術(shù)后化療聯(lián)合欖香烯與單純手術(shù)治療對食管癌的干預(yù)效果及其與患者外周血淋巴細胞cyclinD1、p16的表達水平變化的關(guān)聯(lián)分析

劉 劍 吉浩明 劉春桂 張 燕

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術(shù)后化療聯(lián)合欖香烯與單純手術(shù)治療對食管癌的干預(yù)效果及其與患者外周血淋巴細胞cyclinD1、p16的表達水平變化的關(guān)聯(lián)分析

劉 劍 吉浩明 劉春桂 張 燕

目的 探討化療聯(lián)合欖香烯與單純手術(shù)治療對食管癌的干預(yù)效果及其與患者外周血淋巴細胞cyclinD1、p16表達水平變化的關(guān)聯(lián)。方法 本研究選取食管癌患者59例，包含單純手術(shù)治療患者30例(對照組)和術(shù)后化療并且聯(lián)合使用欖香烯進行治療的觀察組患者29例。比較分析化療聯(lián)合欖香烯與單純手術(shù)治療對食管癌的干預(yù)效果，并分析其與患者外周血淋巴細胞cyclinD1、p16的表達水平變化的關(guān)聯(lián)。采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。結(jié)果 隨訪比較2組患者治療后2年的療效情況，觀察組無病生存時間為(12.58±7.12)月，中位無病生存時間為13.5個月，均略高于對照組。2組患者治療前的cyclinD1水平及p16水平均未見差別；治療后2組的cyclinD1水平分別為(2.43±1.42)、(4.03±1.54)，p16水平分別為(6.95±2.75)、(5.02±2.55)，組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。結(jié)論 手術(shù)干預(yù)對于集體細胞周期蛋白組的調(diào)控會產(chǎn)生一定影響，cyclinD1與p16的雙向下調(diào)有可能提示術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。同時欖香烯干預(yù)會影響cyclinD1加速下調(diào)，p16下調(diào)則會受到相對抑制，可能對于控制術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有一定的功效。

化療；欖香烯；食管癌；cyclinD1；p16

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1270～1272)

細胞周期蛋白D1(chclinD1)是細胞周期G1中第1個合成的細胞周期蛋白，發(fā)揮重要作用，特別是對于細胞的G1/S期轉(zhuǎn)變影響尤為關(guān)鍵，主要作用原理涉及其通過與相應(yīng)的周期蛋白依賴性激酶結(jié)合，通過調(diào)控影響基因的轉(zhuǎn)錄來促進或者推遲進入S期的時間。當(dāng)細胞受到惡性生長信號的刺激，比如很多腫瘤進展過程中，cyclinD1常常會出現(xiàn)過表達，也使得細胞從G1加快進入S期，最終導(dǎo)致細胞失控性生長，因此cyclinD1也常常被稱為癌基因。p16蛋白具有與cyclinD1競爭結(jié)合細胞周期蛋白依賴性激酶的特征，并且p16與其結(jié)合后會導(dǎo)致酶的失活，從而阻止了蛋白質(zhì)的磷酸化過程，起到了抑制細胞增殖的作用。研究結(jié)果提示，多種腫瘤中均可見p16基因的缺失或突變，p16因此被稱為腫瘤抑制基因[1-2]。

欖香烯主要來自莪術(shù)根莖，具有獨特的非細胞毒性，具有很強的殺滅腫瘤細胞的能力，能起到抑制腫瘤生長的功效。有研究提示，欖香烯還可能通過影響細胞周期蛋白質(zhì)組中的諸多成分從而影響細胞周期的過程。欖香烯因為其抗癌作用具有廣譜性，并且高效安全對于肝腎功能基本沒有損害，也沒有骨髓抑制作用等副作用，并且還兼有提高免疫力、抗炎、抗血栓等作用，近年來被廣泛應(yīng)用于腫瘤手術(shù)或化療的輔助治療中[1-3]。

本研究擬通過觀察患者術(shù)后外周血淋巴細胞周期 cyclinD1和p16變化規(guī)律，探討欖香烯對于腫瘤的抑制作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本研究選取本院就診的確診食管癌患者59例，包含單純手術(shù)治療患者30例(對照組)和術(shù)后化療并且聯(lián)合使用欖香烯進行治療的觀察組患者29例。納入標準：納入的患者均為確診的食管癌病例，患者病例及相關(guān)信息完整，且能配合本研究；排除標準：排除其他全身性疾病患者，排除其他惡性腫瘤患者以及各種原因不能配合本研究的受試對象。觀察組患者29例，平均年齡(45.65±2.12)歲，其中男性19例，占65.52%；對照組患者30例，平均(45.18±2.63)歲，其中男性患者20例，占66.67%；2組受試對象在性別與年齡分布上未見差別，可比性良好。

1.2 方法

全部患者知情同意。使用流式細胞儀檢測血清淋巴細胞cyclinD1和p16蛋白表達水平，間接免疫熒光染色法檢測cyclinD1以及p16蛋白表達水平，首先將細胞懸液加入食管離心后棄上清，然后每管加入1 ml穿透液，常溫下反應(yīng)半小時，用PBS緩沖液洗滌；加入一抗(鼠抗人cyclinD1單抗、鼠抗人p16單抗)后室溫避光放置半小時，加入緩沖液輕輕吹打，離心后棄上清，除去未結(jié)合的熒光抗體；再次加入PBS緩沖液，樣品放置0～4 ℃環(huán)境待測。

觀察組治療方案：術(shù)后化療并聯(lián)合輸注欖香烯0.6 g/d,連續(xù)輸注5天，并觀察比較效果。比較分析術(shù)后化療聯(lián)合欖香烯與單純手術(shù)治療對食管癌的干預(yù)效果，并分析其與患者外周血淋巴細胞cyclinD1、p16的表達水平變化的關(guān)聯(lián)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計量資料以均數(shù)和標準差表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和構(gòu)成比例或發(fā)生率表示，采用χ2檢驗。檢驗水準以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者隨訪療效比較

隨訪比較2組患者治療后2年的療效情況，觀察組無病生存時間為(12.58±7.12)月，高于對照組的(8.50±6.81)月，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.269、P=0.027)。觀察組中位無病生存時間為13.5個月，均略高于對照組的8.9個月(M-W檢驗統(tǒng)計量=496.00，P<0.001)。

2.2 治療前后2組患者cyclinD1和p16水平比較

2組患者治療前的cyclinD1水平、p16水平均未見差別。治療后的cyclinD1水平及p16水平組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.01，見表1。

表1 治療前后2組患者cyclinD1和p16水平比較

3 討論

欖香烯是一種細胞毒性的中草藥提取物，具有較強的殺滅腫瘤細胞能力，還可能通過影響細胞周期蛋白質(zhì)組中的諸多成分從而影響細胞周期的過程，因為其抗癌作用具有廣譜性，并且高效安全，近年來被廣泛應(yīng)用于腫瘤手術(shù)或化療的輔助治療領(lǐng)域[2-4]。本次研究中隨訪比較2組患者治療后2年的療效情況，觀察組無病生存時間的平均值為(12.58±7.12)月，中位無病生存時間為13.5個月，均略高于對照組。證實了欖香烯聯(lián)合治療的優(yōu)良療效。

細胞周期的調(diào)節(jié)失控在各種惡性腫瘤的發(fā)生與進展中都是起重要影響作用的分子事件，因此也有學(xué)者甚至提出癌癥是一種細胞周期疾病的觀點。數(shù)據(jù)資料提示，當(dāng)前各種惡性腫瘤的發(fā)病在不同國家和地區(qū)的人群中均呈現(xiàn)增長趨勢，食管癌的發(fā)病也是如此[5-9]。不少腫瘤臨床研究已經(jīng)證實，cyclinD1以及p16這一對與細胞周期調(diào)節(jié)失控密切關(guān)聯(lián)的因子與腫瘤的發(fā)生與抑制關(guān)聯(lián)密切，cyclinD1是細胞周期首次合成的細胞周期蛋白，cyclinD1/CDK4/6復(fù)合物推動著細胞周期由G1期進入S期，cyclinD1屬于一種重要的正性調(diào)節(jié)因子，而p16則為重要的負性調(diào)節(jié)因子，和cyclinD1組成一對，共同對細胞周期的正常運行進行調(diào)控[4,10-11]，cyclinD1以及p16的異常表達可以反映腫瘤細胞生長情況以及預(yù)后狀態(tài)[10-13]。本次研究對術(shù)后化療聯(lián)合欖香烯與單純手術(shù)治療對食管癌干預(yù)后外周血淋巴細胞cyclinD1、p16的表達水平變化進行了分析。 本研究中2組患者治療前的cyclinD1水平、p16水平均未見差別。治療后的cyclinD1水平、p16水平組間均存在顯著差別(P<0.01)。手術(shù)創(chuàng)傷對于細胞周期蛋白具有一定影響，且提示此模式下術(shù)后患者有一定的可能會發(fā)生腫瘤的轉(zhuǎn)移過程。術(shù)后欖香烯聯(lián)合化療組與單純手術(shù)組治療前后的cyclinD1和p16水平對比則提示欖香烯干預(yù)后對于外周血淋巴細胞cyclinD1以及p16的作用與單純手術(shù)治療組的情況存在差別，可能與欖香烯一定程度上抑制腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移存在潛在關(guān)聯(lián)，具體機制有待今后繼續(xù)縱深研究。

總之，手術(shù)干預(yù)對于機體細胞周期蛋白組的調(diào)控會產(chǎn)生一定影響，cyclinD1與p16的雙向下調(diào)有可能提示術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。同時欖香烯干預(yù)會影響cyclinD1加速下調(diào)，p16下調(diào)則會受到相對抑制，可能對于控制術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有一定的功效。

[1] 蘇婷鳳,陳俊強,林 宇,等.同步放化療治療中晚期食管癌的預(yù)后影響因素分析〔J〕.腫瘤研究與臨床,2015,27(6):385-388.

[2] 賴霄晶,鄭 曉,毛偉敏.食管癌靶向治療的研究進展〔J〕.腫瘤學(xué)雜志,2015,21(2):142-150.

[3] Dey B,Raphael V,Khonglah Y,et al.Expression of cyclin D1 and p16 in esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Middle East J Dig Dis,2015,7(4):220-225.

[4] Luo J,Zhang C,Wang C,et al.Miz-1 promotes the proliferation of esophageal cancer cells via suppression of p21 and release of p21-arrested cyclin D1〔J〕.Oncol Rep,2016,35(6):3532-3540.

[5] Bachmann K,Neumann A,Hinsch A,et al.Cyclin D1 is a strong prognostic factor for survival in pancreatic cancer:Analysis of CD G870A polymorphism,FISH and immunohistochemistry〔J〕.J Surg Oncol,2015,111(3):316-323.

[6] 陳 艷,周冬霞,何續(xù)遜.口服欖香烯聯(lián)合TF化療方案治療中晚期食管癌的臨床療效研究〔J〕.臨床合理用藥雜志,2016,9(18):70-71.

[7] 李鐵志,石彥濤,劉瑞林,等.VEGF、TP、CyclinD1與食管癌預(yù)后相關(guān)性的臨床觀察〔J〕.中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版),2016,8(2):57-60.

[8] 張集昌,王燕蒙,李 偉.內(nèi)鏡下局部化療治療晚期食管癌、胃癌復(fù)發(fā)〔J〕.中國腫瘤臨床,1999,26(6):438-438.

[9] 朱向高,李金鑾,陳彬璞,等.三維適形放療中應(yīng)用欖香烯對食管癌治療效果的影響〔J〕.中國藥房,2016,27(14):1963-1966.

[10] Zhao S,Yi M,Yuan Y,et al.Expression of AKAP95,Cx43,CyclinE1 and CyclinD1 in esophageal cancer and their association with the clinical and pathological parameters〔J〕.Int J Clin Exp Med,2015,8(5):7324-7332.

[11] 李鐵志,石彥濤,劉瑞林,等.p16、P38、P53和CyclinD1在食道癌中表達的意義〔J〕.中國病原生物學(xué)雜志,2016,11(1):73-78.

[12] 周 儉.同步放化療聯(lián)合β-欖香烯注射液治療食管癌的臨床研究〔J〕.中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2012,9(10):69-70.

[13] 劉銀生,張清河,甘育林.晚期食道癌采用欖香烯口服乳聯(lián)合順鉑、氟尿嘧啶治療的臨床效果分析〔J〕.當(dāng)代醫(yī)學(xué),2016,22(5):138-139.

(編輯：甘 艷)

A Comparison of the Effect of Chemotherapy Combined with Elemene and Simple Surgery on Esophageal Cancer and the Relative Association with the Expression of CyclinD1 and p16 in Peripheral Blood Lymphocytes

LIU Jian,JI Haoming,LIU Chungui,et al.

Haian People's Hospital Affiliated to Nantong University,Nantong,226600

Objective To investigate the effect of chemotherapy combined with elemene and simple surgery on esophageal cancer and the correlation with the expression of cyclinD1 and p16 in peripheral blood lymphocytes.Methods 59 patients with esophageal cancer who had been diagnosed with esophageal cancer were enrolled in this study.30 patients who underwent surgery alone and postoperative chemotherapy were treated with elemene.Comparative analysis of the effect of combined chemotherapy with elemene and simple surgery on esophageal cancer and the correlation with the expression of cyclinD1 and p16 in peripheral blood lymphocytes.SPSS17.0 statistical software was used for analysis.Results The mean value of disease-free survival time was (12.58±7.12)months,and the median disease-free survival time was 13.5 months,which were slightly higher than those in the control group.The levels of cyclinD1 were (7.58±1.12)and (7.53±1.03),respectively,and the levels of p16 were (8.30±2.33)and (8.45±2.54)respectively.There was no difference between the 2 groups.The levels of cyclinD1 were (2.43±1.42)and (4.03±1.54),respectively.The levels of p16 were (6.95±2.75)and (5.02±2.55),respectively.There was significant difference between the 2 groups(P<0.01).Conclusion Surgical intervention may play an important role in the regulation of the cell cycle protein group.The two-way down-regulation of cyclinD1 and p16 may suggest the development of postoperative tumor.At the same time elemene intervention will affect the cyclinD1 accelerated down,p16 down will receive a relative inhibition,may be for the control of postoperative recurrence and metastasis have a certain effect.

Chemotherapy;Elemene;Esophageal cancer;CyclinD1;p16

226600 南通大學(xué)附屬海安人民醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.08.015

R735.1

A

1001-5930(2017)08-1270-03

2017-03-09

2017-04-12)