咪達(dá)唑侖對(duì)離體豬冠脈環(huán)舒張功能的影響及其機(jī)制研究

任俊杰,王科科,許慧玉,黃婷娟,呂 怡,武冬梅,張軒萍,鄭曉俊

(山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院1.內(nèi)科學(xué)教研室、2.藥學(xué)部，山西 太原 030001；3.山西醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，山西 太原 030001)

咪達(dá)唑侖對(duì)離體豬冠脈環(huán)舒張功能的影響及其機(jī)制研究

任俊杰1,3,王科科1,許慧玉3,黃婷娟1,呂 怡1,武冬梅3,張軒萍3,鄭曉俊2

(山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院1.內(nèi)科學(xué)教研室、2.藥學(xué)部，山西 太原 030001；3.山西醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，山西 太原 030001)

目的 本實(shí)驗(yàn)觀察咪達(dá)唑侖(midazolam)對(duì)離體豬冠狀動(dòng)脈環(huán)的作用，并探討其作用機(jī)制。方法 采用離體血管張力測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法，記錄咪達(dá)唑侖對(duì)KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮豬冠狀動(dòng)脈環(huán)張力的變化及不同工具藥的影響。結(jié)果 各濃度組咪達(dá)唑侖(3×10-6～1×10-4mol·L-1)對(duì)預(yù)收縮豬冠脈環(huán)產(chǎn)生濃度依賴性舒張作用，內(nèi)皮完整組舒張作用強(qiáng)于去內(nèi)皮組(P<0.05)；在KCl預(yù)收縮基礎(chǔ)上，加入NOS抑制劑L-NAME、L-NAME+L-Arg后，咪達(dá)唑侖舒血管作用明顯減弱(P<0.05)，而加入外源性的NO合成底物L(fēng)-Arg、iNOS抑制劑1400W、環(huán)氧合酶抑制劑Indo均不能抑制咪達(dá)唑侖的舒血管作用；Na+/Ca2+交換體特異性阻斷劑KB-R7943亦不能抑制咪達(dá)唑侖的舒血管作用；鉀通道阻斷劑KATP阻斷劑Gli可以抑制咪達(dá)唑侖的舒張冠脈作用(P<0.05)，BKCa阻斷劑TEA、Kir阻斷劑BaCl2、KV阻斷劑4-AP則不能改變咪達(dá)唑侖的舒張冠脈作用。結(jié)論 咪達(dá)唑侖可濃度和內(nèi)皮依賴性地舒張KCl預(yù)收縮的豬冠脈環(huán)，內(nèi)皮分泌的NO參與了其舒血管作用，外源性NO、iNOS以及PGI2的合成與其舒血管作用無(wú)關(guān)，咪達(dá)唑侖對(duì)豬冠脈的舒張可能與KATP通道有關(guān)，與Na+/Ca2+交換體、 KV通道、BKCa通道、Kir通道無(wú)關(guān)。

咪達(dá)唑侖；豬冠狀動(dòng)脈環(huán)；舒張作用；NO；內(nèi)皮；鉀通道

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 豬，♀♂不限，月齡3～4個(gè)月，體質(zhì)量100～150 kg，取自山西省太原市小井峪屠宰場(chǎng)。

1.2 藥品與試劑 咪達(dá)唑侖：江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20080828；緩激肽、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、吲哚美辛(Indo)、四乙胺(TEA)、格列苯脲(Gli)、氯化鋇(BaCl2)、4-氨基吡啶(4-AP)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；KB-R7943購(gòu)自TOCRIS公司；其余均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 儀器 PowerLab生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)(埃德儀器國(guó)際貿(mào)易上海有限公司)；張力換能器(成都泰盟科技有限公司)；精密天平(BS124S，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；pH計(jì)(PHS-3C，上海理達(dá)儀器廠)。

2 方法

2.1 離體豬冠狀動(dòng)脈環(huán)制備 刺破豬的心臟并待血流結(jié)束后，迅速取出心臟，剪取豬冠狀動(dòng)脈左前降支及其周圍心肌組織，立即置入4℃的PSS液(pH=7.38)中，迅速返回實(shí)驗(yàn)室。本研究分離豬冠狀動(dòng)脈左前降支中下段，直徑為1～2 mm，細(xì)心剔除冠脈周圍的脂肪及結(jié)締組織，將冠脈剪成5 mm左右的血管環(huán)。隨后，用2個(gè)不銹鋼微型三角掛鉤貫穿冠脈管腔，水平懸掛在恒溫的10 mL玻璃浴管內(nèi)，浴管內(nèi)提前加入37 ℃的PSS液10 mL，并通入100% O2，下方掛鉤固定在浴管底部，上方掛鉤以一不銹鋼絲連接于張力環(huán)能器。每個(gè)冠脈環(huán)在浴管內(nèi)的基礎(chǔ)張力調(diào)整至3 g，平衡1.5～2 h，其間隨時(shí)調(diào)整張力，使之恒定地維持在3 g，每20 min換1次PSS液。所有冠脈環(huán)用KCl(30 mmol·L-1)PSS液刺激3次并洗脫，收縮穩(wěn)定后，記錄在加入不同血管活性物質(zhì)后，冠脈環(huán)的張力變化。

2.2 去內(nèi)皮冠脈環(huán)制備 取剔除周圍脂肪及結(jié)蹄組織的豬冠狀動(dòng)脈5 mm，兩端用針頭固定，取纏少許棉花(與冠脈內(nèi)徑相適)的針頭從管腔擦過(guò)，連續(xù)2次。冠脈環(huán)懸掛穩(wěn)定2 h后，用KCl(30 mmol·L-1)PSS液刺激，收縮達(dá)坪值后，加入緩激肽(1×10-5mol·L-1)，以KCl預(yù)收縮幅度為1，舒張幅度0.05時(shí)，認(rèn)為冠脈內(nèi)皮完全去除，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.3 咪達(dá)唑侖對(duì)KCl預(yù)收縮內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮豬冠脈環(huán)的影響 冠脈環(huán)穩(wěn)定后，向KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮內(nèi)皮完整豬冠脈環(huán)、KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮去內(nèi)皮豬冠脈環(huán)，累積加入3×10-6、1×10-5、3×10-5、1×10-4mol·L-1的咪達(dá)唑侖，對(duì)照組累積加入相應(yīng)體積的溶劑。描記豬冠脈環(huán)張力的變化曲線。以KCl誘發(fā)的冠脈環(huán)的最大收縮幅度為1，計(jì)算給予不同濃度咪達(dá)唑侖后，冠脈舒張幅度占最大收縮幅度的百分比。建立濃度效應(yīng)曲線，觀察咪達(dá)唑侖對(duì)豬冠狀動(dòng)脈環(huán)的作用。

2.4 內(nèi)皮在咪達(dá)唑侖舒張KCl預(yù)收縮豬冠狀動(dòng)脈中的作用機(jī)制 冠脈環(huán)穩(wěn)定后，給予30 mmol·L-1KCl收縮達(dá)坪值后，加入非特異性一氧化氮合酶(NOS)抑制劑L-NAME(1×10-4mol·L-1)、外源性的NO合成底物L(fēng)-Arg(1×10-5mol·L-1)、L-NAME+L-Arg、iNOS 抑制劑1400W(1×10-5mol·L-1)、環(huán)氧合酶抑制劑Indo(1×10-5mol·L-1)，對(duì)照組加入溶劑后，血管張力進(jìn)一步發(fā)生改變，再次達(dá)到坪值后，累積加入3×10-6、1×10-5、3×10-5、1×10-4mol·L-1的咪達(dá)唑侖，記錄相應(yīng)血管張力并計(jì)算變化值。

2.5 Na+/Ca2+交換體在咪達(dá)唑侖舒張KCl預(yù)收縮豬冠狀動(dòng)脈中的作用 冠脈環(huán)穩(wěn)定后，給予30 mmol·L-1KCl收縮達(dá)坪值后，加入Na+/Ca2+交換體阻斷劑KB-R7943(1×10-6mol·L-1)，對(duì)照組加入溶劑，血管張力進(jìn)一步發(fā)生改變，再次達(dá)到坪值后，累積加入3×10-6、1×10-5、3×10-5、1×10-4mol·L-1的咪達(dá)唑侖，記錄相應(yīng)血管張力并計(jì)算變化值。

2.6 K+通道在咪達(dá)唑侖舒張KCl預(yù)收縮豬冠狀動(dòng)脈中的作用 冠脈環(huán)穩(wěn)定后，給予30 mmol·L-1KCl收縮達(dá)坪值后，加入延遲整流鉀通道(KV)阻斷劑4-AP(1×10-3mol·L-1)、內(nèi)向整流鉀通道(Kir)阻斷劑BaCl2(1×10-3mol·L-1)、鈣激活鉀通道(BKCa)阻斷劑TEA(1×10-2mol·L-1)和ATP敏感鉀通道(KATP)阻斷劑Gli(1×10-5mol·L-1)，對(duì)照組加入溶劑，血管張力進(jìn)一步發(fā)生改變，再次達(dá)到坪值后，累積加入3×10-6、1×10-5、3×10-5、1×10-4mol·L-1的咪達(dá)唑侖，記錄相應(yīng)血管張力并計(jì)算變化值。

3 結(jié)果

3.1 咪達(dá)唑侖對(duì)KCl預(yù)收縮內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮豬冠脈環(huán)的影響 在內(nèi)皮完整的冠脈環(huán)中，用KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮后，各濃度(3×10-6、1×10-5、3×10-5、1×10-4mol·L-1)的咪達(dá)唑侖能產(chǎn)生明顯的舒張作用，其Emax為(0.92±0.04)，各濃度咪達(dá)唑侖的舒張作用與溶劑對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在去內(nèi)皮的冠脈環(huán)中，用KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮后，3×10-6、1×10-5、3×10-5、1×10-4mol·L-1的咪達(dá)唑侖能產(chǎn)生明顯的濃度依賴性的舒張作用，其Emax為(0.74±0.04)。與內(nèi)皮完整組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見Fig 1。

3.2 內(nèi)皮在咪達(dá)唑侖舒張KCl預(yù)收縮豬冠狀動(dòng)脈中的作用機(jī)制 在KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮的豬冠脈環(huán)上，預(yù)孵L-NAME后，咪達(dá)唑侖舒血管作用明顯減弱，其Emax為(0.78±0.03)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；預(yù)孵L-NAME+L-Arg后，咪達(dá)唑侖舒血管作用明顯減弱，其Emax為(0.83±0.02)，與無(wú)阻斷藥組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與單加L-NAME組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；分別預(yù)孵L-Arg、1400W、Indo后，對(duì)咪達(dá)唑侖舒血管作用無(wú)明顯影響，其Emax分別為(0.94±0.03)、(0.94±0.03)、(0.91±0.03)，見Fig 2。

Fig 1 Midazolam-induced relaxation in endothelium-intact(Endothelium+) or-denuded(Endothelium-) porcine isolated coronary artery rings with precontraction induced by KCl

**P<0.01vsvehicle group or midazolam(Endothelium+) group

Fig 2 Effects of L-NAME,L-Arg,1400W,Indo on relaxation induced by midazolam in porcine isolated coronary artery rings with precontraction induced by KCl

*P<0.05,**P<0.01vsmidazolam alone group

3.3 Na+/Ca2+交換體阻斷劑在咪達(dá)唑侖舒張KCl預(yù)收縮豬冠狀動(dòng)脈中的作用 在KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮的豬冠脈環(huán)上，Na+/Ca2+交換體阻斷劑KB-R7943預(yù)孵后，其Emax為(0.95±0.04)，對(duì)咪達(dá)唑侖的舒血管作用無(wú)影響(P>0.05)，見Fig 3。

3.4 K+通道阻斷劑在咪達(dá)唑侖舒張KCl預(yù)收縮豬冠狀動(dòng)脈中的作用 在KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮的豬冠脈環(huán)上，分別預(yù)孵K+通道阻斷劑4-AP、BaCl2、TEA后，對(duì)咪達(dá)唑侖的舒血管作用無(wú)影響(P>0.05)，其Emax分別為(1.02±0.06)、(1.05±0.03)、(1.10±0.06)；預(yù)孵Gli后，咪達(dá)唑侖舒血管作用明顯減弱，其Emax為(0.59±0.04)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見Fig 4。

Fig 3 Effects of KB-R7943 on relaxation induced by midazolam in porcine isolated coronary artery rings with precontraction induced by KCl(30 mmol·L-1)(±s,n=5)

Fig 4 Effects of 4-AP,BaCl2,TEA,Gli on relaxation induced by midazolam in porcine isolated coronary artery rings with precontraction induced by KCl(30 mmol·L-1)(±s,n=5)

**P<0.01vsmidazolam alone group

4 討論

豬冠狀動(dòng)脈的口徑、分布、走向、結(jié)構(gòu)與人的冠狀動(dòng)脈有很大的相似性[4]，因此，本實(shí)驗(yàn)研究了咪達(dá)唑侖對(duì)豬冠狀動(dòng)脈的舒張作用及其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，咪達(dá)唑侖對(duì)內(nèi)皮完整的豬冠狀動(dòng)脈環(huán)有濃度依賴性的舒張作用，去除內(nèi)皮后，其舒張作用明顯減弱。由此可見，咪達(dá)唑侖對(duì)冠狀動(dòng)脈的舒張作用主要兩方面的機(jī)制，部分依賴于血管內(nèi)皮的舒張機(jī)制，部分作用于血管平滑肌的舒張機(jī)制。

依賴于內(nèi)皮的舒血管機(jī)制主要源于內(nèi)皮釋放的一系列調(diào)節(jié)血管平滑肌張力的血管活性物質(zhì)，主要有一氧化氮(NO)、前列腺環(huán)素(PGI2)等[5-6]。其中，NO是維持血管基礎(chǔ)張力的最重要的舒血管因子，它的合成和釋放受到抑制后，內(nèi)皮相關(guān)的舒血管作用則會(huì)減弱[7]。文獻(xiàn)表明[8]，NO可通過(guò)NO-鳥苷酸環(huán)化酶(sGC)-環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)途徑、作用于K+通道等機(jī)制而舒張血管。我們用非特異性NOS抑制劑L-NAME預(yù)孵KCl預(yù)收縮的豬冠脈后，咪達(dá)唑侖的舒張血管作用部分被阻斷，提示咪達(dá)唑侖的舒張血管作用可能與NO有關(guān)。L-Arg在NO的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用，它是體內(nèi)NO合成的唯一底物。豬冠脈環(huán)預(yù)孵外源性NO合成底物L(fēng)-Arg后，咪達(dá)唑侖舒血管作用并沒(méi)有變化。同時(shí)應(yīng)用L-NAME后，即使預(yù)孵L-Arg，咪達(dá)唑侖的舒血管作用仍然部分抑制，說(shuō)明NO參與咪達(dá)唑侖舒張血管作用與外源性NO合成底物無(wú)關(guān)，L-NAME阻斷咪達(dá)唑侖的舒血管作用也不受外源性NO合成底物的影響。

NOS是NO合成最關(guān)鍵的限速酶，目前常見的有3種同工酶，分別為神經(jīng)元型(nNOS，Ⅰ型)、巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)型(iNOS，Ⅱ型)和內(nèi)皮細(xì)胞型(eNOS，Ⅲ型)[9]，在一些病理狀態(tài)下，iNOS大量持續(xù)表達(dá)，NO持續(xù)大量產(chǎn)生。同時(shí)，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，NO是一種復(fù)雜的生物活性介質(zhì)，可以參與多種體內(nèi)代謝的病理和生理過(guò)程，大量NO可能造成組織和細(xì)胞的損害，甚至死亡。所以，iNOS的誘導(dǎo)合成就成為眾多疾病發(fā)病的關(guān)鍵。此外，在NO合成底物缺乏的情況下，iNOS可促使O2-大量形成，與NO形成氮氯化合物，通過(guò)細(xì)胞毒作用損傷機(jī)體[10]。1400W是迄今為止選擇性最強(qiáng)的iNOS抑制劑，抑制iNOS的作用比抑制eNOS強(qiáng)200～5 000倍，是評(píng)價(jià)iNOS抑制劑必需的最新工具。實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用1400W后，發(fā)現(xiàn)對(duì)咪達(dá)唑侖的血管舒張作用無(wú)影響，說(shuō)明咪達(dá)唑侖不是通過(guò)誘導(dǎo)合成iNOS來(lái)發(fā)揮舒血管作用。

與內(nèi)皮相關(guān)的主要舒血管因子還有PGI2，由環(huán)氧合酶(COX)催化花生四烯酸生成，COX是其合成的主要限速酶，其抑制劑Indo對(duì)咪達(dá)唑侖的舒張冠脈作用無(wú)影響，提示PGI2途徑?jīng)]有參與咪達(dá)唑侖的舒血管作用。

Ca2+在血管平滑肌的收縮與舒張中起著關(guān)鍵作用，細(xì)胞外鈣內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)鈣釋放促使血管平滑肌收縮。電壓依賴鈣通道(VDC)、受體操縱鈣通道(ROC)、鈣釋放激活的鈣通道(CRAC)以及其他離子載體(Na+/Ca2+交換體、漏通道等)的激活是鈣內(nèi)流的主要途徑。高濃度KCl使冠脈血管平滑肌細(xì)胞膜去極化，VDC開放，從而促使細(xì)胞外的Ca2+內(nèi)流，引起血管平滑肌收縮[11]。前期研究表明，咪達(dá)唑侖可以阻斷VOC，其舒血管作用還涉及ROC和細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存鈣釋放的抑制。在本實(shí)驗(yàn)中，咪達(dá)唑侖可濃度依賴性地抑制KCl預(yù)收縮的豬冠狀動(dòng)脈環(huán)，提示咪達(dá)唑侖引起的血管環(huán)舒張可能是通過(guò)抑制VDC介導(dǎo)的細(xì)胞外鈣內(nèi)流而舒張血管。本實(shí)驗(yàn)中，冠脈環(huán)預(yù)孵Na+/Ca2+交換體特異性阻斷劑KB-R7943(1×10-6mol·L-1)后，咪達(dá)唑侖的舒血管作用無(wú)變化，提示咪達(dá)唑侖不通過(guò)Na+/Ca2+交換體發(fā)揮舒血管作用。

K+通道在維持血管平滑肌張力中發(fā)揮著重要作用，激活血管平滑肌上的K+通道，K+外流，細(xì)胞膜超級(jí)化，從而抑制細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，引起血管舒張。為了探討咪達(dá)唑侖的舒張冠脈作用與K+通道之間的關(guān)系，我們分別觀察了不同K+通道阻斷劑對(duì)咪達(dá)唑侖舒張冠脈作用的影響。結(jié)果顯示，KATP阻斷劑Gli可以抑制咪達(dá)唑侖的舒張冠脈作用，BKCa阻斷劑TEA、Kir阻斷劑BaCl2、KV阻斷劑4-AP對(duì)咪達(dá)唑侖的舒張冠脈作用無(wú)影響。結(jié)果表明，KATP通道在咪達(dá)唑侖的舒張冠脈中發(fā)揮了作用，BKCa、Kir和KV通道未參與其舒張冠脈作用。

綜上所述，咪達(dá)唑侖可舒張KCl(30 mmol·L-1)預(yù)收縮的豬冠脈環(huán)，其舒血管作用具有濃度依賴性和內(nèi)皮依賴性，內(nèi)皮分泌的NO參與了其舒血管作用，外源性NO、iNOS以及PGI2的合成與其舒血管作用無(wú)關(guān)，咪達(dá)唑侖對(duì)豬冠脈的舒張可能與KATP通道有關(guān)，與 KV通道、BKCa通道、Kir通道以及Na+/Ca2+交換體無(wú)關(guān)。本實(shí)驗(yàn)是咪達(dá)唑侖舒血管機(jī)制的初步研究，本課題組將在后續(xù)的研究中從分子生物學(xué)、NO濃度測(cè)定、離子通道電生理等方面深入探討咪達(dá)唑侖舒血管機(jī)制。通過(guò)對(duì)咪達(dá)唑侖舒血管機(jī)制的研究，有助于闡明咪達(dá)唑侖在麻醉誘導(dǎo)或者鎮(zhèn)靜時(shí)，減少心肌氧耗、增加冠脈血流量、維持心血管系統(tǒng)的穩(wěn)定的作用機(jī)制。

(致謝:本實(shí)驗(yàn)在山西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室完成。感謝各老師和同學(xué)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的幫助。)

[1] 王 雷,孫 飛,李 艷, 等.咪達(dá)唑侖對(duì)異氟烷小鼠的鎮(zhèn)痛、催眠作用的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2010,26(11):1528-9.

[1] Wang L,Sun F,Li Y,et al.Influences of midazolam on the analgesic and hypnotic effects of isoflurane treated mice[J].ChinPharmacolBull, 2010, 26(11): 1528-9.

[2] Palmer P P, Miller R D. Current and developing methods of patient-controlled analgesia[J].AnesthesiolClin, 2010, 28(4): 587-99.

[3] Chen C C, Shen T Y, Chang M C, et al. Stress-induced myocardial ischemia is associated with early post-stress left ventricular mechanical dyssynchrony as assessed by phase analysis of 201Tl gated SPECT myocardial perfusion imaging[J].EurJNnuclMedMolImag, 2012, 39(12): 1904-9.

[4] Sahni D, Kaur G D, Jit H, et al. Anatomy & distribution of coronary arteries in pig in comparison with man[J].IndianJMedRes, 2008, 127(6): 564-70.

[5] Weksler B B. Prostanoids and NSAIDs in cardiovascular biology and disease[J].CurrAtherosclerRep, 2015, 17(7): 41.

[6] 閻 雨, 王夙博, 袁天翊, 等.Rho激酶抑制劑DL0805-0對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈的舒張作用及機(jī)制研究[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2014,30(4): 473-7.

[6] Yan Y,Wang S B,Yuan T Y, et al. Vasorelaxant effect of Rho kinase inhibitor DL0805-0 on isolated rat aortic rings and its underlying mechanisms[J].ChinPharmacolBull, 2014,30(4): 473-7.

[7] 房龍梅, 侯曉敏, 楊 蓉, 等.阿魏酸對(duì)離體大鼠冠狀動(dòng)脈的舒張作用及機(jī)制探討[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2016, 32(4): 554-8.

[7] Fang L M,Hou X M,Yang R, et al. Vasodilatory effect of ferulic acid oninvitrorat coronary artery[J].ChinPharmacolBull, 2016, 32(4): 554-8.

[8] Wang T T, Zhou G H, Kho J H, et al. Vasorelaxant action of an ethylacetate fraction of Euphorbia humifusa involves NO-cGMP pathway and potassium channels[J].JEthnopharmacol, 2013, 148(2): 655-63.

[9] O′connor D M, O′brien T. Nitric oxide synthase gene therapy: progress and prospects[J].ExpertOpinBiolTher, 2009, 9(7): 867-78.

[10]Qi W N, Chaiyakit P, Cai Y, et al. NF-kappaB p65 involves in reperfusion injury and iNOS gene regulation in skeletal muscle[J].Microsurgery, 2004, 24(4): 316-23.

[11]Dick G M, Tune J D. Role of potassium channels in coronary vasodilation[J].ExpBiolMed(Maywood), 2010, 235(1): 10-22.

Vasodilatory effect of midazolam on pre-contractions ofin-vitroporcine coronary artery and its mechanisms

REN Jun-jie1,3，WANG Ke-ke1，XU Hui-yu3，HUANG Ting-juan1,LYU Yi1, WU Dong-mei3，ZHANG Xuan-ping3，ZHENG Xiao-jun2
(1.DeptofInternalMedicine，2.DeptofPharmacy,theFirstHospitalofShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China;3.DeptofPharmacology，ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China)

Aim To investigate the effects of midazolam on porcine isolated coronary artery rings pre-contracted by potassium chloride(KCl) and the possible mechanism.Methods The vessel tension recorder system was used. Isotonic tension of porcine isolated coronary artery rings precontracted by KCl(30 mmol·L-1) was recorded. The vasorelaxing action of midazolam and effects of various drugs were observed in the rings.Results Midazolam(3×10-6～1×10-4mol·L-1) respectively concentration-dependently reduced the contraction induced by KCl, and there was significant difference between the rings with intact and denude endothelium(P<0.05). On KCl-induced precontraction,midazolam′s relaxation was depressed byL-NAME and the blend ofL-NAME and L-Arg(P<0.05), but was not affected by Indo,L-Arg and 1400W.The contraction was not prevented by pretreatment with the inhibitor of Na+/Ca2+exchanger(KB-R7943).The inhibitor of KATP(Gli) restrained the diastolic function of midazolam(P<0.05),while the inhibitor of BKCa(TEA), Kir(BaCl2), KV(4-AP) had no obvious effect.Conclusions Midazolam produces remarkable vasodilatation on KCl pre-contracted porcine isolated coronary artery rings. Its relaxtion effect is via concentration-dependent and endothelium-dependent mechanisms and relevant to the production of NO. Na+/Ca2+exchanger is not involved midazolam′s vasodilatation on KCl pre-contracted porcine coronary artery rings.The relaxant mechanism of midazolam may be concerned with KATP.The Kir,BKCaand KVmay be not involved.

midazolam;porcine coronary artery rings;vasodilator effect;NO;endothelium;potassium channel

2017-03-17,

2017-04-22

山西省研究生教育創(chuàng)新項(xiàng)目(No 2016BY077)；山西醫(yī)科大學(xué)青年基金(No 02201514)

任俊杰(1983-)，男，博士生，主治醫(yī)師，研究方向：心血管藥理學(xué)與細(xì)胞生理學(xué)，E-mail：renjunjie1120@163.com; 鄭曉俊(1972-)，女，碩士，副主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：心血管藥理學(xué)與細(xì)胞生理學(xué)，通訊作者，E-mail：sydyyzhengxiaojun@163.com; 武冬梅(1952-)，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：心血管藥理學(xué)與細(xì)胞生理學(xué)，通訊作者，E-mail：sydwudongmei@163.com

時(shí)間：2017-7-7 11:05 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170707.1104.036.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.08.018

A

1001-1978(2017)08-1131-05

R-332；R322.12；R331.32；R971.2