靈芝酸棗仁膠囊改善睡眠的功能研究

馮偉偉, 吳美媛, 鄧春萌, 王啞倩, 茆廣華, 徐財(cái)泉, 吳向陽

1.江蘇大學(xué)環(huán)境與安全工程學(xué)院, 江蘇 鎮(zhèn)江 212013; 2.麗水學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康學(xué)院, 浙江 麗水 323000; 3.浙江方格藥業(yè)有限公司, 浙江 麗水 323800

?

靈芝酸棗仁膠囊改善睡眠的功能研究

馮偉偉1, 吳美媛2, 鄧春萌1, 王啞倩1, 茆廣華1, 徐財(cái)泉3, 吳向陽1

1.江蘇大學(xué)環(huán)境與安全工程學(xué)院, 江蘇 鎮(zhèn)江 212013; 2.麗水學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康學(xué)院, 浙江 麗水 323000; 3.浙江方格藥業(yè)有限公司, 浙江 麗水 323800

為研究靈芝酸棗仁膠囊的改善睡眠功能，將ICR小鼠隨機(jī)分為靈芝酸棗仁高、中、低劑量組和空白對照組，每組12只。人體推薦每公斤服用劑量為45 mg/kg·d，以此劑量的5倍、10倍和30倍，即每日以225 mg/kg BW、450 mg/kg BW和1 350 mg/kg BW經(jīng)口灌胃30 d后，通過直接睡眠、延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間、巴比妥鈉閾下劑量催眠和巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)評價(jià)靈芝酸棗仁膠囊的改善睡眠作用。研究發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，3個(gè)劑量組的直接睡眠實(shí)驗(yàn)結(jié)果皆為陰性(P>0.05)；與空白對照組相比，中劑量組小鼠延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間顯著延長(P<0.05)，而高劑量組小鼠戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間極顯著延長(P<0.01)；與空白對照組相比，高劑量組小鼠的入睡只數(shù)具有顯著差異(P<0.05)，而睡眠潛伏期的小鼠只數(shù)具有極顯著差異(P<0.01)。研究表明，靈芝酸棗仁膠囊具有改善睡眠作用。

靈芝酸棗仁膠囊；小鼠；改善睡眠

靈芝(Ganodermalucidum)，俗稱靈芝草，自古以來就被廣泛應(yīng)用于民間醫(yī)藥，具有潛在的藥用價(jià)值。近年來，在靈芝中鑒定出400多種化合物，包括多糖、三萜、核苷類、類固醇、脂肪酸、蛋白質(zhì)和多肽等[1]。其中,靈芝多糖和三萜為其主要活性成分[2,3]，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎和抗腫瘤等作用，同時(shí)對神經(jīng)衰弱、失眠、厭食、頭暈和慢性肝炎等疾病的治療具有一定的作用[3～6]。

酸棗仁是鼠李科植物酸棗[ZiziphusjujubeMill.var.spinosa(Bunge) Hu ex H.F. Chou]的干燥成熟的種子，具有補(bǔ)肝、寧心、斂活、生津的功效，主要用于虛煩失眠、驚悸多夢，是中醫(yī)治療失眠的常用藥?，F(xiàn)代研究表明，酸棗仁含有皂苷、生物堿、三萜和黃酮等多種生物活性成分，其中，酸棗仁皂苷A和皂苷B為其治療失眠的主要成分[7]。

睡眠是生存的基本要素，睡眠不足可導(dǎo)致各種功能障礙。有研究表明，全世界有27%的人正遭受失眠的困擾，且這一數(shù)值正在不斷攀升[8]。目前，睡眠問題已成為醫(yī)學(xué)界普遍關(guān)心的問題之一。盡管治療失眠的化學(xué)藥物在過去的幾年里迅速發(fā)展，但由于其毒副作用和可能產(chǎn)生的依賴作用，使得其治療效果不佳。因此，開發(fā)一種純天然、無毒副作用的鎮(zhèn)靜催眠類功能食品顯得尤為重要。本文以靈芝和酸棗仁為主要原料，經(jīng)提取，制成靈芝酸棗仁膠囊，灌胃給予30 d，考察其對小鼠睡眠的影響，為靈芝酸棗仁膠囊的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

清潔級雌性ICR小鼠，體重20±2 g，購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司，合格證號：SCXK(滬)2007-0005號；SPF級實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境設(shè)施，合格證號：SYXK(蘇)2007-0020。于實(shí)驗(yàn)前檢疫3 d，飼養(yǎng)條件為溫度21±1℃，相對濕度60%±5%,實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由進(jìn)食和飲水。靈芝酸棗仁膠囊(GLSZSC)，由浙江方格藥業(yè)有限公司提供，受試物為該膠囊的內(nèi)容物，置于陰涼、干燥、通風(fēng)處保存，保存期24個(gè)月。戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均為分析純，購于上?；瘜W(xué)試劑公司。

1.2 分組及給藥

成人(60 kg)推薦攝入量為2 700 mg/人·d，相當(dāng)于45 mg/kg·d。實(shí)驗(yàn)設(shè)人體推薦攝入量的5倍、 10倍和30倍(即225 mg/kg·d、450 mg/kg·d、1 350 mg/kg·d) 3個(gè)組(低、中、高)和空白對照組。各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)所用動物隨機(jī)分成4組，每組12只，靈芝酸棗仁膠囊高、中、低劑量組分別灌胃給藥，灌胃量20 mL/kg，連續(xù)給藥30 d，空白對照組灌胃相同體積的蒸餾水。

1.3 一般觀察

每天觀察動物的毛色、行為及精神狀況有無異常；各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中各組動物于試驗(yàn)前后稱重，以觀察動物的體重變化情況。

1.4 直接睡眠實(shí)驗(yàn)[9]

末次給藥30 min后，觀察小鼠的睡眠情況。睡眠以翻正反射消失為指標(biāo)，即當(dāng)小鼠置于背臥位時(shí)，能夠立即翻正身位，如果超過60 s小鼠不能翻正，說明翻正反射消失。小鼠進(jìn)入睡眠，從翻正反射消失到其恢復(fù)的時(shí)間為小鼠的睡眠時(shí)間。分別觀察并計(jì)算各給藥組與空白對照組小鼠的入睡數(shù)、睡眠發(fā)生率及睡眠時(shí)間。如給藥組小鼠的入睡只數(shù)及睡眠時(shí)間增加且與對照組相比具有顯著差異，即判定該項(xiàng)結(jié)果為陽性。

1.5 延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)[10]

末次給藥15 min后，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50 mg/kg，注射量為0.2 mL/20 g。以小鼠翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試樣品能否延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間。如給藥組小鼠的睡眠時(shí)間增加且與對照組相比具有顯著差異，即判定該項(xiàng)結(jié)果為陽性。

1.6 巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)[10]

末次給藥15 min后，各組小鼠腹腔注射巴比妥鈉130 mg/kg，注射量為0.2 mL/20 g。以小鼠翻正反射消失60 s以上為入睡標(biāo)準(zhǔn)，觀察記錄30 min內(nèi)各組小鼠入睡的只數(shù)，并計(jì)算入睡率。如給藥組小鼠的入睡率增高且與對照組相比具有顯著差異，即判定該項(xiàng)結(jié)果為陽性。

1.7 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)[11]

末次給藥15 min后，各組小鼠腹腔注射巴比妥鈉205 mg/kg，注射量為0.2 mL/20 g。以小鼠翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試樣品能否縮短巴比妥鈉睡眠潛伏期。如給藥組小鼠的睡眠潛伏期縮短且與對照組相比具有顯著差異，即判定該項(xiàng)結(jié)果為陽性。

1.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2 結(jié)果與分析

2.1 靈芝酸棗仁膠囊對小鼠體重的影響

由表1可知，各實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目組小鼠的初始體重組間和終末體重組間均無顯著性差異(P>0.05)，說明靈芝酸棗仁膠囊對小鼠體重增長無明顯影響。

2.2 靈芝酸棗仁膠囊對小鼠的直接睡眠的影響

實(shí)驗(yàn)組小鼠在給藥后，部分小鼠出現(xiàn)安靜、活動減少及嗜睡的狀態(tài)，但均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象(即沒有翻正反射消失小鼠)，而空白對照組小鼠動物全部為清醒狀態(tài)。說明靈芝酸棗仁膠囊對小鼠無直接睡眠作用，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性。根據(jù)保健食品檢驗(yàn)和評價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊的規(guī)定，可以進(jìn)行后續(xù)其他作用的評價(jià)。

2.3 靈芝酸棗仁膠囊對延長小鼠戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間作用的影響

由表3可知，在戊巴比妥鈉(50 mg/kg)催眠作用下，隨靈芝酸棗仁膠囊作用劑量的增高，小鼠的睡眠時(shí)間逐漸延長，呈一定的劑量依賴關(guān)系；與空白對照組相比，靈芝酸棗仁膠囊中劑量組小鼠的睡眠時(shí)間顯著延長(P<0.05), 而高劑量組小鼠的睡眠時(shí)間極顯著延長(P<0.01)。說明靈芝酸棗仁膠囊可延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。

表1 靈芝酸棗仁膠囊對小鼠體重的影響±s)

表2 靈芝酸棗仁膠囊對小鼠的直接睡眠的作用(n=12)

表3 靈芝酸棗仁膠囊對延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響(n=12)

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；同列數(shù)據(jù)的不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

2.4 靈芝酸棗仁膠囊對巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響

由表4可知，在巴比妥鈉(130 mg/kg)作用下，各劑量組小鼠入睡只數(shù)隨靈芝酸棗仁膠囊的劑量增加而增多；與空白對照組相比，靈芝酸棗仁膠囊高劑量組小鼠入睡只數(shù)顯著增加(P<0.05)，說明靈芝酸棗仁膠囊與閾下劑量巴比妥鈉有協(xié)同催眠作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。

表4 靈芝酸棗仁膠囊對巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響(n=12)

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.5 靈芝酸棗仁膠囊對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

由表5可知，在巴比妥鈉(205 mg/kg)作用下，各劑量組小鼠的睡眠潛伏期隨靈芝酸棗仁膠囊劑量增加而降低，呈劑量依賴關(guān)系；與空白對照組相比，高劑量組小鼠的睡眠潛伏期極顯著地縮短(P<0.01)，說明靈芝酸棗仁膠囊具有縮短巴比妥鈉睡眠潛伏期的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。

表5 靈芝酸棗仁膠囊對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響(n=12)

注：同列數(shù)據(jù)后不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

3 討論

靈芝酸棗仁膠囊主要以靈芝和酸棗仁為原料制成?，F(xiàn)代藥理研究表明，靈芝或酸棗仁單獨(dú)一味藥物提取物均具有鎮(zhèn)靜催眠或改善睡眠的作用。賈薇等[12]采用直接睡眠試驗(yàn)、延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間試驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下催眠劑量試驗(yàn)和戊巴比妥鈉睡眠潛伏期等試驗(yàn)，研究靈芝多糖對小鼠睡眠的影響，研究發(fā)現(xiàn)靈芝多糖可顯著提高戊巴比妥鈉閾下催眠劑量誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生率，并縮短戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期。王旭峰等[13]通過測定給藥后小鼠的入睡率、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間，研究酸棗仁皂苷對小鼠睡眠的影響，研究發(fā)現(xiàn)酸棗仁皂苷可顯著提高小鼠的睡眠率、縮短小鼠的睡眠潛伏期和延長小鼠的睡眠時(shí)間?？梢姡`芝或酸棗仁單一提取物均具有一定的改善睡眠的功能，但是未見將二者的提取物進(jìn)行再次配比后開展對睡眠方面作用的研究。因此，本文采用直接睡眠、延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間、巴比妥鈉閾下劑量催眠和巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)研究靈芝酸棗仁膠囊的改善睡眠的作用。研究結(jié)果表明，靈芝酸棗仁膠囊對小鼠無直接睡眠作用，而巴比妥鈉睡眠潛伏期、延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間和對巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，根據(jù)保健食品功能學(xué)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，判定靈芝酸棗仁膠囊具有一定的改善睡眠的功能。

[1] Zhao X R, Zhang B J , Deng S,etal.. Isolation and identification of oxygenated lanostane-type triterpenoids from the fungusGanodermalucidum[J]. Phytochem. Lett., 2016(16):87-91.

[2] Grienke U, Mihály-Bison J, Schuster D,etal.. Pharmaco-phore-based discovery of FXR-agonists. Part II: identification of bioactive triterpenes fromGanodermalucidum[J]. Bioorg. Med. Chem., 2011,19(22): 6779-6791.

[3] Pan D, Wang L Q, Chen C H,etal.. Structure characteri-zation of a novel neutral polysaccharide isolated fromGanodermalucidumfruiting bodies[J]. Food Chem., 2012,135(3):1097-1103.

[4] Peng X R, Liu J Q, Han Z H,etal.. Protective effects of triterpenoids fromGanodermaresinaceumon H2O2-induced toxicity in HepG2 cells[J]. Food Chem., 2013,141 (2):920-926.

[5] Zhou Z Y, Tang Y P, Xiang J,etal.. Neuroprotective effects of water-solubleGanodermalucidumpolysaccharides on cerebral ischemic injury in rats[J]. J. Ethnopharmacol., 2010,131 (1):154-164.

[6] Ferreira I C F R, Heleno S A, Reis F S,etal.. Chemical features ofGanodermapolysaccharides with antioxidant, antitumor and antimicrobial activities[J]. Phytochemistry, 2015,114:38-55.

[7] Chen C Y C. Chemoinformatics and pharmacoinformatics approach for exploring the GABA-A agonist from Chinese herb suanzaoren[J]. J. Taiwan Inst. Chem. E., 2009,40(1):36-47.

[8] Murphy M, Riedner B A, Huber R,etal.. Source modeling sleep slow waves[J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2009,106(5):1608-1613.

[9] 王秋新，劉家媛，陳強(qiáng)威，等. 金線蓮多糖提取物鎮(zhèn)靜催眠作用的研究[J]. 廣東藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，33(1):68-71.

[10] 徐叔云, 卞如濂, 陳 修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版, 2002.

[11] 陳 奇. 中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]. 上海:上?？萍汲霭嫔?，2001.

[12] 賈 薇，吳 岷，張勁松，等. 靈芝成分改善睡眠功能試驗(yàn)初探[J].食用菌學(xué)報(bào)，2005，12(3):43-47.

[13] 王旭峰，何計(jì)國，陳 陽，等. 酸棗仁皂苷的提取及改善睡眠功效的研究[J].食品科學(xué)，2006，27(4):226-229.

Study on the Function ofGanodermalucidumSemen Ziziphi Spinosae Capsules on Sleep Improvement

FENG Weiwei1, WU Meiyuan2, DENG Chunmeng1, WANG Yaqian1, MAO Guanghua1, XU Caiquan3, WU Xiangyang1

1.SchoolofEnvironmentandSafetyEngineering,JiangsuUniversity,JiangsuZhenjiang212013,China; 2.CollegeofMedicineandHealth,LishuiUniversity,ZhejiangLishui323000,China; 3.ZhejiangFanggePharmaceuticalLimitedCompany,ZhejiangLishui323800,China

The function ofGanodermalucidumSemen Ziziphi Spinosae Capsules (GLSZSC) on sleep improvement was studied. ICR mice were randomly divided into normal control and GLSZSC (225 mg/kg, 450 mg/kg and 1 350 mg/kg) groups and each group with 12 mice. After giving GLSZSC via gavage for 30 days, the effect on sleep improvement was studied by the experiments of sleep-induced directly, prolonging sleep time induced by pentobarbital sodium and affecting mice barbital sodium, respectively. Compared with normal control group, the GLSZSC did not have directly sleep-induced function, whereas the GLSZSC (450 mg/kg and 1 350 mg/kg) could significantly prolong the sleep time induced by pentobarbital sodium (P<0.01 andP<0.05). The GLSZSC (1 350 mg/ kg) decreased the number of mice in sleep latency induced by barbital sodium (P<0.01) and increased the number of mice in sleep under the threshold hypnogenesis dosage of barbital sodium (P<0.05) obviously. The research showed that GLSZSC had certain effect on improving sleep of mice.

GanodermalucidumSemen Ziziphi Spinosae Capsules; mice; sleep improvement

2017-03-07; 接受日期：2017-05-23

江蘇大學(xué)高級人才啟動基金(15JDG031;15JDG146)資助。

馮偉偉，講師，博士，研究方向?yàn)榄h(huán)境化學(xué)與毒理學(xué)研究。E-mail:fwwujs@126.com。*通信作者：茆廣華，副教授，博士，研究方向?yàn)榄h(huán)境化學(xué)與毒理學(xué)、天然產(chǎn)物研究與開發(fā)。E-mail：maoyun82@sina.com

10.19586/j.2095-2341.2017.0012