非酒精性脂肪肝患者血清脂肪細(xì)胞因子Chemerin與IL-1β、IL-8的相關(guān)性研究

賴 敏，張仕華，晉瓊玉，黃 雋，徐 靜，曾洪燕，秦亞錄，吳多江，葛 斌，徐 革，吳 攀

(成都市郫都區(qū)人民醫(yī)院 a．消化內(nèi)科;b．心內(nèi)科;c．腎內(nèi)科;d．檢驗(yàn)科，四川 成都 611730)

非酒精性脂肪肝患者血清脂肪細(xì)胞因子Chemerin與IL-1β、IL-8的相關(guān)性研究

賴 敏a，張仕華a，晉瓊玉a，黃 雋a，徐 靜a，曾洪燕b，秦亞錄b，吳多江c，葛 斌d，徐 革d，吳 攀a

(成都市郫都區(qū)人民醫(yī)院 a．消化內(nèi)科;b．心內(nèi)科;c．腎內(nèi)科;d．檢驗(yàn)科，四川 成都 611730)

目的 探討非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清中脂肪細(xì)胞因子Chemerin與白介素(IL)-1β、IL-8的相關(guān)性。方法2014年1月至2015年6月我院60例NAFLD患者，同期健康體檢者29例(對(duì)照組)。檢測(cè)兩組血清脂肪細(xì)胞因子Chemerin、IL-1β和IL-8水平，并分析其相關(guān)性。結(jié)果NAFLD組血清Chemerin、IL-1β、IL-8明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，Chemerin與IL-1β和IL-8呈正相關(guān)(P＜0.01)。結(jié)論NAFLD患者血清脂肪因子Chemerin顯著升高，且與IL-1β和IL-8密切相關(guān)。chemerin、IL-1β和IL-8可能參與了NAFLD的發(fā)生、發(fā)展。

脂肪細(xì)胞因子;chemerin;非酒精性脂肪肝;白介素-1β;白介素-8

隨著人們生活方式與飲食習(xí)慣的改變，非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的發(fā)病率逐年增加，成為慢性肝病的常見(jiàn)原因［1］，我國(guó) NAFLD的患病率約為 15%［2］。研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD與肥胖、胰島素抵抗等代謝綜合征密切相關(guān)［3］，存在脂肪組織和肝臟等的天然免疫功能紊亂［4］，并且可能是胰島素抵抗并發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，是在首次打擊的基礎(chǔ)上，由活性氧誘導(dǎo)的發(fā)生在肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的炎癥反應(yīng)［5］。近年研究認(rèn)為，脂肪組織是內(nèi)分泌器官之一，能分泌多種脂肪細(xì)胞因子，包括瘦素、脂聯(lián)素和抵抗素等，在能量代謝中起重要作用［6］。Chemerin是2007年被確認(rèn)的一種新的脂肪細(xì)胞因子，不僅可通過(guò)自分泌或旁分泌途徑調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞代謝，還具有促炎作用，與肥胖和代謝綜合征等密切相關(guān)。本研究探討 NAFLD患者血清Chemerin水平的變化及其與IL-1β和IL-8的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇我院消化內(nèi)科2014年1月至2015年6月住院治療的NAFLD患者60例(NAFLD組)，其中非酒精性脂肪性肝炎21例，非酒精性單純性脂肪肝39例，均符合2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病分會(huì)非酒精性脂肪性肝病診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］。其中男34例，女26例，年齡(47.21±11.79)歲。排除病毒性肝炎、藥物性肝炎、自身免疫性肝病、肝豆?fàn)詈俗冃?、全胃腸外營(yíng)養(yǎng)、甲狀腺功能亢進(jìn)或減退、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、阻塞性睡眠呼吸暫停、嚴(yán)重感染及心肺功能不全、多囊卵巢綜合癥、處于妊娠期、哺乳期及口服避孕藥女性及可導(dǎo)致脂肪肝的其他疾病。選取同期我院健康體檢者29例(對(duì)照組)，男14例，女15例，年齡(43.17±14.14)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。所有入選患者均簽署書面知情同意書。

1.2 方法兩組均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽靜脈血1管離心后，將血清放置在－80℃保存待測(cè)。采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定人血清IL-1β、IL-8和Chemerin水平。Chemerin ELISA試劑盒購(gòu)自英國(guó)Abcom公司，IL-1β和IL-8試劑盒購(gòu)自美國(guó)Biotech公司，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行、采用酶標(biāo)儀(上海賽默非世爾公司Mutiskan Mk3型)測(cè)定吸光度值，選定波長(zhǎng)450 nm。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清 IL-1β、IL-8和 Chemerin水平比較NAFLD患者外周血IL-1β、IL-8和Chemerin水平均高于對(duì)照組(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組血清IL-1β、IL-8和Chemerin水平比較

2.2 血清Chemerin與IL-1β和IL-8水平的相關(guān)性 NAFLD患者血清Chemerin與IL-1β和IL-8水平均呈正相關(guān)(r分別為0.836、0.766，P＜0.01)。

3 討論

NAFLD是一種與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝臟損傷，疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝(Nonalcoholic simple fatty liver，NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic fatty hepatitis，NASH)及其相關(guān)肝硬化和肝細(xì)胞癌，其中定居于肝內(nèi)的巨噬細(xì)胞即Kupffer細(xì)胞在其發(fā)病機(jī)制中起重要作用。游離脂肪酸高度氧化增加氧自由基的形成，進(jìn)一步導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化和線粒體的功能紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞因子(主要包括腫瘤壞死因子、IL-6、IL-8、IL-10和C反應(yīng)蛋白等)的釋放和肝細(xì)胞損傷。炎癥的持續(xù)存在則激活肝臟星狀細(xì)胞，還包括其它細(xì)胞的活動(dòng)，如I型膠原和IV型膠原細(xì)胞的沉積，從而啟動(dòng)肝臟纖維增生，形成肝纖維化。進(jìn)展性肝纖維化及持續(xù)炎癥壞死可導(dǎo)致肝小葉結(jié)構(gòu)改建，最終形成肝硬化。因此炎癥在整個(gè)NAFLD的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用。

Chemerin是新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子之一，以前體蛋白Proehemerin形式分泌，經(jīng)絲氨酸蛋白酶水解激活后具有活性，中性粒細(xì)胞、凝血纖溶系統(tǒng)和炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的凝血因子Ⅻa、Ⅶa、纖溶酶、尿激酶、纖維蛋白溶酶原激活物(t-PA)、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等均可激活 Chemerin［8］。Chemerin在人體的多種組織廣泛表達(dá)，在脂肪組織、腎上腺、肝臟、肺、胰腺、胎盤、卵巢、皮膚等都有表達(dá)，其中主要表達(dá)于白色脂肪組織、肝臟和肺。

有研究發(fā)現(xiàn)Chemerin血清濃度與炎癥介質(zhì)高敏C 反應(yīng)蛋白、IL-6，TNF-a呈正相關(guān)［9］;另一研究也證實(shí)在小鼠脂肪細(xì)胞成熟過(guò)程中，chemerin和chemR23的表達(dá)顯著升高，并且在高脂飲食喂養(yǎng)的小鼠中二者表達(dá)水平上調(diào)［10］。還有研究者［11］通過(guò)對(duì)膽堿-蛋氨酸缺乏飼料(MCD)誘導(dǎo)NAFLD不同時(shí)期大鼠肝臟Chemerin及其受體表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化研究發(fā)現(xiàn)，Chemerin及其受體的表達(dá)變化可能參與了MCD飼料誘導(dǎo)的NAFLD的發(fā)病過(guò)程。以上研究表明，Chemerin不僅作為脂肪細(xì)胞因子發(fā)揮作用，而且可作為趨化因子發(fā)揮趨化作用，通過(guò)旁分泌途徑，使巨噬細(xì)胞向肝臟細(xì)胞募集進(jìn)而釋放炎性因子，導(dǎo)致肝臟炎性反應(yīng)增強(qiáng)及加重胰島素抵抗，參與NAFLD的發(fā)生。體內(nèi)外的研究結(jié)果表明Chemerin可能在炎癥反應(yīng)的不同階段起不同的作用，在炎癥初始階段可能發(fā)揮招募各類免疫細(xì)胞，促進(jìn)炎癥發(fā)生，增強(qiáng)免疫應(yīng)答的作用;而在炎癥緩解期可能加速中性粒細(xì)胞的清除，抑制巨噬細(xì)胞活化，發(fā)揮抗炎作用［12］。NAFLD最主要的病理改變?yōu)楦渭?xì)胞脂肪變及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。這些結(jié)果也提示，Chemerin可能在非酒精性脂肪性肝病的炎癥過(guò)程中發(fā)揮作用［13］。

IL-1大部分來(lái)源于激活的單核/巨噬細(xì)胞，另外少部分來(lái)源于心肌細(xì)胞和淋巴細(xì)胞［14］。IL-1據(jù)其等電點(diǎn)不同可分為IL-1α型和IL-1β型。有研究人員發(fā)現(xiàn)IL-1β增加脂質(zhì)的在肝細(xì)胞的沉積，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，肝胰島素抵抗和纖維化，進(jìn)一步表明IL-1β在肝臟炎癥中起重要作用［15］。研究發(fā)現(xiàn)IL-1β在NAFLD外周血清中含量較正常對(duì)照組明顯升高［16］。IL-8 是在 IL-1、IL-3、TNF-α、粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、內(nèi)毒素的刺激下由單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，有研究證實(shí)而IL-1是最重要的刺激物［17］，NAFAD患者外周血 IL-8明顯升高，考慮 IL-8和NAFAD 的發(fā)病有關(guān)［18］。

Chemerin具有趨化作用，可通過(guò)與巨噬細(xì)胞表面表達(dá)的ChemerinR結(jié)合，趨化巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀淋巴細(xì)胞向炎癥部位聚集，而巨噬細(xì)胞定居在肝內(nèi)即為Kupffer細(xì)胞，Kupffer細(xì)胞是NAFLD氧自由基的重要來(lái)源細(xì)胞，可釋放過(guò)氧化氫、一氧化氮(NO)，募集中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎性反應(yīng)細(xì)胞，使之在肝內(nèi)聚集，誘發(fā)或加劇肝內(nèi)的炎性反應(yīng)［19］。同時(shí)，激活的Kuffer細(xì)胞釋放炎性反應(yīng)因子TNF-α、IL-1、IL-6，抑制胰島素受體底物-1絲氨酸磷酸化，進(jìn)而抑制胰島素受體酪氨酸磷酸化，一方面使激素敏感性脂肪酶活性增強(qiáng)，促進(jìn)周圍脂肪組織分解，產(chǎn)生大量的游離脂肪酸，通過(guò)門靜脈入肝使脂質(zhì)在肝內(nèi)聚積，促進(jìn)肝細(xì)胞脂肪變;另一方面降低脂蛋白脂肪酶活性，減少乳糜微粒中甘油三醋的分解，導(dǎo)致高脂血癥［20］。國(guó)外研究者［21］發(fā)現(xiàn) NAFLD 患者血漿Chemerin水平明顯較正常人高且NASH患者血漿中chemerin水平較NAFL患者高，表明Chemerin與炎性反應(yīng)、NAFLD密切相關(guān)。此外，還有學(xué)者［22］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)病態(tài)性肥胖伴脂肪肝患者血液Chemerin水平與脂肪肝纖維化程度呈正相關(guān)，經(jīng)過(guò)校正體重指數(shù)后，重度肝纖維化伴炎性反應(yīng)者Chemerin水平較輕度肝纖維化伴炎性反應(yīng)者明顯升高，表明Chemerin還與NAFLD的纖維化密切相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD患者血清Chemerin水平顯著升高，提示血清Chemerin可能是NAFLD發(fā)病的炎癥因子之一。NAFLD患者血清Chemerin水平與IL-1β、IL-8密切相關(guān)，提示其升高可能與機(jī)體存在的炎癥反應(yīng)有一定關(guān)系，可以推測(cè)Chemerin在NAFLD炎癥發(fā)病機(jī)制中的起重要作用。

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The correlation between serum levels of IL-1β，IL-8 and chemerin in patients with non-alcoholic fatty liver disease

LAI Mina，ZHANG Shi-huaa，JIN Qiong-yua，HUANG Juna，XU Jinga，ZENG Hongyanb，QIN Ya-lub，WU Duo-jiangc，GE Bind，XU Ged，WU Pana(a．Department of Gastroenterology，b．Department of Cardiology，c．Department of Nephropathy，d．Department of Clinical Laboratory，Pidu District People's Hospital，Chengdu 611730，China)

WU Pan

Objective To investigate the association of serum chemerin with interleukin-1β (IL-1β)and interleukin-8(IL-8)in patients with non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD)．MethodsSixty NAFLD patients and 29 healthy controls from January 2014 to June 2015 in our hospital were involved in the study．Serum IL-1β，IL-8 and chemerin were measured and their relationship was analyzed．ResultsSerum levels of IL-1β，IL-8 and chemerin in the NAFLD patients were significantly higher than those in the healthy controls(P ＜ 0.05)．Linear correlation analysis showed that chemerin was positively correlated with IL-1β and IL-8(P ＜ 0.01)．Conclusion The serum fatty factor chemerin is significantly increased in patients with NAFLD，and closely related to IL-1β and IL-8．Thus，chemerin，IL-1β and IL-8 may be involved in occurrence and development of NAFLD．

Chemerin;Nonalcoholic fatty liver disease;Interleukin-1β ;Interleukin-8

R575

A

1672-6170(2017)04-0064-03

2016-10-21;

2017-01-24)

成都市衛(wèi)計(jì)局科研基金資助項(xiàng)目(編號(hào):2013072)

吳 攀