貽貝粘蛋白纖維素敷料用于慢性潰瘍臨床觀察

殷雨林，鄧建華，王小磊

（江陰貝瑞森生化技術(shù)有限公司，江蘇 江陰 214437）

貽貝粘蛋白纖維素敷料用于慢性潰瘍臨床觀察

殷雨林，鄧建華，王小磊

（江陰貝瑞森生化技術(shù)有限公司，江蘇 江陰 214437）

貽貝粘蛋白纖維素敷料是貽貝粘蛋白與纖維素通過共價交聯(lián)形成的一種新型敷料，可用于促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。通過30例慢性難愈性創(chuàng)面或潰瘍患者試用，貽貝粘蛋白纖維素敷料能有效促進(jìn)潰瘍、慢性難愈性創(chuàng)面的愈合，并且安全性好。

貽貝粘蛋白纖維素敷料創(chuàng)面愈合

0 引言

纖維素是一種天然的生物高聚物，由β-D-吡喃葡萄糖通過β-1，4-糖苷鍵連接而成的一種無分支的大分子直鏈聚合物[1]，具有生物活性、生物可降解性、生物適應(yīng)性，具有高結(jié)晶度、高純度、高持水性、超細(xì)納米纖維網(wǎng)絡(luò)、高抗張強(qiáng)度和彈性模量等許多獨(dú)特的物理、化學(xué)和機(jī)械性能[2-3]。此外納米纖維素持水性高，其內(nèi)部有很多“孔道”，有良好的透氣、透水性能，能吸收60-700倍于其干重的水分[4]?；谏鲜隼w維素的優(yōu)異性能，其在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。但是，纖維素本身沒有抗菌活性，不能防止傷口的感染，對傷口愈合的促進(jìn)效果不夠理想。因此，賦予纖維素原料較強(qiáng)抗菌性能和促愈性能對其在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域的應(yīng)用至關(guān)重要。

貽貝粘蛋白是一種大分子蛋白質(zhì)，分子中含有大量的正電荷，可吸引帶負(fù)電細(xì)胞的爬行和生長，并且正電荷具有抑菌的屬性[5-6]。將貽貝粘蛋白與纖維素結(jié)合形成新型的醫(yī)用產(chǎn)品，既可發(fā)揮纖維素的優(yōu)勢，又可使新型敷料具有抑菌和促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用。因此研制了貽貝粘蛋白纖維素敷料，并經(jīng)臨床觀察有很好的促愈合效果，現(xiàn)報告如下。

1 貽貝粘蛋白纖維素敷料制備

取20克卡波姆凝膠在80℃熱水中充分溶脹30分鐘形成凝膠基質(zhì)，邊攪拌邊向其中加入細(xì)菌纖維素纖維40g，持續(xù)攪拌4小時后室溫放置自然冷卻。攪拌條件下向其中加入3.0mg/ml貽貝粘蛋白10ml，持續(xù)攪拌30分鐘至混合均勻，得到貽貝粘蛋白纖維素敷料。

2 貽貝粘蛋白纖維素敷料質(zhì)量控制

（1）性狀貽貝粘蛋白纖維素為凝膠狀液體，透明、無雜質(zhì)。

（2）蛋白含量檢測采用考馬斯亮藍(lán)法檢測貽貝粘蛋白含量在0.2-0.4mg/mL之間。

（3）穩(wěn)定性本品室溫6個月及45℃放置3個月觀察性狀，檢測蛋白含量均符合性狀及蛋白含量規(guī)定。

3 貽貝粘蛋白纖維素敷料臨床療效觀察

3.1 病例選擇

選擇慢性難愈性創(chuàng)面或潰瘍患者30人，年齡18-65歲，性別不限，受試者創(chuàng)面總面積小于20%總體表面積（TBSA），應(yīng)用試驗(yàn)或?qū)φ债a(chǎn)品的創(chuàng)面面積小于2%TBSA。隨機(jī)將患者分成對照組或試驗(yàn)組，每組各15人。隔天換藥一次，觀察21天后創(chuàng)面的愈合情況。

3.2 治療方法

隨機(jī)將患者分成對照組或試驗(yàn)組，每組各15人。清潔創(chuàng)面后用生理鹽水將清創(chuàng)藥物沖洗2-3遍后將貽貝粘蛋白纖維素敷料或?qū)φ债a(chǎn)品均勻噴于創(chuàng)面處，先上覆凡士林油紗，后上覆干燥無菌紗布，以膠帶或繃帶固定。隔天換藥一次，觀察21天后創(chuàng)面的愈合情況。

3.3 療效評價標(biāo)準(zhǔn)

以治療21天時創(chuàng)面愈合情況作為主要評價指標(biāo)評價產(chǎn)品性能。創(chuàng)面愈合標(biāo)準(zhǔn)為創(chuàng)面無滲出，基底完全被新生上皮所覆蓋。

按下列公式計算:創(chuàng)面愈合率（%） =1?測定日創(chuàng)面面積與受傷日創(chuàng)面面積的百分比。

3.4 安全性評價

在治療前和治療第21d，進(jìn)行血常規(guī)（白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞百分比、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板），尿常規(guī)（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、蛋白質(zhì)），肝功能（總膽紅素、直接膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白），腎功能（尿素氮、肌酐）檢測。應(yīng)分別描述試驗(yàn)組和對照組各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)試驗(yàn)前正常，試驗(yàn)后異常（異常有臨床意義、異常無臨床意義）的例數(shù)及占各組例數(shù)的百分比。

記錄試驗(yàn)中所發(fā)生的不良事件，并判斷是否與試驗(yàn)產(chǎn)品相關(guān)，同時計算不良事件發(fā)生率，不良事件發(fā)生率計算公式如下：

不良事件發(fā)生率=（不良事件發(fā)生的次數(shù)）/（試驗(yàn)例數(shù)）×100%

研究中試驗(yàn)組和對照組各出現(xiàn)一例入組時各項(xiàng)檢查均正常，試驗(yàn)后檢測參數(shù)異常情況，經(jīng)研究者判定與使用產(chǎn)品無關(guān)。

3.5 治療效果對比

試驗(yàn)組和對照組的各15例受試者中平均年齡分別為46.20和48.39，平均體重分別為70.61和69.30公斤，平均身高分別為170.22和170.60cm，試驗(yàn)組和對照組均為男性13例，女性2例。從基線數(shù)據(jù)可以看出，兩個受試組人員基礎(chǔ)數(shù)據(jù)較均衡。

貽貝粘蛋白纖維素敷料和對照產(chǎn)品治療深度、慢性難愈性創(chuàng)面效果見表1:受試者基線受傷日創(chuàng)面面積，試驗(yàn)組為9.88±6.26(%)，對照組為9.84±6.34(%)，在檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05的情況下，對兩組基線受傷日創(chuàng)面面積進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.2360），故可以認(rèn)為試驗(yàn)組在基線受傷日創(chuàng)面面積上與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。

受試者基線試驗(yàn)觀察創(chuàng)面面積，試驗(yàn)組為1.98±0.28(%)，對照組為1.82±0.27(%)，在檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05的情況下，對兩組基線試驗(yàn)觀察創(chuàng)面面積進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0920），故可以認(rèn)為試驗(yàn)組在基線試驗(yàn)觀察創(chuàng)面面積上與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。

使用后21天創(chuàng)面愈合率試驗(yàn)組為89.05±5.43(%)，對照組為86.67±8.66(%)，在檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05的情況下，對兩組使用后指定時間創(chuàng)面愈合率進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0280），可認(rèn)為試驗(yàn)組在使用后指定時間創(chuàng)面愈合率上與對照組存在差異。

表1 貽貝粘蛋白纖維素敷料與對照產(chǎn)品治療效果對比

4 討論

難愈性創(chuàng)面或潰瘍是由一系列創(chuàng)傷和疾病所致，與創(chuàng)傷部位和宿主有關(guān)的創(chuàng)面，在期望的時間內(nèi)不能正常愈合，一般將持續(xù)一個月不愈合創(chuàng)面定義為慢性創(chuàng)面。主要包括創(chuàng)傷性潰瘍、下肢靜脈性潰瘍、壓迫性潰瘍以及糖尿病潰瘍等。慢性創(chuàng)面中，成纖維細(xì)胞、表皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等組織修復(fù)細(xì)胞會出現(xiàn)核固縮與核染色質(zhì)邊緣化等典型表現(xiàn)。成纖維細(xì)胞是肌體修復(fù)的主要細(xì)胞，它的增殖障礙將使細(xì)胞外基質(zhì)特別是膠原的合成發(fā)生障礙，其結(jié)果是創(chuàng)面愈合延遲。

以纖維素作為生物高聚物增強(qiáng)相，具有其他增強(qiáng)相無可比擬的特點(diǎn)，是制備復(fù)合凝膠的優(yōu)良選擇材料。將纖維素用于納米復(fù)合凝膠符合可持續(xù)發(fā)展觀點(diǎn)，同時也與纖維素資源高值化利用的發(fā)展趨勢相符。

貽貝粘蛋白是貽貝足絲中分泌的一種蛋白質(zhì)，貽貝依靠它粘附于各類物體的表面，形成抗水的結(jié)合，耐受風(fēng)浪的沖擊[7]。貽貝粘蛋白是堿性蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)pI 9.5，在生理酸堿度pH 7.4下帶有很高載量的正電荷[8-9]。人體細(xì)胞，如：表皮原代細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等帶負(fù)電。貽貝粘蛋白通過靜電相互作用，吸引各種細(xì)胞的貼壁和爬行替代，從而促進(jìn)燒傷創(chuàng)面的愈合。具有生物相容性好、無細(xì)胞毒性、無免疫原性、無化學(xué)刺激、透氣等特點(diǎn)[10]。貽貝粘蛋白在愈合過程中呈現(xiàn)了一種微觀生物支架的作用——貽貝粘蛋白通過靜電相互作用、疏水相互作用、DOPA（多巴）氧化交聯(lián)等三種作用力與細(xì)胞和組織緊密結(jié)合，形成微觀的納米級生物支架，通過靜電相互作用吸引細(xì)胞向生物支架貼壁和爬行替代，促進(jìn)創(chuàng)面的愈合[11-12]。貽貝粘蛋白納米纖維素敷料不僅解決納米纖維素的抗菌性、創(chuàng)傷快速愈合的問題，同時克服現(xiàn)有貽貝粘蛋白產(chǎn)品存在的引流、吸濕效果差的問題。將用于燒傷、陳舊性創(chuàng)口、慢性潰瘍、術(shù)后創(chuàng)口恢復(fù)等臨床過程中，加速創(chuàng)面難愈合，不易產(chǎn)生疤痕。

隨著對難愈創(chuàng)面發(fā)生機(jī)制和創(chuàng)面愈合過程的深入了解，以及各種有效的生長因子投送技術(shù)、醫(yī)用新材料和創(chuàng)面治療新技術(shù)如負(fù)壓創(chuàng)面治療技術(shù)的應(yīng)用和成熟，針對性治療有望變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)。

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The Clinical Observation of Mussel Adhesive Protein Cellulose Dressing for Chronic Ulcer

YIN Yu-lin, DENG Jian-hua, WANG Xiao-lei

(Jiangyin USUN Biochemical Technology Co.,Ltd, Jiangsu Jiangyin,214437,China)

Mussel adhesive protein cellulose dressing is a new type of dressing, which is formed through MAP and cellulose covalent cross-linking and can be used to promote wound healing. Through the trial in total of 30 patients with chronic painless wound or ulcer, mussel adhesive protein cellulose dressing can effectively and safely promote the healing of ulcer and chronic painless wound.

Mussel adhesive protein; Cellulose dressing; Woundhealing

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.08.37