海風藤提取物灌胃對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平影響及對痛風大鼠足跖腫脹的防治作用

張柯媛，熊灝，曹斌，覃藝群，劉安韜，劉喜華，農(nóng)志歡，李冬梅，韋桂寧，周小雅

(1廣西衛(wèi)生職業(yè)技術學院，南寧530023；2廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院)

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海風藤提取物灌胃對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平影響及對痛風大鼠足跖腫脹的防治作用

張柯媛1，熊灝1，曹斌2，覃藝群1，劉安韜1，劉喜華1，農(nóng)志歡2，李冬梅2，韋桂寧2，周小雅1

(1廣西衛(wèi)生職業(yè)技術學院，南寧530023；2廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院)

目的 觀察海風藤提取物灌胃對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及對大鼠痛風性炎癥的防治作用。方法 取雄性昆明種小鼠100只隨機分為A、B組各50只。A、B組各分為5個亞組，其中3個亞組分別以高(9.00 g/kg)、中(4.50 g/kg)、低(2.25 g/kg)劑量的海風藤提取物灌胃，另2個亞組分別給予20 mg/kg別嘌醇片和等體積蒸餾水灌胃，A、B兩組灌胃均1次/d、連續(xù)12 d。A組于末次灌胃后1 h，腹腔注射次黃嘌呤600 mg/kg制作高尿酸血癥模型，B組不給予次黃嘌呤。A、B組分別于腹腔注射后2.5 h、末次灌胃1 h后眼眶靜脈取血，采用磷鎢酸比色法檢測血清尿酸。取雄性Wistar大鼠40只隨機分為1、2、3、4組各10只。1、2組分別采用高(9.00 g/kg)、低(2.25 g/kg)劑量的海風藤提取物灌胃，3、4組予等體積蒸餾水灌胃，各組灌胃1次/d，連續(xù)10 d。第10天灌胃1 h后取1、2、3組大鼠于右后足跖皮下注射100 g/L的尿酸鈉結晶0.15 mL誘導痛風性炎癥。分別于尿酸鈉結晶注射后1、2、3、4、5、6 h觀察各組大鼠右后足跖腫脹情況，計算腫脹度。結果 A組的高劑量海風藤提取物、中劑量海風藤提取物亞組小鼠血清尿酸水平低于A、B組的蒸餾水亞組(P均<0.05)。3組大鼠尿酸鈉結晶注射后不同時間右后足跖腫脹度均高于4組(P均<0.05)。尿酸鈉結晶注射后3、4、6 h時1組大鼠右后足跖腫脹度低于3組(P均<0.05)。尿酸鈉結晶注射后2 h時2組大鼠右后足跖腫脹度低于3組(P<0.05)。結論 海風藤提取物可降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，防治大鼠痛風性炎癥。

痛風；尿酸；痛風性炎癥；海風藤；中藥

痛風是以嘌呤代謝或排泄失常導致血尿酸升高，并伴有結締組織內(nèi)尿酸鈉結晶沉著為特征的代謝性疾病。近年來，隨著人們飲食結構的改變，血清尿酸水平升高，痛風發(fā)病率迅速上升[1，2]。另外，痛風還是腎臟病變、心血管疾病、糖尿病、惡性腫瘤、帕金森病等的危險因素[3，4]。因此，積極防治高尿酸血癥及痛風有重要意義。目前，臨床上用于治療高尿酸血癥的藥物主要有減少尿酸生成的藥物如別嘌呤醇、fexbuxostat等，但不良反應較多，如引起過敏、肝腎損傷、骨髓抑制、胃腸道反應、關節(jié)痛和皮疹等，在一定程度上限制了臨床應用[5]；促尿酸排泄藥主要作用于腎近曲小管的尿酸鹽轉運體，抑制尿酸重吸收，代表有丙磺舒、苯磺唑酮、苯溴馬隆等，但苯溴馬隆有引起暴發(fā)性肝炎的危險，已從部分歐洲市場撤出[6]。因此，研究高效、低毒的抗高尿酸血癥藥物已迫在眉睫。海風藤為胡椒科植物風藤的干燥藤莖，味辛、苦，性微溫，具祛風濕、通經(jīng)絡、止痹痛的功效，用于風寒濕痹、肢節(jié)疼痛、筋脈拘攣、屈伸不利癥[7]。民間有將海風藤用于治療痛風的臨床實踐，但相關基礎研究還沒有文獻報道。本研究觀察了海風藤提取物對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及對大鼠痛風性炎癥的防治作用，為新型抗痛風藥物的研究提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、試劑及儀器 清潔級昆明種雄性小鼠100只、體質量18～22 g，雄性Wistar大鼠40只、體質量180～220 g，均來自廣西醫(yī)科大學動物實驗中心(動物合格證號SCXK桂2009-0003)。海風藤提取物由廣西中醫(yī)藥研究院何開家教授鑒定，提取方法：1 000 g海風藤粉碎，加6 L水煮提取3次，1 h/次，過濾，取上清液，濃縮，將濃縮藥液放冷后，邊攪拌邊緩慢加入75%乙醇，密閉冷藏24 h，濾過，收集上清液，取上清液濃縮成稠膏。sc微晶型尿酸鈉結晶(MSU)制備方法：MSU需預制備，將10 g尿酸溶解于1 500 mL沸水中，用0.5 mol/L的NaOH調pH至7.4，沸騰后常溫冷卻，濾后即得MSU，隨后將其高溫滅菌，使用前1 h用去熱原質注射用水配成100 mg/mL的混懸液。次黃嘌呤和尿酸均為美國Sigma公司產(chǎn)品。別嘌醇片購自重慶科瑞制藥有限責任公司(批號319002)。尿酸測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所(20161208)。MultiskanTMGO全波長酶標儀購自Thermo Fisher公司。

1.2 海風藤提取物對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響觀察 雄性昆明種小鼠100只分為A、B組各50只。A、B組各分為5個亞組，其中3個亞組分別以高(9.00 g/kg)、中(4.50 g/kg)、低(2.25 g/kg)劑量的海風藤提取物灌胃，另2個亞組分別給予20 mg/kg別嘌醇片和等體積蒸餾水灌胃。兩組灌胃均1次/d，連續(xù)12 d。A組于末次給藥后1 h，腹腔注射次黃嘌呤600 mg/kg制作高尿酸血癥模型[8]，腹腔注射后2.5 h，眼眶靜脈取血，3 000 r/min離心10 min，取血清。B組不給予次黃嘌呤，末次灌胃1 h后眼眶靜脈取血，3 000 r/min離心10 min，取血清，采用磷鎢酸比色法檢測血清尿酸。實驗重復3次，取平均值。

1.3 海風藤提取物對痛風性炎癥大鼠足跖腫脹的防治作用觀察 取雄性Wistar大鼠40只，隨機分為1、2、3、4組，每組各10只。1、2組分別以高(9.00 g/kg)、低(2.25 g/kg)劑量的海風藤提取物灌胃，3、4組予等體積蒸餾水灌胃，各組均1次/d，連續(xù)10 d。第10天灌胃給藥1 h后取1、2、3組大鼠，于大鼠右后足跖皮下注射100 g/L的MSU 0.15 mL誘導痛風性炎癥，分別于注射后1、2、3、4、5、6 h觀察大鼠右后足跖腫脹情況，測其右后足跖周徑，計算足跖腫脹度。足跖腫脹度=(致炎后足跖周徑-致炎前足跖周徑)/致炎前足跖周徑×100%。

2 結果

2.1 A、B組小鼠血清尿酸水平比較 A組中，給予高劑量海風藤提取物、中劑量海風藤提取物、低劑量海風藤提取物、別嘌醇片、蒸餾水亞組小鼠血清尿酸水平分別為(403.67±46.79)、(351.17±39.16)、(408.09±45.34)、(372.29±49.33)、(457.61±46.79)μmol/L；B組中5個亞組小鼠血清尿酸水平分別為(397.98±35.82)、(384.57±23.11)、(394.15±33.52)、(379.19±35.16)、(392.66±40.87)μmol/L。A組的高劑量海風藤提取物、中劑量海風藤提取物亞組小鼠血清尿酸水平低于A、B組的蒸餾水亞組(P均<0.05)。A組中不同劑量海風藤亞組與別嘌呤片亞組血清尿酸水平差異無統(tǒng)計學意義。B組各亞組間血清尿酸水平差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 1、2、3、4組大鼠右后足跖腫脹度比較 3組大鼠MSU注射后不同時間右后足跖腫脹度均高于4組(P均<0.05)。MSU注射后3、4、6 h時1組大鼠右后足跖腫脹度低于3組(P均<0.05)。MSU注射后2 h時2組大鼠右后足跖腫脹度低于3組(P<0.05)。詳見表1。

表1 注射MSU后不同時間1、2、3、4組大鼠右后足跖腫脹度比較

注：與3組比較：*P<0.05；與4組比較，#P<0.01。

3 討論

高尿酸血癥是痛風的病理基礎，高尿酸血癥的發(fā)病機制目前主要認為與尿酸生成過多和尿酸在腎臟的排泄謝障礙有關。尿酸生成過多是高尿酸血癥的主要病因之一。當富含嘌呤類食物攝入過多，體內(nèi)尿酸負荷增加，可引起高尿酸血癥；當內(nèi)源性嘌呤代謝異常，尿酸合成關鍵酶磷酸核糖焦磷酸合成酶、磷酸核糖焦磷酸酰胺移換酶、次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶、黃嘌呤氧化酶(XOD)等的濃度或活性異常，可引起合成尿酸代謝產(chǎn)物增多，促進鳥嘌呤、黃嘌呤分別向鳥嘌呤核苷酸和黃嘌呤核苷酸轉化，從而增加尿酸含量，上述酶功能缺陷也可誘發(fā)高尿酸血癥[12，13]。尿酸在腎臟排泄障礙是高尿酸血癥的另一個重要病因。腎臟是尿酸排泄的重要器官，尿酸排泄相對減少會引起高尿酸血癥。腎小管上皮細胞編碼的葡萄糖轉運蛋白、尿酸轉運蛋白1、陰離子轉運蛋白(OAT)1、OAT3是尿酸重吸收或轉運的主要轉運體，它們表達異常或功能出現(xiàn)障礙也會引起與尿酸濃度升高，導致高尿酸血癥。另有研究表明，痛風或高尿酸血癥的發(fā)病與炎癥有密切關系，涉及NO、TNF-α、IL-6的表達，一氧化氮合酶及環(huán)氧化酶2活性的調節(jié)[14，15]。

部分中藥材具有優(yōu)良的抗痛風作用，如主產(chǎn)于廣西的擬黑多刺蟻，能顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，并具有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛作用，可能與其含有不飽和脂肪酸有關，且毒性小，使用安全[9，10]；寬筋藤提取物不僅能顯著降低高尿酸小鼠的血清尿酸水平，也能顯著緩解痛風性炎癥[11]。海風藤與這些中藥一樣，在抗痛風作用方面也有一定效果。現(xiàn)代藥理學研究結果表明，海風藤具有良好的抗炎和抗氧化應激作用。海風藤提取物可通過調節(jié)滑膜組織中NF-κB、IκB、IκK的表達水平對類風濕性關節(jié)炎起一定的治療作用，通過抑制Aβ1-12寡聚體激活小膠質細胞引起的IL-1β、TNF-α過量表達從而改善老年性癡呆(AD)模型大鼠的學習記憶能力[16，17]。

本研究觀察了海風藤提取物對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及對大鼠痛風性炎癥的防治作用，結果顯示，A組的高劑量海風藤提取物、中劑量海風藤提取物亞組小鼠血清尿酸水平低于A、B組的蒸餾水亞組；3組大鼠注射MSU后不同時間右后足跖腫脹度均高于4組，注射MSU后3、4、6 h時1組大鼠右后足跖腫脹度低于3組，注射MSU后2 h時2組大鼠右后足跖腫脹度低于3組。上述結果表明海風藤提取物可顯著降低高尿酸血癥小鼠血液尿酸水平且對正常小鼠尿酸水平無顯著影響，可抑制MSU引起的大鼠足跖腫脹。我們推測海風藤抗痛風作用的藥理活性可能與其抗炎作用有關，涉及對炎癥因子及相關轉運蛋白的調控；通過影響尿酸合成的關鍵環(huán)節(jié)從而影響尿酸生成；或通過影響尿酸轉運因子的活性或表達水平，影響尿酸在腎臟的排泄，達到抗高尿酸作用。海風藤提取物含有海風藤酮、24-乙基-7，22-二烯膽甾醇、細葉青蔞藤酮醇、5，7，4-三羥基異黃酮和巴豆環(huán)氧素成分[18]。研究[19]表明，某些植物黃酮類具有治療高尿酸血癥的作用，山楂總黃酮能調節(jié)XOD的活性，調節(jié)血尿酸水平，減輕高尿酸造成的血管內(nèi)皮細胞功能損傷。海風藤含有黃酮類化合物，具有廣泛的藥理活性，但其具體的抗痛風作用機制仍有待進一步研究。

[1] Zeng QY, Chen R, Darmawan J, et al. Rheumatic diseases in China[J]. Arthritis Res Ther, 2008,10(1):17.

[2] Weaver AL. Epidemiology of gout[J]. Cleve Clin J Med, 2008,75(Suppl 5):S9-S12.

[3] Baker JF, Schumacher HR. Update on gout and hyperuricemia[J]. Int J Clin Pract, 2010，64(3):371-377.

[4] Smith HS, Bracken D, Smith JM. Gout: current insights and future perspectives[J]. J Pain, 2011,12(11):1113-1129.

[5] Bisht M, Bist SS. Febuxostat: a novel agent for management of hyperuricemia in gout[J]. Indian J Pharm Sci, 2011,73(6):597-600.

[6] Jansen TL, Reinders MK, van Roon EN, et al. Benzbromarone withdrawn from the europeanmarket: another case of absence of evidence is evidence of absence[J]. Clin Exp Rheumatol, 2004,22(5):651.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典：一部[M]．北京：化學工業(yè)出版社,2010：275-276．

[8] 李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上?？茖W技術出版社,2006：644-645.

[9] 韋桂寧,蘇啟表,何飛,等.廣西黑螞蟻乙醇提取物中降低小鼠血清尿酸水平低極性組分的篩選與化學成分分析[J].中國藥理學與毒理學雜志,2013,27(4):673-677.

[10] 韋桂寧,蘇啟表,曾憲彪,等.擬黑多刺蟻乙醇提取物石油醚部位抗痛風作用及物質基礎研究[J].中藥藥理與臨床,2013,29(1):99-103.

[11] 張柯媛,劉喜華,覃藝群,等.寬筋藤提取物對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及對大鼠痛風性炎癥的預防作用[J].山東醫(yī)藥,2017,57(7):13-17.

[12] Petru L, Pavelcova K, Sebesta I, et al.Genetic background of uric acid metabolism in a patient with severe chronic tophaceous gout[J]. Clin Chim Acta, 2016,460:46-49.

[13] Chandekar P, Madke B, Kar S, et al. Lesch-Nyhan Syndrome in an Indian Child[J]. Indian J Dermatol, 2015,60(3):298-300.

[14] Marzocco S, Calabrone L, Adesso S, et al. Anti-inflammatory activity of horseradish (Armoracia rusticana) root extracts in LPS-stimulated macrophages[J]. Food Funct, 2015,6(12):3778-3788.

[15] Mandal AK, Mount DB. The molecular physiology of uric acid homeostasis[J]. Annu Rev Physiol, 2015,77:323-345.

[16] 秦晴,闕金花,張玉琴,等.海風藤提取物對膠原誘導性關節(jié)炎大鼠的影響[J].中國民族民間醫(yī)藥,2015,23(7):19-20.

[17] 鄭梅梅,賀燕,馬艷,等.海風藤提取物對AD模型大鼠學習記憶的影響[J].中華行為醫(yī)學與腦科學雜志,2011,20(10):878-890.

[18] 任風芝,張麗,牛桂云,等.海風藤的化學成分研究[J].中草藥,2005,36(2):184-185.

[19] 張知貴,楊華.山楂葉總黃酮對高尿酸血癥大鼠血尿酸及血管內(nèi)皮細胞功能的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(12):259-261.

廣西自然科學基金資助項目(2015GXNSFBA139150)。

曹斌(E-mail: caobinJ@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.27.010

R589.7

A

1002-266X(2017)27-0037-03

2017-04-28)