阿留申病對水貂犬瘟熱免疫程序的影響

張英海楊建輝朱秋艷李淑娜張 麗

朱江山1張英曼1韓麗娜1高尚志1張洪學(xué)2劉長浩2宋曉飛2

(1.樂亭縣畜牧獸醫(yī)局,河北樂亭 063600;2.齊魯動物保健品有限公司,山東濟南 250100)

阿留申病對水貂犬瘟熱免疫程序的影響

張英海1楊建輝1朱秋艷1李淑娜1張 麗1

朱江山1張英曼1韓麗娜1高尚志1張洪學(xué)2劉長浩2宋曉飛2

(1.樂亭縣畜牧獸醫(yī)局,河北樂亭 063600;2.齊魯動物保健品有限公司,山東濟南 250100)

為了掌握水貂阿留申病毒對犬瘟熱疫苗免疫的影響，進而制定合理的免疫程序保障水貂免受犬瘟熱的感染。首先通過中和試驗法分別檢測不同日齡阿留申病陽性和陰性仔貂的母源抗體消長規(guī)律；其次是分別檢測二次免疫后不同天數(shù)的阿留申病陽性和陰性貂犬瘟熱中和抗體；然后分別檢測免疫一次和二次疫苗的阿留申病陽性貂的犬瘟熱中和抗體，最終根據(jù)結(jié)果制定科學(xué)的水貂犬瘟熱免疫程序。結(jié)果顯示，阿留申病陽性仔貂的母源抗體消逝速度快于陰性貂；免疫一次疫苗的阿留申病陽性貂犬瘟熱中和抗體在60d、90d、120d、150d均明顯低于陰性貂，且有效抗體值維持期不足4個月；免疫二次疫苗后的阿留申病陽性貂的犬瘟熱抗體在60d、90d、120d、150d低于陰性貂，但有效抗體持續(xù)期在5個月以上。

水貂 阿留申病 犬瘟熱 免疫程序

水貂阿留申?。ˋDM）又稱漿細胞增多癥（plasmacytasis），是一種由主要侵害水貂免疫細胞的阿留申病毒（ADMV）引起的，導(dǎo)致自身免疫系統(tǒng)紊亂并逐漸衰竭，同時引發(fā)強烈的自身免疫反應(yīng)的慢性病毒性傳染病。阿留申病陽性貂的皮毛皮質(zhì)、免疫應(yīng)答能力均較差，尤其是對于犬瘟熱等烈性傳染病而言，嚴重影響了其免疫效果，造成疫病防控壓力過大，養(yǎng)殖收益損失嚴重。通過本研究探索出對于阿留申病陽性貂的合理免疫程序，降低疫病防控壓力，進而保障我國水貂養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料

1.1 疫苗

一批次犬瘟熱凍干活疫苗（齊魯動保提供，CDV-11株，-15℃保存），批號分別為1611024-11604013-1，抗原含量均≥105.2TCID50/頭份。犬瘟熱專用稀釋液（齊魯動保提供，2℃～8℃保存）

1.2 試驗水貂

外觀健康美國短毛黑水貂（日齡均在30～60d），樂亭縣秋華養(yǎng)殖有限公司提供。

1.3 血樣采集及抗體檢測設(shè)備

由齊魯動物保健品有限公司技術(shù)服務(wù)部技術(shù)人員及樂亭縣畜牧局工作人員負責(zé)血樣采集，研發(fā)中心負責(zé)抗體檢測及阿留申病檢測。

2 試驗方法

2.1 對流免疫電泳篩選阿留申病及疫苗注射

通過對流免疫電泳技術(shù)對出生后50日齡左右的仔貂進行阿留申病檢測，檢測出的陽性貂和陰性貂在同一場區(qū)內(nèi)隔離并分組飼養(yǎng)，飼喂相同飼料和飲水。每群挑選50日齡左右的仔貂并編號，陰性貂群分A、B組，陽性貂群分C、D組。

犬瘟熱凍干活疫苗由冰箱取出后，室溫放置5～10min，使用犬瘟熱專用稀釋液稀釋后，采用后肢內(nèi)側(cè)肌肉注射方式，每只水貂1/3頭份。陰性貂和陽性貂由兩批工作人員必須同步免疫，每只水貂更換一個針頭。

2.2 仔貂犬瘟熱母源抗體檢測

由兩組人員同時對陽性貂群、陰性貂群的30日齡、40日齡、50日齡、60日齡的各10份仔貂以后肢趾間靜脈采集血樣1.5ml并編號，離心后取血清測定其母源抗體消長情況。每只水貂一個靜脈輸液針，杜絕交叉使用。對采集的血樣通過中和試驗方法（固定病毒-稀釋血清法）進行犬瘟熱SN抗體測定。

2.3 一次免疫后不同時間段犬瘟熱SN抗體檢測

分兩批人員對A組、C組的100只水貂使用批號為1610020、16104018-2的犬瘟熱凍干活疫苗，使用專用稀釋液稀釋后，每只水貂肌肉注射1ml；兩組水貂由不同人員同時免疫，每只水貂更換一個針頭；分別在免疫后30d、60d、90d、120d、150d、180d進行血樣采集并編號。對采集的血樣通過中和試驗方法（固定病毒-稀釋血清法）進行犬瘟熱SN抗體測定。

2.4 二次免疫后不同時間段犬瘟熱SN抗體檢測

分兩批人員對B、D組的各100只水貂使用批號為16104018-2的犬瘟熱凍干活疫苗，使用專用稀釋液稀釋后，每只水貂肌肉注射1ml；免疫后28d，使用同樣批次的疫苗，按照相同方式每只水貂注射2ml，分別在免疫后30d、60d、90d、120d、150d進行血樣采集并編號。對采集的血樣通過中和試驗方法（固定病毒-稀釋血清法）進行犬瘟熱SN抗體測定。

3 試驗結(jié)果與分析

3.1 阿留申病檢測及疫苗注射

通過對流免疫電泳技術(shù)對全群1200仔貂進行阿留申病檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，阿留申病陽性貂732只，陰性貂468只，將陰性貂和陽性貂分別挑取200只，陰性貂群分A、B兩組，每組100只，陽性貂群C、D兩組，每組100只，隔離飼養(yǎng)。注射同批次疫苗1ml后無任何不良反應(yīng)出現(xiàn)，注射后1d有6只精神及食欲欠佳，第3d完全恢復(fù)。

3.2 仔貂犬瘟熱母源抗體消長情況

表1 仔貂犬瘟熱母源抗體消長情況

圖1 不同日齡ADV陽性貂與陰性貂母源抗體消長情況

由圖1可以看出，阿留申病陽性貂的母源抗體消逝速度，在30～60日齡消逝速度快于阿留申病陰性貂；陽性貂在50～60日齡時均為0；在40日齡左右，陽性貂和陰性貂的母源抗體水平SN值均在50以下，都處于非100%保護狀態(tài)；因此在養(yǎng)殖一線，阿留申病陽性貂的初免時間應(yīng)在45～50日齡左右免疫，阿留申病陰性貂初免可在50-60日齡。

3.3 一次免疫后不同時間段犬瘟熱SN抗體檢測

表2 一次免疫后不同時間段犬瘟熱SN抗體檢測結(jié)果

圖2 一次免疫后阿留申病陽性貂與陰性貂犬瘟熱抗體情況

由圖2可以看出，阿留申病陽性貂在免疫后60d達到高峰，維持僅30d左右，150d后SN抗體就下降至50左右，處于合格值（50）附近，180d降至50以下，處于非100%保護；阿留申病陰性貂免疫后60d達到高峰，維持120d，120d后抗體逐漸下降，免疫后180dSN抗體值仍在62.19，處于合格值以上。

3.4 二次免疫后不同時間段犬瘟熱SN抗體檢測

表3 二次免疫后不同時間段犬瘟熱SN抗體檢測

圖3 二次免疫后阿留申病陽性貂與陰性貂犬瘟熱抗體情況

由圖3可以看出，陰性貂在二次免疫后抗體平均值明顯高于陽性貂，在免疫后30d、60d、90d、120d一直處于高抗體狀態(tài)，免疫后150d抗體平均值仍在150左右；陽性貂在免疫后60d，抗體就開始逐漸下降，在免疫后150d時抗體值為54.21，逼近合格值，感染外源野毒的風(fēng)險逐漸增大。

3.5 阿留申病陽性貂一次免疫與二次免疫情況

免疫后180d陽性貂A組 111.22 131.21 121.51 88.22 48.21 12.22陽性貂B組 145.12 140.49 101.28 76.21 56.71免疫后30d免疫后60d免疫后90d免疫后120d免疫后150d

圖4 阿留申病陽性貂一次免疫與二次免疫抗體情況對比

由圖4可以看出，二次免疫后30～150d犬瘟熱抗體值明顯高于一次免疫，但是二次免疫后90d抗體下降速度加快。因此對于阿留申病陽性貂而言，犬瘟熱二次免疫效果要明顯優(yōu)于一次免疫，在季節(jié)取皮時不至于低于臨界保護值以下（50）。

4 結(jié)語

通過以上試驗結(jié)果得知，阿留申病毒對水貂的母源抗體和犬瘟熱免疫效果有較大影響，相同日齡陽性仔貂的母源抗體水平明顯低于陰性貂，陽性仔貂母源抗體的消逝速度明顯快于陰性貂，因此對于陽性貂而言，將首免日齡提前至40～45日齡，有利于縮短免疫空白期，避免陽性仔貂的潛伏期；無論是一次免疫還是二次免疫，陽性貂的抗體高度和消逝速度明顯快于陰性貂，但是阿留申病陽性貂經(jīng)過二次免疫后，抗體持續(xù)期明顯高于一次免疫，這對于目前國內(nèi)阿留申病普遍感染的現(xiàn)狀，積極推進阿留申病陽性貂的犬瘟熱二次免疫，能有效降低水貂犬瘟熱的疫病防控壓力，降低發(fā)病率，提高經(jīng)濟效益。

5 討論

阿留申病是威脅水貂養(yǎng)殖業(yè)重要的疾病，造成水貂繁殖力、品貌品質(zhì)下降，而由本試驗也可以看出，其對犬瘟熱免疫的影響也較大，這也間接加大了各水貂養(yǎng)殖區(qū)的犬瘟熱防控壓力；而近幾年在國內(nèi)各地（山東、遼寧、黑龍江等地）不分季節(jié)段大量進口國外種貂，而進入國內(nèi)后不改善養(yǎng)殖大環(huán)境，阿留申病的感染率持續(xù)上升，第2-3年大量進口原種損失殆盡甚至繁殖力喪失，進而進入“引種—感染—引種”怪圈，耗費了大量資金；因此加大對我國阿留申病的檢測凈化是降低疫病防控壓力，提升國內(nèi)養(yǎng)貂業(yè)的產(chǎn)仔成活率的重要工作，尤其對于種貂場和養(yǎng)殖密集區(qū)而言，全員參與共建阿留申病陰性貂養(yǎng)殖的大環(huán)境。