瑯玡榆組培快繁技術(shù)

馬贊留++蔡紅海++崔成華++錢海云

摘要：本文采用瑯玡榆的腋芽為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化、生根和移栽過程的研究，建立起了瑯玡榆無性植株再生的快繁體系。

關(guān)鍵詞：瑯玡榆；組培；快繁

基金項目：南通市重大科技創(chuàng)新專項計劃項目（HL2014003 ）

中圖分類號： S788 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.15.016

瑯玡榆，榆科榆屬，落葉喬木，陽性樹種，樹皮淡褐灰色，裂成薄片脫落。小枝幼時密被柔毛，后變無毛，灰色或暗灰色，無木栓翅。冬芽卵圓形，芽鱗被毛[1]。葉互生，寬倒卵形、長圓狀倒卵形或長圓狀橢圓形，長6～18厘米，寬3～10厘米，先端短尾尖或尾狀漸尖，基部偏斜，楔形至心形，邊緣具重鋸齒，上面密被短硬毛，粗糙，下面密被柔毛，側(cè)脈15～21對。葉柄長1～1.5厘米，密被長柔毛。春季先葉開花，在生枝葉腋排成簇狀聚傘花序。翅果窄倒卵形、長圓狀倒卵形或?qū)挼孤研危L1.5～2.5厘米，寬1～1.7厘米，兩面及邊緣疏被或密被柔毛，果核位于翅果的中上部，上端接近缺口，果梗長12毫米，被短毛。稍耐蔭、耐旱亦耐濕，耐鹽堿，適合各類土壤生長[2]。本文對瑯玡榆的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)進(jìn)行研究，以期縮短瑯玡榆的育種周期，加快對該樹種的研究進(jìn)程，從而更多地為生產(chǎn)提供技術(shù)支持[3，4]。

1 材料與方法

1.1 外植體的采集及處理

3月中旬從室外采集瑯玡榆的腋芽，在流水下沖洗30分鐘，然后在超凈工作臺上用75%酒精消毒30秒，用無菌水沖洗1次，放入1%次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，無菌水沖洗5次，待用。

1.2培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度在（25±2）℃的恒溫條件下，光照條件一般是2000 lx，光照每日 12～16小時。

1.3 愈傷組織的誘導(dǎo)

在無菌條件下，將消毒的外植體分別接種不同生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上（見表1），誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生。每處理10瓶，每瓶5個葉片，重復(fù)3次。26天后，調(diào)查出愈率和愈傷組織長勢。出愈率=（形成愈傷組織的葉片數(shù)/接種葉片數(shù)）×100%。

1. 4 愈傷組織分化培養(yǎng)

將培養(yǎng) 26天，生長良好的愈傷組織切成邊長約為 0.5厘米的正方體小塊，接種于不同的分化培養(yǎng)基（見表2），誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生不定芽。每處理 10 瓶，每瓶3個愈傷塊，重復(fù)3次。45天 后調(diào)查平均出芽數(shù)和再生頻率。愈傷組織上產(chǎn)生的不定芽生長到一定高度時，可直接接種于增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

平均出芽數(shù)=分化出的不定芽總數(shù)/接種愈傷塊數(shù)

再生頻率=（產(chǎn)生不定芽的愈傷塊數(shù)/接種愈傷塊數(shù)）×100%

1.5誘導(dǎo)生根培養(yǎng)

生根培養(yǎng)基采用1/2 MS基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6-BA 、IBA及NAA 誘導(dǎo)生根，具體處理見表3。每處理 10 瓶，每瓶 5 個嫩梢，重復(fù) 3 次。30天后調(diào)查統(tǒng)計生根率、平均生根條數(shù)、平均根長及平均莖高。

生根率=（不定根發(fā)生的莖段數(shù)/接種莖段數(shù)）×100%

平均生根條數(shù)=生根條數(shù)/接種莖段數(shù)

平均根長=根長總合/生根總條數(shù)

平均莖高=芽苗總高度/芽苗總數(shù)

1. 6 煉苗與移栽

當(dāng)根系得到基本發(fā)育后，將培養(yǎng)瓶移到室外進(jìn)行閉瓶煉苗7～10天左右，遮蔭度為50%～70%。然后在自然光下進(jìn)行開瓶煉苗2～3 天。開瓶煉苗可以分階段進(jìn)行，即首先松蓋1～2 天，然后部分開蓋1～2天，最后完全揭蓋。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆愈傷組織誘導(dǎo)的影響

從不同生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織結(jié)果（見表4）。9個處理中瑯玡榆的腋芽都能產(chǎn)生愈傷組織。處理A1～A3中產(chǎn)生的愈傷組織白色柔軟，培養(yǎng)15天后逐漸變?yōu)楹稚?，沒有再生能力。當(dāng)6-BA為3 mg/L時，愈傷組織多為綠色，長勢良好，宜產(chǎn)生不定芽，且NAA為0.3mg/L 時出愈率最高為91.3%。當(dāng)6-BA為4mg/L 時，愈傷組織長勢下降且出愈率下降。

2.2不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆愈傷組織分化的影響

在 MS 培養(yǎng)基中添加不同濃度的 TDZ、NAA 對瑯玡榆的愈傷進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng) 45天后進(jìn)行調(diào)查。由表 5可知， 在TDZ濃度為2 mg/L，死亡率在69%以上，再生頻率只有7%以下，基本上不產(chǎn)生不定芽。在TDZ濃度為0.5mg/L，瑯玡榆的愈傷分化死亡率有所上升在46%以下，再生頻率在17%以上，但不定芽的量不多。當(dāng)TDZ濃度為1.5mg/L，NAA濃度為0.4mg/L，分化的不定芽最多，死亡率達(dá)3.8%，再生頻率為62.6%。

2.3不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆生根的影響

接種數(shù)天后逐漸從基部產(chǎn)生數(shù)條不定根，培養(yǎng) 30天后調(diào)查其生根狀況。結(jié)果表明（見表6）：當(dāng)IBA濃度在0.05mg/L，生根率最高在80%以上，其中與IAA 0.004mg/L和 NAA 4mg/L組合，生根效果最好，生根率在100%，平均根長達(dá)0.8厘米，平均生根數(shù)為8.5，平均莖高為3.2厘米。隨著IBA濃度的加大，在0.1mg/L濃度時，生根率下降20%以下，生根效果也明顯下降。

2.4 移栽

移栽之前應(yīng)先閉瓶煉苗，再開瓶煉苗，使其逐步適應(yīng)外界環(huán)境。移栽基質(zhì)選用砂和蛭石質(zhì)量比1：2。溫度保持在 25℃左右。約25天后瑯玡榆移栽苗的成活率在92%。

3 結(jié)論

瑯玡榆最優(yōu)化的組培成苗的生長調(diào)節(jié)劑配方是：愈傷組織其誘導(dǎo)配方是A6： MS+6-BA 3 mg/L+ NAA 0.3mg/L；愈傷組織分化配方是B5：MS+ TDZ 1.5mg/L+ NAA 0.4mg/L；生根配方是C4：1/2MS+6-BA 0.05 mg/L+ IBA 0.004 mg/L +NAA 4.0mg/L。

參考文獻(xiàn)

[1]鄭萬鈞主編.中國樹木志：第 3 卷[M].北京：中國林業(yè)出版社，1997.54-55.

[2]傅立國.中國榆屬的研究[J].東北林學(xué)院學(xué)報，1980（03）：1-40.

[3]朱大保.國外楊樹組培微繁技術(shù)的進(jìn)展[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報，1990，12（01）：84-91.

[4]陳正華.木本植物組織培養(yǎng)及其應(yīng)用[M].北京：高等教育出版社，1986.

作者簡介：馬贊留，本科學(xué)歷，工程師，研究方向：園藝研究。