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    壺天宮鐘乳石變色原因的探究

    2017-08-11 00:11:54肖樂天
    中國科技教育 2016年12期
    關(guān)鍵詞:黑褐色鐘乳石天宮

    肖樂天

    研究背景

    暑假,我到位于安徽省廣德縣的太極洞旅游。在參觀洞區(qū)代表性景觀之一壺天宮時,發(fā)現(xiàn)洞內(nèi)鐘乳石為黑褐色,十分突兀。詢問導(dǎo)游、景區(qū)工作人員,他們也覺得很蹊蹺,很可惜弄不清具體原因。景區(qū)已做了不少工作以清除這些污垢,但效果并不理想。不過,通過交流,我得知了一個事實:壺天宮內(nèi)鐘乳石早前也和其他溶洞內(nèi)鐘乳石一樣呈現(xiàn)乳白色,但壺天宮后來曾被當作酒窖貯存原酒。不知是不是巧合,在貯酒一段時間后鐘乳石表面開始出現(xiàn)一些黏稠的東西,顏色逐步加深,最終成為現(xiàn)在的樣子(圖1)。游覽結(jié)束后,我一直在想,原本漂亮的鐘乳石為什么會在窖酒后就變成黑褐色呢?這些黏稠黑褐色物質(zhì)是怎么產(chǎn)生的?這一系列的問號激發(fā)了我深入探究的濃厚興趣。

    我首先在網(wǎng)上仔細搜索,發(fā)現(xiàn)與之有關(guān)的文獻記錄、研究資料都十分稀少。由于鐘乳石顏色改變是在貯藏白酒原酒后發(fā)生的,因此我判斷這可能是因貯藏白酒前后,洞內(nèi)生態(tài)環(huán)境發(fā)生改變所致。通過實地采集樣品、顯微鏡初步觀察、微生物分離純化等實驗和分析,我初步判斷壺天宮鐘乳石變色是由溶洞生態(tài)環(huán)境改變引發(fā)微生物大量滋生導(dǎo)致的。

    實驗過程

    黑褐色物質(zhì)的采集

    用無菌采樣棉簽挑取覆蓋在鐘乳石表面的黑褐色物質(zhì)適量,轉(zhuǎn)入無菌處理的采樣瓶中,密封后低溫保存于裝有冰袋的保溫盒內(nèi),帶回實驗室4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    黑褐色物質(zhì)的初步顯微觀察

    將黑褐色物質(zhì)用無菌生理鹽水適當稀釋后,取100uL涂布在載玻片并置于載物臺上;調(diào)節(jié)顯微鏡直至視野內(nèi)看到清晰的物像,拍照記錄;更換油鏡,在要觀察的位置上滴加1滴香柏油,再反復(fù)調(diào)節(jié)至看清楚標本止,拍照記錄。

    微生物的分離純化

    Luria-Bertani(LB)固體培養(yǎng)基平板的制備

    分別稱取胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g,加蒸餾水定容至1L,于115℃高壓滅菌30min。冷卻至50℃左右后,在超凈臺上倒制平板,完成后存放于4℃冰箱備用。

    微生物的分離培養(yǎng)及初步篩選

    在超凈工作臺上稱取適量黑褐色物質(zhì),加入1 mL無菌水,用移液器反復(fù)吹吸,直至樣品混合均勻。取1000uL加到盛有9000uL無菌水的離心管內(nèi),稀釋10倍制成稀釋度為10的懸液。同法按每級稀釋10倍的次序得到10、10的稀釋液。用移液器分別吸取10、10、10倍稀釋液100uL涂布于LB平板上,25℃倒置培養(yǎng)。

    分離微生物的純化

    在超凈工作臺上,從涂布平板上選取大小和形態(tài)各不相同的單菌落,用接種環(huán)在其表面挑取少量菌體,在平板上劃線。將劃線后的LB平板放于25℃培養(yǎng)箱,倒置培養(yǎng)。

    分離微生物的革蘭氏染色及觀察

    先用草酸銨結(jié)晶紫進行初染,再用盧革式碘液媒染,然后用95%乙醇脫色,最后用番紅溶液復(fù)染。用吸水紙吸掉載玻片上水膜,待染色標本干燥后置光學(xué)顯微鏡下觀察,方法同上。

    分離微生物菌株的保藏

    用無菌牙簽在分離良好的菌落表面挑取少許樣品,投入裝有LB培養(yǎng)液的試管中,蓋上管塞,于25℃、200rpm振蕩培養(yǎng)10h。用移液器吸取培養(yǎng)物850uL,加入盛有150uL無菌甘油的冷凍管中,混合均勻,置-70℃冷凍保藏。

    分離菌株的透射電鏡觀察

    取100uL培養(yǎng)24h后的菌液于無菌離心管中,滴加100uL2%磷酸鎢染色液于樣品中混勻。染色20min后,用銅網(wǎng)取樣后晾干,交給教師放置于電鏡樣品室內(nèi)進行觀察照相。

    實驗結(jié)果

    黑褐色物質(zhì)特征

    黑褐色樣品外觀黏稠,手感滑膩,有腐臭味。光學(xué)顯微鏡觀察顯示其中含有類似微生物細胞的深色不規(guī)則顆粒物和桿狀物。

    黑褐色物質(zhì)稀釋培養(yǎng)

    在LB培養(yǎng)基中對黑褐色物質(zhì)中的微生物進行了分離培養(yǎng)。結(jié)果顯示,培養(yǎng)基上沿劃線痕跡處形成了菌落,其分布由密集逐步稀疏,最后形成獨立的單菌落。根據(jù)菌落形態(tài)大小的差異,我們分離獲得了4株微生物,分別命名為H1、H2、H3和H4(見圖2)。

    分離菌株初步染色觀察

    對分離純化的菌株進行革蘭氏染色,經(jīng)光學(xué)顯微鏡觀察顯示,4株菌株細胞形態(tài)各異,均顯示為紫色,表明分離獲得的菌株可能為來自不同種屬的革蘭氏陽性細菌。

    透射電鏡觀察

    與光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果一致,透射電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示4株細菌體外均被莢膜包裹(見圖3),且部分菌株有長鞭毛。

    討論

    太極洞景區(qū)的壺天宮曾被開發(fā)用于洞藏白酒原酒。然而,隨著貯酒年份的增加,洞內(nèi)鐘乳石表面逐漸生成一層黏稠物質(zhì)。隨著時間延長,該物質(zhì)的顏色發(fā)生變化,致使鐘乳石由原初的乳白色變?yōu)楹诤稚H绾涡迯?fù)受損的鐘乳石成為景區(qū)亟待解決的難題。因此,探索壺天宮貯酒后鐘乳石變黑成因,不僅可為該景點的修復(fù)提供理論依據(jù),也可為其他溶洞資源的開發(fā)利用和保護管理提供科學(xué)指導(dǎo)。不同于相關(guān)溶洞中鐘乳石污染的報道,在壺天宮用于貯藏白酒原酒的2年問,洞內(nèi)鐘乳石表層逐漸被一層黑褐色的黏稠物質(zhì)包裹??梢酝茢?,黑褐色物質(zhì)的形成與貯酒行為直接相關(guān)。對鐘乳石上黑褐色黏稠物質(zhì)的顯微鏡檢查結(jié)果顯示,黏稠物質(zhì)中包含少量細菌和疑似微生物細胞碎片物,提示黑褐色物質(zhì)可能來源于微生物。然而,實驗室培養(yǎng)條件下的微生物細胞及裂解物均為無色或其他顏色,并非目前所見的黑褐色黏稠物質(zhì)。如果黑褐色物質(zhì)來源于微生物,它們是怎樣形成的呢?

    結(jié)合溶洞的生態(tài)環(huán)境和觀察的實驗結(jié)果,推測黑褐色物質(zhì)的形成過程如下:溶洞內(nèi)環(huán)境相對封閉,經(jīng)過長時間的自然修飾和適應(yīng),形成了穩(wěn)定、獨特的微生態(tài)環(huán)境,各種生物特別是微生物之間相互制約,處于平衡狀態(tài)。在寡營養(yǎng)、高濕度、低氣溫條件下,溶洞內(nèi)微生物生長緩慢,總量處于較低水平,覆蓋在鐘乳石表面的微生物及其裂解產(chǎn)物可被溶洞環(huán)境及時有效轉(zhuǎn)化,或(和)被新形成的鐘乳石覆蓋,雖經(jīng)幾萬甚至幾十萬年時間,鐘乳石表面依舊呈現(xiàn)天然乳白色。

    然而,當白酒原酒貯藏于相對封閉的溶洞后,酒壇內(nèi)易揮發(fā)的酒精等物質(zhì)就會逐漸擴散積累,濃度不斷增大,加之高濕環(huán)境,大量的揮發(fā)物質(zhì)隨水蒸氣凝結(jié)在洞內(nèi)石山、石乳、石罩等之上,為微生物的生長提供了充足營養(yǎng),導(dǎo)致某些類群的微生物大量過度繁殖;而另一些類群的微生物則逐漸處于劣勢,甚至死亡,從而改變了原有微生物群落結(jié)構(gòu),微生物之間及微生物與環(huán)境之間的平衡遭到破壞。最終,由于過量繁殖的微生物及其裂解產(chǎn)物無法完全被環(huán)境轉(zhuǎn)化,于是不斷積累在鐘乳石表面,其中含有的脂肪、碳水化合物等物質(zhì),在空氣中氧的作用下,逐漸變黑,并與水混合,形成黑褐色黏稠物質(zhì)。

    該項目獲得第30屆全國青少年科技創(chuàng)新大賽創(chuàng)新成果競賽項目中學(xué)組微生物學(xué)一等獎。

    專家評語

    該項目從開始的好奇探究到思考,符合中學(xué)生的思維和知識水平。研究內(nèi)容合理,技術(shù)方法規(guī)范,有地方特色。建議利用分離的菌株進一步侵染鐘乳石,模擬洞中的條件,以驗證本項目分離鑒定出的微生物是否為鐘乳石變色的原因。

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