Ct法分析表示。

（五）ELISA檢測小鼠血清中激素、IL-6、TNF-α、IgG和IgM水平

小鼠麻醉后心臟取血，室溫靜置30min后，4℃，845×g，離心15min，吸取血清。向預(yù)先包被有待測激素、IgG、IgM、TNF-α和IL-6抗體的96孔板中分別加入封閉液封閉孔中多余的蛋白結(jié)合位點，隨后，在孔中加入血清，待抗體吸附血清中的抗原且經(jīng)PBS緩沖液洗滌后，再向孔中加入生物素標記的抗體吸附已結(jié)合的抗原，然后將鏈霉親和素-HRP加入待測孔結(jié)合生物素標記的抗體，最后加入四甲基聯(lián)苯胺底物與HRP進行顯色，通過酶標儀檢測吸光度獲得樣本數(shù)據(jù)。

（六）Western法檢測相關(guān)蛋白表達水平

小鼠過量麻醉處死后，取一側(cè)睪丸置于勻漿器，使用RIPA裂解液抽提睪丸蛋白，采用BCA法檢測睪丸蛋白濃度。取30μg樣品蛋白進行SDS-PAGE電泳（濃縮膠90 V，約30 min；分離膠120 V，約1h），電泳后轉(zhuǎn)膜（350 mA, 90 min）。經(jīng)5%脫脂牛奶室溫搖床封閉1 h，加稀釋后一抗（actin 1:1000，p38 1:1000, NF-κB 1:1000, JNK 1:1000, ERK 1:1000）孵育過夜，隨后洗滌去除一抗，加1:10000羊抗兔二抗室溫孵育1 h，洗滌。用凝膠圖像分析系統(tǒng)曝光待測蛋白得到目的蛋白條帶圖。

（七）統(tǒng)計學分析

采用SAS 8.2統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，應(yīng)用單因素方差分析對每組數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

一、兩組小鼠體質(zhì)量、攝食量、肝臟形態(tài)及血脂水平分析

雄性C57BL/6小鼠在高脂飲食喂養(yǎng)10周后（鼠齡14周），與CD組小鼠相比體質(zhì)量呈現(xiàn)顯著增加，而HFD組小鼠每周的攝食量均少于CD組。CD組與HFD組小鼠的體質(zhì)量在喂養(yǎng)4周后（鼠齡第8周）便開始出現(xiàn)差異，分別為（26.29±1.05）g和（31.63±1.96）g，差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且該差異隨喂養(yǎng)時間的延長愈加顯著（圖1A，圖1B）。

小鼠肝臟切片HE染色的形態(tài)學分析顯示，與CD組相比，HFD組小鼠肝臟的肝細胞均出現(xiàn)脂肪空泡化現(xiàn)象，表現(xiàn)為嚴重的脂肪肝病變（圖1C）。

圖1 CD組和HFD組小鼠每周體質(zhì)量、攝食量及肝臟HE切片

血脂水平分析表明：HFD組小鼠血清總膽固醇（CHOL）水平為（4.36±0.11）mmol/L，高密度脂蛋白（HDL）水平為（2.16±0.04）mmol/L，低密度脂蛋白（LDL）水平為（0.47±0.06）mmol/L，與CD組（分別為（2.30±0.11）mmol/L，（1.47±0.07）mmol/L和（0.26±0.02） mmol/L）比較均顯著上升，差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；但兩組的甘油三酯（TGL）水平相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），HFD組和CD組的TGL水平分別為（1.19±0.05）mmol/L和（1.16±0.10）mmol/L。此外，HFD組和CD組的載脂蛋白B（ApoB）濃度分別為（0.08±0.03）g/L和（0.05±0.007）g/L，載脂蛋白E（ApoE）濃度分別為（5.18±0.86）mg/dL和（2.46±1.00）mg/dL，HFD組均表現(xiàn)顯著上升，與CD組比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，圖2）。

二、小鼠血清性激素水平變化

ELISA結(jié)果顯示：HFD組小鼠血清中雌激素水平[（16.74±1.06）pg/mL]，與CD組（9.14±2.58）pg/mL相比，顯著上升；睪酮水平[（4.58±1.44）ng/mL]，與CD組（7.95±0.80）ng/mL相比，顯著降低，差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；同時孕酮水平[（10.38±1.43）pg/mL]，與CD組（12.76±1.62）pg/mL相比，也顯著降低，差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.05，圖3）。

圖2 CD組和HFD組小鼠血脂水平的變化

圖3 CD組和HFD組小鼠性激素水平變化

三、兩組小鼠睪丸形態(tài)學分析以及IL-6、TNF-α和NLRP3 mRNA在小鼠睪丸和附睪中相對表達水平變化

小鼠睪丸切片HE染色的形態(tài)學分析顯示，HFD組小鼠的生精上皮嚴重萎縮，且支持細胞和生精細胞之間的細胞連接被破壞，排列松散（圖4）。同時，Real-Time PCR結(jié)果顯示，與CD組相比（相對表達量取為1），HFD組小鼠睪丸IL-6的mRNA表達水平（3.7±0.83），TNF-α的mRNA表達水平（2.24±0.50）和NLRP3的mRNA表達水平（2.42±0.51）；HFD組小鼠附睪頭部IL-6的mRNA表達水平（3.05±0.79），TNF-α的mRNA表達水平（1.90± 0.17）和NLRP3的mRNA表達水平（1.51±0.16）；HFD組小鼠附睪尾部IL-6的mRNA表達水平（3.85±0.71），TNF-α的mRNA表達水平（2.80±0.61）和NLRP3的mRNA表達水平（2.45±0.20）均有顯著上升，差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.05，圖5）。

圖4 CD組和HFD組小鼠睪丸HE切片

圖5 CD組和HFD組小鼠睪丸和附睪內(nèi)IL-6、TNF-α和NLRP3 mRNA相對表達水平

四、兩組小鼠血清IL-6、TNF-α、皮質(zhì)酮以及IgG、IgM水平變化

ELISA結(jié)果顯示：HFD組小鼠血清中IL-6和TNF-α濃度分別為（9.50±0.43）pg/mL和（30.91±2.03）pg/mL，與CD組[IL-6和TNF-α濃度分別為（5.37±0.32）pg/mL和（18.18±0.59）pg/mL]相比，顯著升高，差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。HFD組的皮質(zhì)酮和IgG濃度也顯著上升，分別為（165.75±10.68）ng/mL和（6227.40±713.48）μ g/m L，與C D組[皮質(zhì)酮和I g G濃度分別為（115.93±10.47）ng/mL和（3620.39±439.70）ng/mL]相比，差異均具統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。兩組的IgM濃度無顯著變化（圖6）。

五、肥胖對炎癥反應(yīng)信號通路相關(guān)蛋白含量的影響

P38, NF-κB, JNK和ERK均為TNF-α下游的重要信號分子，也是在免疫反應(yīng)中研究較多的具有代表性的重要信號蛋白，并且也與雄性動物血睪屏障的完整性密切相關(guān)。Western blot實驗結(jié)果顯示，與CD組小鼠相比，HFD組小鼠睪丸內(nèi)，P38, NF-κB, JNK和ERK表達水平均顯著上升（圖7）。

討 論

我們在前期的研究中已經(jīng)證實了高脂飲食誘導的肥胖會損害雄鼠的精子功能，進而損傷雄性的生育力[11,12]。為了明確肥胖是否通過引起雄鼠生殖道炎癥進一步影響其生育力這一設(shè)想，我們首先構(gòu)建肥胖小鼠模型，經(jīng)過10周的高脂喂養(yǎng)，HFD組小鼠呈現(xiàn)出明顯的體質(zhì)量上升，脂肪肝病變以及血脂中膽固醇、低密度脂蛋白及載脂蛋白B和E等水平顯著上升。然而血清甘油三酯水平并未上升，推測主要因素是給予小鼠的高脂飼料中其主要脂類成分為豬油，而豬油中含有大量的膽固醇，因此相比較于正常小鼠，肥胖小鼠的血清總膽固醇有顯著性升高；而另一方面，受即食影響的血清甘油三酯水平卻無明顯變化，這也進一步說明我們建立的肥胖小鼠模型是一個脂類代謝長期紊亂的表型。其次，伴隨肥胖，小鼠出現(xiàn)內(nèi)分泌紊亂即性激素水平異常的現(xiàn)象。性激素水平檢測結(jié)果顯示，肥胖小鼠的雌激素水平顯著升高，而雄激素與孕酮水平顯著降低。研究發(fā)現(xiàn)，性類固醇激素如雌激素、睪酮和孕酮有許多重要的生理功能，包括生殖、細胞增殖、細胞凋亡以及對微生物和病毒感染的反應(yīng)[13]。此外，性類固醇激素對免疫細胞的活性有顯著的調(diào)節(jié)作用，如睪酮能降低促炎細胞因子TNF-α的合成[14]，雌激素通過刺激促炎細胞因子IL-6和TNF-α來增強細胞和體液免疫反應(yīng)[15,16]，另外孕酮對NF-κB的激活有顯著的抑制作用[17]。與之相對應(yīng)的是，我們通過熒光定量PCR檢測小鼠睪丸和附睪內(nèi)的促炎細胞因子水平，結(jié)果顯示IL-6，TNF-α和NLRP3的表達水平在肥胖小鼠中均有顯著升高，同時，ELISA實驗結(jié)果表明肥胖小鼠血清中的IL-6和TNF-α濃度也有明顯的上升。除此外，與正常小鼠相比，肥胖小鼠血清中的皮質(zhì)酮和IgG濃度均有顯著增高。在機體受感染時，炎癥反應(yīng)會通過激活下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）軸促進腎上腺皮質(zhì)分泌大量皮質(zhì)酮，這是機體在感染應(yīng)激時發(fā)生的重要生理反應(yīng)[18]，皮質(zhì)酮可以通過抑制促炎介質(zhì)的表達或刺激抗炎介質(zhì)的表達而發(fā)揮抗炎作用[19]。因此，這一結(jié)果進一步驗證了肥胖會導致小鼠機體炎癥反應(yīng)的發(fā)生。一般狀況下，IgM是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，多產(chǎn)生于早期感染階段，當機體處于急性炎癥反應(yīng)階段時體內(nèi)IgM濃度較高，而IgG是再次免疫應(yīng)答產(chǎn)生的主要抗體，多產(chǎn)生于感染后期，即慢性炎癥反應(yīng)階段[20]。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，與正常小鼠相比，肥胖小鼠血清中IgM含量并無顯著性改變，而IgG含量較高，故肥胖誘導小鼠機體產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)為慢性炎癥反應(yīng)而非急性炎癥反應(yīng)。

圖6 CD組和HFD組小鼠血清中IL-6、TNF-α、皮質(zhì)酮、IgG和IgM濃度變化

圖7 CD組和HFD組小鼠睪丸中炎癥反應(yīng)相關(guān)蛋白表達水平的變化

為了進一步探討肥胖引起的炎癥對雄性小鼠生育力的影響，我們對小鼠睪丸進行了HE染色分析，結(jié)果顯示肥胖小鼠睪丸生精小管內(nèi)生精上皮嚴重萎縮，并且支持細胞和生精細胞間的細胞連接被破壞，排列松散。因此，高脂飲食所誘導的小鼠肥胖會導致全身包括生殖道的炎癥反應(yīng)，其結(jié)果可使肥胖小鼠的睪丸發(fā)育出現(xiàn)異常。

大量研究顯示TNF-α在對炎癥反應(yīng)發(fā)生過程[21]和炎癥反應(yīng)信號通路中的其他分子，如p38、NF-κB、JNK和ERK等激活過程有著重要作用[3]。另一方面，在小鼠的支持細胞中，TNF-α通過激活NF-κB誘導Fas表達上調(diào)，F(xiàn)as又稱APO-1（apoptosis-1），是位于細胞膜上的一個受體，可以啟動凋亡信號的轉(zhuǎn)導，觸發(fā)細胞凋亡從而導致血睪屏障損傷[22]。此外，在小鼠睪丸中，有絲分裂原活化蛋白酶（MAPK）與血睪屏障結(jié)構(gòu)的完整性也密切相關(guān)，而MAPK這一反應(yīng)途徑具有3個分支的級聯(lián)反應(yīng)，這3個分支包括p38、ERK和JNK 3條信號通路[23]。在我們的研究中，雄性肥胖小鼠睪丸內(nèi)的p38、NF-κB、JNK和ERK蛋白水平明顯高于正常組小鼠，表明肥胖誘導的生殖系統(tǒng)炎癥反應(yīng)可造成睪丸內(nèi)除促炎細胞因子TNF-α水平上升。TNF-α水平上升后，可誘導其下游信號分子p38、NF-κB、JNK和ERK蛋白表達水平升高，而這些蛋白均與血睪屏障的完整性密切相關(guān)。此外，在我們的前期研究[11]顯示：相比于正常小鼠，肥胖小鼠的血睪屏障完整性受損，且與雌鼠交配后產(chǎn)仔率顯著下降。因此可推測，炎癥除導致肥胖小鼠睪丸內(nèi)TNF-α水平上升外，可進一步引起p38、NF-κB、JNK和ERK蛋白水平升高，其結(jié)果會造成血睪屏障結(jié)構(gòu)的完整性被破壞，損傷其生精功能，最終導致雄性小鼠生育力下降。因此，通過本項研究對肥胖誘導的雄性生殖系統(tǒng)炎癥反應(yīng)及機制進行探討，可為今后更全面深入闡明肥胖對雄性生育力的調(diào)控提供了新的理論基礎(chǔ)和重要的實驗依據(jù)。

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（2017-03-08收稿）

The correlation between obesity and inflammation in male mice genital tract

Xu Yali1, Zhang Zhengqing2, Liu Yue1, Ding Zhide1*
1. Department of Anatomy, Histology and Embryology, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200025, China; 2. Department of Clinical Laboratory, Shanghai 9th People's Hospital Corresponding author: Ding Zhide, E-mail: zding@shsmu.edu.cn

ObjectiveTo investigate the infammatory situation in obesity-induced male genital tract, and analyze its related mechanisms.MethodsThe obese mouse model was established by high fat diet. The expressions of IL-6、TNF-α and NLRP3 in testis and epididymis were detected by real-time PCR. Morphology of testis were observed by histological analysis. The concentration of sex hormones,IL-6,TNF-α,corticosterone,IgG and IgM in serum were detected by ELISA and the expressions of p38、NF-κB、ERK and JNK in testis were analyzed by western blot.ResultsCompared with those in the normal diet control group, the levels of IL-6,TNF-α and NLRP3 were remarkably increased in obese mice' testis and epididymis. Moreover, there was a disorder of sex hormones including decrease of testosterone and progesterone and increase of estradiol. On the other hand, the concentration of IL-6, TNF-α, corticosterone, IgG and IgM in serum were higher in obese mice than those in the controls. Besides, testes morphological analysis of obese mice exhibited an abnormal testicular structure. Meanwhile, P38, NF-κB, JNK and ERK expressions were increased in testicular tissue of obese mice in response to high-fat treatment.ConclusionObesity might result in the infammation in male genital tract, which could impair male fertility.

mice, obese; testis; epididymis; infammation; fertility

10.3969/j.issn.1008-0848.2017.03.001

R589.25; R698

*通訊作者, E-mail: zding@shsmu.edu.cn