參苓白術散對皮膚機械屏障功能障礙小鼠皮膚水分的影響

劉媛++解宇環(huán)++何丹++王思敏++陶穎++孫曉菲

摘要：目的通過觀察參苓白術散對皮膚機械屏障功能障礙模型小鼠皮膚水分的影響，探討其對皮膚機械屏障功能的修復作用。方法將50只健康ICR小鼠，隨機分為5組，每組10只，即正常組，模型組，參苓白術散高、中、低劑量組。參苓白術散各組從第1 d 起，分別給予參苓白術散（40 g·kg-1、20 g·kg-1、10 g·kg-1）灌胃；其余各組灌胃給予蒸餾水。1次/d，連續(xù)13d。模型組，參苓白術散高、中、低劑量組從第9d起，采用膠帶剝離法復制小鼠皮膚屏障功能障礙模型，2次/d，連續(xù)5d。分別于造模前1d、造模第1d及造模第5d測定皮膚經(jīng)皮水丟失值（transepidermal water loss，TEWL）及皮膚水合度。結(jié)果造模前1d，各組小鼠皮膚TEWL值及皮膚水合度均無明顯變化（P>005）；造模第1d，模型組小鼠皮膚TEWL明顯升高（P<0001），皮膚水合度明顯下降（P<0001）；造模第5d，參苓白術散給藥組小鼠皮膚TEWL值顯著低于模型組（P<001，P<0001），參苓白術散給藥組小鼠皮膚水合度顯著高于模型組（P<001，P<0001）。結(jié)論參苓白術散具有保水作用進而促進皮膚機械屏障功能修復。

關鍵詞：參苓白術散；皮膚機械屏障；TEWL；皮膚水合度

中圖分類號：R2855文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2017）08-0075-03

[WT5HZ][JZ]Effect of Shenlingbaizhu Powder on Skin Moisture of Mice with Skin Mechanical Barrier Dysfunction

[WT5BZ][JZ]LIU Yuan，XIE Yu-huan，HE Dan，WANG Si-min，TAO Ying，SUN Xiao-fei

[WT5"BX][JZ]（Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500，China）

[WTHZ]【Abstract】[WTBZ]Objective：To observe the effect of Shenlingbaizhu Powder on the skin moisture of mice with skin mechanical barrier dysfunction and to explore its effect on the repair function of skin mechanical barrierMethods：50 healthy ICR mice were randomly divided into 5 groups，10 rats in each group，normal group，model group，Shenlingbaizhi groups with high，middle and low doseShenlingbaizhi groups were intragastricaly respectively administrated with Shenlingbaizhu Powder（40 g·kg-1，20 g·kg-1，10 g·kg-1）from the first day while the other groups were given distilled water，once daily for continuous 13 daysIn the model group and Shenlingbaizhi groups with the high，middle and low dose，the skin barrier dysfunction model was duplicated by tape stripping method from the 9th day，twice daily for continuous 5 daysThe transepidermal water loss（TEWL）and skin hydrature were respectively measured 1 day before modeling，the 1st day and 5th day of model establishmentResults：TEWL and skin hydrature did not change significantly（P>005）1 day before modelingBut the TEWL significantly increased（P<0001）and the skin hydrature significantly decreased（P<0001）in the model groupAt the 5th day after model establishment，TEWL value of mice skin in Shenlingbaizhu powder groups was significantly lower than that in model group（P<001，P<0001）The skin hydration in Shenlingbaizhi groups was significantly higher than that in the model group（P<001，P<0001）Conclusion：Shenlingbaizhu powder has water retention and promote the repair of skin mechanical barrier function

[WTHZ]【Key words】[WTBZ]Shenlingbaizhu powder，skin mechanical barrier，TEWL，skin hydrature

完整的皮膚是機體與外界的一道天然屏障，具有抵御外界物理、化學損傷及生物抗原等物質(zhì)侵入的功能，還能適應外界溫度變化影響，參與新陳代謝過程。皮膚屏障有狹義與廣義之分[1]。狹義的皮膚屏障通常指表皮，尤其是角質(zhì)層的物理性或機械性屏障結(jié)構；廣義的皮膚屏障包括皮膚的機械性屏障、神經(jīng)屏障、免疫屏障等，其中機械性屏障直接與外界接觸，是機體與外界環(huán)境之間的重要屏障，可防止體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)、水分等的丟失，在一定程度上可以阻止外界化學、生物等因素對機體造成的損傷。皮膚屏障功能障礙是特應性皮炎[2]、老年性皮膚瘙癢癥[3]、銀屑病[4]及魚鱗病[5]等皮膚病疾病共同的發(fā)病機制之一，也是這些皮膚病變發(fā)生發(fā)展、反復發(fā)作的重要原因，改善皮膚屏障功能是治療多種皮膚病的重要措施。目前現(xiàn)代醫(yī)學在治療皮膚屏障功能障礙相關皮膚病時主要采取抗炎、抗過敏、免疫抑制及保濕等對癥處理的原則[6-9]，雖能緩解皮膚急性期的病變，但對慢性期皮膚屏障功能的修復療效不佳，無法解決停藥后復發(fā)的問題。中醫(yī)治療皮膚病雖然起效慢，但具有遠期療效好，[HJ]復發(fā)率低的優(yōu)勢。中醫(yī)認為“脾虛濕盛”是該類疾病基本病機，當以“健脾滲濕”為主要治法之一。健脾經(jīng)典方劑參苓白術散源于《太平惠民和劑局方》，是健脾滲濕經(jīng)典代表方藥，具有益氣健脾，滲濕止瀉之功效。因此本研究選用參苓白術散，根據(jù)中醫(yī)“健脾法”對該類皮膚病的確切療效，探討參苓白術散對皮膚機械屏障功能障礙的修復作用。

1材料與儀器

11實驗動物ICR小鼠，SPF級，雌雄各半，體重18-22 g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供。合格證號：SCXK（京）2014-0004，合格證號：11401300043224。

12主要藥品及試劑參苓白術散：人參60 g，茯苓60 g，炒白術60 g，山藥60 g，炒白扁豆45 g，蓮子肉30 g，炒薏苡仁30 g，砂仁30 g，炒桔梗30 g，炙甘草60 g，購于昆明市一心堂連鎖店，經(jīng)中藥鑒定教研室張潔老師鑒定為正品。按方中比例水煎（人參單獨先煎煮30 min），過濾、合并濾液，濃縮制成浸膏，4℃保存。

13儀器及設備YLS-Q4耳腫打耳器（山東省醫(yī)學科學院設備站），F(xiàn)R-3018剃毛器（余姚飛人電器有限公司），MSC1177緊湊型皮膚水合測量儀（芬蘭 Delfin Technologies 公司），SWL4經(jīng)皮水分流失測定儀（芬蘭 Delfin Technologies 公司）。

2方法

21動物分組及給藥選取50只ICR小鼠，隨機分為5組，每組10只，即正常組，模型組，參苓白術散高、中、低劑量組。高劑量組灌胃給予40 g生藥·kg-1參苓白術散水煎液；中劑量組灌胃給予20 g生藥·kg-1參苓白術散水煎液；低劑量組灌胃給予10 g生藥·kg-1參苓白術散水煎液，其余各組灌胃給予蒸餾水。按020 mL/10 g給藥體積給藥，1次/d，連續(xù)13 d。

22膠帶剝離法復制小鼠皮膚機械屏障功能障礙模型模型組，參苓白術散高、中、低劑量組從第9 d起，采用膠帶剝離法復制小鼠皮膚機械屏障功能障礙模型，2次/d，連續(xù)5 d。

23皮膚TEWL值測定分別于造模前1 d、造模第1 d及造模第5 d，用VapoMeter測量儀測定小鼠頸背部皮膚，造模第1 d以判定模型是否成功，造模第5 d以測定受試物對小鼠皮膚TEWL的干預作用。測量在室內(nèi)進行，無陽光直射，室溫20～25℃，空氣相對濕度10%～60%。測量時應固定好小鼠，保證測量儀器與待測皮膚表面垂直接觸，每一測試部位測量3次，3個數(shù)值取其平均值。

24皮膚水合度測定分別于造模前1 d、造模第1 d及造模第5 d，用MoistureMeter SC Compact測量儀測定小鼠頸背部皮膚，造模第1 d以判定模型是否成功，造模第5 d以測定受試物對小鼠皮膚水合度的干預作用測量在室內(nèi)進行，無陽光直射，室溫20～25℃，空氣相對濕度20%～70%。測量時應固定好小鼠，保證測量儀器與待測皮膚表面垂直接觸，每一測試部位測量3次，3個數(shù)值取其平均值。

3統(tǒng)計學分析

實驗數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用單因素方差分析法（One-way analysis of variance ANOVA），方差齊者采用LSD法檢驗，方差不齊者采用Tamhanes法檢驗。

4實驗結(jié)果

41參苓白術散對小鼠皮膚TEWL值的影響結(jié)果顯示，造模前1d，與正常組比較，其余各組小鼠皮膚TEWL值無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>005）。造模第1d，與正常組比較，模型組小鼠皮膚TEWL值明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0001），表明模型組小鼠皮膚機械屏障功能受損；與模型組比較，參苓白術散各給藥組小鼠皮膚TEWL值有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>005）。造模第5d，與正常組比較，模型組小鼠皮膚TEWL值明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0001）；與模型組比較，參苓白術散各給藥組小鼠皮膚TEWL值均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<001，P<0001）。結(jié)果見表1、2、3。

42參苓白術散對小鼠皮膚水合度的影響結(jié)果顯示，造模前1 d，與正常組比較，其余各組小鼠皮膚水合度無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>005）。造模第1 d，與正常組比較，模型組小鼠皮膚水合度明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0001），表明模型組小鼠皮膚機械屏障功能受損。造模第5 d，與正常組比較，模型組小鼠皮膚水合度明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0001）；參苓白術散各給藥組小鼠皮膚水合度均升高。其中高劑量組和中劑量組與模型組比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P<001，P<0001）。結(jié)果見表4、5、6。

5討論

TEWL值與皮膚水合度是評價皮膚屏障功能的重要指標[10]。TEWL是通過測定皮膚表面的水蒸氣壓梯度表明水分散失的情況，反映皮膚的水通透屏障[11]。當皮膚屏障功能受損時，TEWL值升高；相反地，TEWL的降低提示皮膚屏障的修復。TEWL值的變化可準確、穩(wěn)定地反映皮膚屏障的早期恢復過程。皮膚水合度，即皮膚角質(zhì)層含水量[12]。正常情況下，角質(zhì)層的含水量約占角質(zhì)層干重的30%～50%，若含水量低于角質(zhì)層干重的10%角質(zhì)層變脆易碎，可導致皮膚屏障功能減弱，皮膚會發(fā)生干燥、脫屑的病征。本研究使采用膠帶剝離法復制小鼠皮膚機械屏障功能障礙模型，給予參苓白術散干預后，通過測定皮膚TEWL值及皮膚水合度，研究參苓白術散對皮膚機械屏障功能障礙模型的修復作用。本實驗結(jié)果顯示造模前1d，各組小鼠皮膚TEWL值及皮膚水合度均無明顯變化；造模第1d，模型組小鼠皮膚TEWL值較正常組顯著升高，皮膚水合度較正常組顯著下降，表明造模成功；造模第5d，給藥組小鼠皮膚TEWL值較模型組顯著下降，而皮膚水合度較模型組顯著升高，說明參苓白術散具有保水作用，進而促進皮膚機械屏障功能的修復。

“健脾滲濕”是中醫(yī)治療皮膚屏障功能障礙性皮膚病的重要治法，但中醫(yī)治療往往缺乏機理研究。本研究將中醫(yī)學理論與現(xiàn)代醫(yī)學理論相結(jié)合，為中醫(yī)健脾法治療皮膚屏障功能障礙相關皮膚病提供了一定的現(xiàn)代科學依據(jù)，但參苓白術散修復皮膚屏障功能作用的機制還待進一步研究。

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