國(guó)內(nèi)豬用疫苗中牛病毒性腹瀉污染狀況調(diào)查匯總

（天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心天津300402）

國(guó)內(nèi)豬用疫苗中牛病毒性腹瀉污染狀況調(diào)查匯總

徐國(guó)棟

（天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心天津300402）

筆者對(duì)中國(guó)知網(wǎng)中關(guān)于國(guó)內(nèi)豬用疫苗原料、半成品或成品中牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）污染的調(diào)查文獻(xiàn)進(jìn)行了檢索，對(duì)其中所載BVDV污染相關(guān)因素進(jìn)行了匯總，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：2006年1月-6月，共檢索、遴選到22篇文獻(xiàn)，合計(jì)47篇次、15個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)、15類998份樣品、10類286份陽(yáng)性樣品，樣品平均陽(yáng)性率為28.68%，各時(shí)間節(jié)點(diǎn)內(nèi)的樣品陽(yáng)性率存在較大差異，其中2009年-2012年間的樣品陽(yáng)性率較高（31.86%，259/813），更接近于總體平均陽(yáng)性率（28.66%）。

豬；疫苗；牛病毒性腹瀉病毒；污染

牛病毒性腹瀉病毒（bovineviraldiarrheavirus，BVDV）污染豬用疫苗是導(dǎo)致國(guó)內(nèi)豬群中不斷檢出BVDV的重要原因[1-2]，為此，筆者對(duì)國(guó)內(nèi)公開發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行了檢索，對(duì)其中所載數(shù)據(jù)進(jìn)行了匯總，以期能厘清國(guó)內(nèi)豬用疫苗中BVDV污染的總體狀況。

1 匯總方法

1.1 檢索和遴選文獻(xiàn)的方法和條件

檢索中國(guó)知網(wǎng)中文數(shù)據(jù)庫(kù)（碩博、期刊、重要會(huì)議論文）中公開發(fā)表的國(guó)內(nèi)豬群BVDV感染狀況調(diào)查的文獻(xiàn)，主題是“豬＋牛病毒性腹瀉”，其后通過(guò)以下5個(gè)約束條件遴選得到目的文獻(xiàn)：①文獻(xiàn)發(fā)表時(shí)間段為2006年-2015年；②論文所載內(nèi)容詳實(shí)可信；③調(diào)查對(duì)象是國(guó)內(nèi)豬用疫苗；④調(diào)查內(nèi)容是BVDV對(duì)豬用疫苗原料、半成品或成品的污染狀況；⑤對(duì)所載內(nèi)容重復(fù)、數(shù)據(jù)反復(fù)利用的個(gè)別文獻(xiàn)，酌情選取最初發(fā)表的或檢測(cè)數(shù)據(jù)較完整的一篇文獻(xiàn)作為參考文獻(xiàn)。

1.2 文獻(xiàn)中原始數(shù)據(jù)的錄入方法

以樣品采集時(shí)間為序，依次錄入文獻(xiàn)中所載原始數(shù)據(jù)，包括：①采樣時(shí)間（年）；②檢測(cè)方法；③樣品種類；④樣品陽(yáng)性相關(guān)數(shù)據(jù)，包括檢測(cè)樣品份數(shù)、陽(yáng)性份數(shù)；⑤調(diào)查者，即參考文獻(xiàn)中的第1調(diào)查者或調(diào)查者（調(diào)查者為碩博論文作者）。

1.2.1 采樣時(shí)間的錄入方法錄入采樣時(shí)間時(shí)，按文獻(xiàn)所載的采樣時(shí)間（年）順序錄入，若數(shù)篇不同文獻(xiàn)為同年份采樣則不分先后順序錄入，但先期已被錄入的文獻(xiàn)在同一時(shí)間段中應(yīng)排列在前；若文獻(xiàn)未記載采樣時(shí)間則以文獻(xiàn)投稿日期為假定采樣時(shí)間，其次，若文獻(xiàn)未記載投稿日期則以文獻(xiàn)發(fā)表日期為假定采樣時(shí)間；若同篇文獻(xiàn)中同時(shí)記載了不同時(shí)間段的檢測(cè)結(jié)果，則分別錄入不同時(shí)間段及相關(guān)數(shù)據(jù)；若某文獻(xiàn)所載采樣時(shí)間段為連續(xù)的時(shí)間段，不能按每年記錄時(shí)間節(jié)點(diǎn)，則按連續(xù)時(shí)間段為節(jié)點(diǎn)錄入，例如某調(diào)查者在2014年-2015年的時(shí)間段連續(xù)采樣，但檢測(cè)數(shù)據(jù)中不能區(qū)分2014年、2015年中每年份中的檢測(cè)結(jié)果，則以2014年-2015年為時(shí)間段錄入。

1.2.2 檢測(cè)方法的錄入方法以采樣時(shí)間為序，依次錄入文獻(xiàn)所載的檢測(cè)方法。當(dāng)文獻(xiàn)應(yīng)用的方法為檢測(cè)BVDV遺傳物質(zhì)時(shí)，統(tǒng)一命名為“核酸檢測(cè)法”，其中可能包括了RT-PCR、雙重或多重RT-PCR、熒光RT-PCR和套式PCR等方法；當(dāng)文獻(xiàn)應(yīng)用ELISA法檢測(cè)樣品中BVDV抗原時(shí)，統(tǒng)一命名為“ELISA-抗原法”；當(dāng)文獻(xiàn)記載的方法是對(duì)豬群免疫可疑的疫苗，而后應(yīng)用ELISA檢測(cè)豬群BVDV血清抗體，以此推斷所用疫苗是否被BVDV污染進(jìn)，統(tǒng)一命名為“ELISA-抗體法”。

1.2.3 樣品種類的錄入方法以采樣時(shí)間為序，依次錄入文獻(xiàn)所載采集樣品的種類，若同篇文獻(xiàn)中記載了不同的樣品，則分別錄入。錄入時(shí)，應(yīng)遵循以下原則：①若樣品種類為豬瘟疫苗，但只記載豬瘟疫苗、豬瘟活疫苗而未記載其中弱毒的培養(yǎng)來(lái)源（如細(xì)胞源或兔源等）時(shí)，統(tǒng)一命名為“CSF弱毒苗”；若記載同時(shí)檢測(cè)了多種弱毒培養(yǎng)來(lái)源的豬瘟疫苗，但檢測(cè)結(jié)果未按弱毒來(lái)源分類記載，則仍命名為“CSF弱毒苗”；若記載了弱毒來(lái)源則按原文分別錄入，如：豬瘟脾淋苗錄入為“CSF脾淋苗”、豬瘟細(xì)胞苗錄入為“CSF細(xì)胞苗”等。②若樣品種類為藍(lán)耳病活疫苗則統(tǒng)一命名為“PRRS疫苗”，若樣品種類為偽狂犬病活疫苗則統(tǒng)一命名為“PR疫苗”。③若樣品種類為生產(chǎn)疫苗的細(xì)胞培養(yǎng)用進(jìn)口商品胎牛血清、犢牛血清，則統(tǒng)一命名為“進(jìn)口牛血清”；若為國(guó)產(chǎn)商品胎牛血清、犢牛血清，則統(tǒng)一命名為“國(guó)產(chǎn)牛血清”；若胎牛血清、牛血清不能區(qū)分源于進(jìn)口還是國(guó)產(chǎn)，則統(tǒng)一命名為“牛血清”。

1.2.4 樣品數(shù)量、陽(yáng)性樣品數(shù)量的錄入及陽(yáng)性率的計(jì)算方法以采樣時(shí)間為序，依次錄入文獻(xiàn)所載的樣品采集數(shù)量、陽(yáng)性樣品數(shù)，并按“陽(yáng)性率＝陽(yáng)性樣品數(shù)/樣品數(shù)×100%”計(jì)算陽(yáng)性率（精確到0.01%）。

1.2.5 調(diào)查者的錄入方法以采樣時(shí)間為序，依次錄入每篇文獻(xiàn)的第1作者或作者，同時(shí)記錄文獻(xiàn)序號(hào)。

1.3 原始數(shù)據(jù)的匯總方法

1.3.1 時(shí)間節(jié)點(diǎn)-篇次-樣品數(shù)-陽(yáng)性數(shù)-陽(yáng)性率的匯總方法以匯總的各時(shí)間段為原始數(shù)據(jù)，累計(jì)每個(gè)時(shí)間段（該時(shí)間段即為一個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)）中樣品采集的頻次，如2011年間有8次樣品調(diào)查的記錄，則該時(shí)間節(jié)點(diǎn)的采樣頻次記為“8”，即為樣品采集的頻次，并按出現(xiàn)頻次高低在表格中降序排列。以匯總的調(diào)查結(jié)果為原始數(shù)據(jù)，通過(guò)累加每個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)相關(guān)數(shù)據(jù)，得出陽(yáng)性率相關(guān)數(shù)據(jù)，包括樣品數(shù)、陽(yáng)性樣品數(shù)及陽(yáng)性率（精確到0.01%）。

1.3.2 檢測(cè)方法-篇次-樣品數(shù)-陽(yáng)性數(shù)-陽(yáng)性率的匯總方法以匯總的檢測(cè)方法為原始數(shù)據(jù)，依次對(duì)每篇文獻(xiàn)中所載檢測(cè)方法進(jìn)行分類累加，累計(jì)得出各種檢測(cè)方法的應(yīng)用頻次，按出現(xiàn)頻次高低在表格中降序排列，并對(duì)不同檢測(cè)方法中樣品的陽(yáng)性率（精確到0.01%）進(jìn)行匯總。

1.3.3 樣品種類-篇次-樣品數(shù)-陽(yáng)性數(shù)-陽(yáng)性率的匯總方法以匯總的樣品種類為原始數(shù)據(jù)，依次對(duì)各類樣品進(jìn)行累加，并計(jì)算出各類樣品在全部文獻(xiàn)所載樣品中的比例（精確到0.01%），并按出現(xiàn)頻次高低在表格中降序排列。

表1 豬用疫苗原料、半成品及成品中BVDV檢出原始數(shù)據(jù)表

樣品數(shù)陽(yáng)性數(shù)陽(yáng)性率192011核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗10110鄧宇等[13]202012核酸檢測(cè)法國(guó)產(chǎn)牛血清10990鄧宇等[14]212012核酸檢測(cè)法牛血清55100鄧宇等[14]222012核酸檢測(cè)法MDBK細(xì)胞33100鄧宇等[14]232012核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗201050鄧宇等[14]242012核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗502652鄭宇等[14]252012核酸檢測(cè)法PRRS疫苗500鄭宇等[14]262012核酸檢測(cè)法PR疫苗300鄭宇等[14]272012核酸檢測(cè)法MDBK細(xì)胞55100鄭宇等[14]282012核酸檢測(cè)法國(guó)產(chǎn)牛血清555396.36鄭宇等[14]292012核酸檢測(cè)法進(jìn)口牛血清1010100鄭宇等[14]302012核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗2784215.11韓文等[15]312012核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗11100陶潔等[16]322012核酸檢測(cè)法CSF細(xì)胞苗8787.5曹玉美等[17]332012核酸檢測(cè)法CSF脾淋苗200曹玉美等[17]342012核酸檢測(cè)法CSF細(xì)胞苗23521.74蒙明璐[18]352013核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗10110李晶梅等[19]362013核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗10110李晶梅等[19]372013核酸檢測(cè)法牛睪丸細(xì)胞500李晶梅等[19]382013核酸檢測(cè)法ST細(xì)胞100李晶梅等[19]392013核酸檢測(cè)法PK15細(xì)胞100李晶梅等[19]402013核酸檢測(cè)法牛血清4125李晶梅等[19]412013核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗1400王海光[20]422013核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗10110陶潔等[21]432014核酸檢測(cè)法進(jìn)口牛血清11100王競(jìng)晗等[22]442014-2015核酸檢測(cè)法CSF細(xì)胞苗3226.25李天芝等[23]452015核酸檢測(cè)法進(jìn)口牛血清4125鞠厚斌等[24]462015核酸檢測(cè)法國(guó)產(chǎn)牛血清8562.5鞠厚斌等[24]472015核酸檢測(cè)法CSF弱毒苗15426.67鞠厚斌等[24]序號(hào)年份檢測(cè)方法樣品種類調(diào)查方法調(diào)查人

2 結(jié)果

2.1 原始數(shù)據(jù)的錄入結(jié)果（見表1）

2.2 樣品中BVDV污染相關(guān)因素匯總結(jié)果

原始數(shù)據(jù)中，共錄入22篇文獻(xiàn)的相關(guān)數(shù)據(jù)，合計(jì)47篇次、15998份樣品、10類286份陽(yáng)性樣品，平均陽(yáng)性率為28.66%。

2.2.1 時(shí)間節(jié)點(diǎn)-篇次-樣品數(shù)-陽(yáng)性數(shù)-陽(yáng)性率的匯總結(jié)果匯總后發(fā)現(xiàn)文獻(xiàn)中共計(jì)有11個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)，其中以2010年、2011年、2012年、2013年間的篇次較多，占全部篇次的72.34%（34/47），樣品數(shù)占全部樣品數(shù)的72.75%（726/998），陽(yáng)性樣品數(shù)占全部陽(yáng)性數(shù)的78.67%（225/286）。各節(jié)點(diǎn)的樣品陽(yáng)性率結(jié)果見表2，各節(jié)點(diǎn)的樣品陽(yáng)性率比較圖見圖1。

2.2.2 檢測(cè)方法-篇次-樣品數(shù)-陽(yáng)性數(shù)-陽(yáng)性率的匯總結(jié)果匯總后發(fā)現(xiàn)核酸檢測(cè)法應(yīng)用頻次最高，占全部檢測(cè)方法的91.49%（43/47），應(yīng)用ELISA-抗原法、ELISA-抗體法的頻次分別為3、1；應(yīng)用核酸法檢測(cè)的樣品數(shù)占全部樣品數(shù)的88.38%（882/998），所檢測(cè)出陽(yáng)性樣品數(shù)占全部陽(yáng)性樣品數(shù)的90.91%（260/286）。不同方法檢出樣品陽(yáng)性率的結(jié)果見表3。

圖1 時(shí)間節(jié)點(diǎn)-樣品陽(yáng)性率（%）比較圖

表2 時(shí)間節(jié)點(diǎn)—篇次—樣品數(shù)—陽(yáng)性數(shù)—陽(yáng)性率匯總表

表3 檢測(cè)方法—篇次—樣品數(shù)—陽(yáng)性數(shù)—陽(yáng)性率匯總表

2.2.3 樣品種類-篇次-樣品數(shù)-陽(yáng)性數(shù)-陽(yáng)性率的匯總結(jié)果匯總后發(fā)現(xiàn)共有15類樣品被檢測(cè)，匯總的單類樣品陽(yáng)性率在0%～100%間，其中以MDBK的陽(yáng)性率最高（100%，8/8），此外，疫苗相關(guān)樣品、牛血清相關(guān)樣品的檢測(cè)數(shù)量及其陽(yáng)性率較高，結(jié)果是（見表4）：①豬用疫苗或其半成品（CSF細(xì)胞苗、CSF脾淋苗、CSF疫苗半成品、CSF弱毒苗、PRRS疫苗、PR疫苗）的檢測(cè)頻次為28，平均陽(yáng)性率為21.65%（176/813），其樣品數(shù)占全部樣品數(shù)的81.46%（813/998），其陽(yáng)性樣品數(shù)占全部陽(yáng)性樣品數(shù)的61.54%（176/286）。②牛血清相關(guān)樣品（進(jìn)口牛血清、國(guó)產(chǎn)牛血清、牛血清、含牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)物）的檢測(cè)頻率為12，其樣品的平均陽(yáng)性率為84.3%（102/121），其樣品數(shù)占全部樣品數(shù)的12.12%（121/998），其陽(yáng)性樣品數(shù)占全部陽(yáng)性樣品數(shù)的35.66%（102/286）。③5類樣品檢測(cè)結(jié)果為陰性。

表4 樣品種類—篇次—樣品數(shù)—陽(yáng)性數(shù)—陽(yáng)性率匯總表

3 結(jié)論

3.1 國(guó)內(nèi)公開發(fā)表的關(guān)于豬用疫苗BVDV污染情況的調(diào)查數(shù)據(jù)偏少

由表1和表2可以看出：2006年-2015年間，共檢索、遴選到22篇關(guān)于BVDV污染豬用疫苗的文獻(xiàn)，合計(jì)47篇次、15個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)、15類樣品、998份樣品、286份陽(yáng)性樣品、平均樣品陽(yáng)性率為28.68%。

3.2 不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的樣品陽(yáng)性率有差異

由表2、圖1可以看出：盡管2006年、2014年樣品陽(yáng)性率較高（均為100%），但樣品數(shù)過(guò)少，分別為2、1，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義較差，而2009年-2012年間的陽(yáng)性率較高，此期間樣品平均陽(yáng)性率為31.86%（259/813），各節(jié)點(diǎn)陽(yáng)性率在18.18%～37.5%間，樣品數(shù)占全部樣品數(shù)的81.46%（813/998），其平均陽(yáng)性率相關(guān)數(shù)據(jù)在全部陽(yáng)性率相關(guān)數(shù)據(jù)中權(quán)重較大，樣品平均陽(yáng)性率更接近于總體平均陽(yáng)性率（28.66%），或可說(shuō)明此期間豬用疫苗中BVDV的污染問題較受業(yè)界關(guān)注。

3.3 檢測(cè)豬用疫苗中BVDV污染的方法以核酸檢測(cè)法為主

由表3可以看出：核酸檢測(cè)法的應(yīng)用頻次較高91.49%（43/47），但需指出的是：或許核酸法檢出的BVDV陽(yáng)性率與豬群疫苗源BVDV感染率并不呈正相關(guān)，因?yàn)榧幢阍跇悠分袡z出BVDV遺傳物質(zhì)也不能推斷所檢陽(yáng)性樣品具有BVDV感染性。

3.4 不同樣品種類的陽(yáng)性率有差異

由表4可以看出：在15類樣品中，檢出率較高的樣品依次有MDBK細(xì)胞、各類牛血清樣品、疫苗類樣品，在疫苗類樣品中，CSF、PRRS疫苗可檢出BVDV遺傳物質(zhì)。此外，眾所周知，常規(guī)工藝生產(chǎn)的兔源CSF脾淋苗中不應(yīng)存在BVDV或其相關(guān)物質(zhì)，從CSF脾淋苗中檢測(cè)到BVDV核酸陽(yáng)性的事實(shí)推斷，當(dāng)時(shí)可能存在以細(xì)胞苗冒充脾淋苗的現(xiàn)象?！?/p>

略)

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.002