探討高效液相非接觸電導(dǎo)法測定鹽酸二甲雙胍的含量

耿玉濤

[摘要] 目的 是為了建立一種新的可以測定鹽酸二甲雙胍片中鹽酸二甲雙胍含量的高效液相非接觸電導(dǎo)檢測法。方法 用非接觸電導(dǎo)檢測器進(jìn)行實驗操作，采用C18色譜柱（4.6×250 mm），流動相為乙腈（0.01 mol / L 磷酸二氫鉀溶液（ 用磷酸調(diào)至 pH=3.5）（35∶75），流速為1.0 mL/min、進(jìn)樣量是10 μL、柱溫為35℃。 結(jié)果 鹽酸二甲雙胍進(jìn)樣量在0.10～1.04 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，平均回收率為 101.00%；RSD為0.26%。 結(jié)論 該法方便快捷、靈敏度高，為二甲雙胍的含量測定提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 高效液相；非接觸電導(dǎo)法；鹽酸二甲雙胍

[中圖分類號] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-4062（2017）03（b）-0085-02

[Abstract] Objective To establish a new method of high performance liquid chromatography in measuring the content of metformin hydrochloride. Methods Contactless conductivity detector was used for experimental operation and the C18 chromatographic column （4.6×250 mm）， the mobile phase was acetonitrile （0.01 mol / L buffer stock solution） （orthophosphoric acid pH=3.5）（35∶75）， flow rate 1.0ml/min， injection volume 10 μL， column temperature 35℃. Results The injection volume of metformin hydrochloride had a good liner relationship between 0.10 and 1.04 μg， the average recycle rate was 101.00% and RSD was 0.26%. Conclusion The method is simple and rapid with high sensitivity， which can provide reference for the measurement of content of metformin.

[Key words] High-performance liquid； Contactless conductivity detector； Metformin hydrochloride

鹽酸二甲雙胍片是治療單純因飲食沒有得到良好的控制而引起的2型糖尿病的降糖良藥，對于治療肥胖2型糖尿病有顯著的功效，尤其是一些糖尿患者在患有糖尿病的同時還伴有肥胖、高胰島素血癥等問題，都可以通過鹽酸二甲雙胍得到有效的治療。鹽酸二甲雙胍還能減輕體質(zhì)量、降低膽固醇，對于降低、減少糖尿病的多種并發(fā)癥具有顯著的作用。鹽酸二甲雙胍有水溶性高、致毒率低、不易在人體沉積、不對正常血糖起作用等優(yōu)點，被人們廣泛應(yīng)用，是我國治療糖尿病癥的基本藥物。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent LC- 1200 型高效液相色譜系統(tǒng)；色譜工作站，自制；高壓電源和非接觸電導(dǎo)檢測器；另外，實驗過程中所有的數(shù)據(jù)記錄及處理都在普通電腦上完成。

1.2 試劑

鹽酸二甲雙胍對照品（批號：100206-201103）；乙腈為色譜純；鹽酸二甲雙胍緩釋片（A批號為 131225；B：批號為20140317； C：批號為8030050） ；實驗用水為二次蒸餾水；其他試劑為國產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

首先制備供試品溶液，準(zhǔn)確稱取定量供試品，求出平均片質(zhì)量，研細(xì)并稱取約20 mg鹽酸二甲雙胍置于20 mL量瓶中，加流動相溶解后濾過，再準(zhǔn)確量取續(xù)濾液5 mL于100 mL的量瓶并稀釋至刻度并搖勻，該溶液即供試品溶液；再制備對照品溶液，精密稱取鹽酸二甲雙胍對照品10.36 mg，按供試品制備方法進(jìn)行配制；其次還要按照規(guī)定比例制備空白溶液，空白溶液不能含有鹽酸二甲雙胍，其配制方法按照供試品制備方法進(jìn)行配制即可。

2.2 色譜條件

色譜柱：Nucleosil C18色譜柱；流動相：乙腈（0.01 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)至 pH=3.5）（35∶75）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：35℃。非接觸電導(dǎo)檢測器，60 kHz的頻率，60 VP-P的電壓。

2.3 線性關(guān)系

精密量取對照品溶液2、4、8、12、、16、20 μL并分別注入色譜儀，運用非接觸電導(dǎo)檢測器檢測并記錄色譜儀，通過橫坐標(biāo)是進(jìn)樣量，縱坐標(biāo)是封面面積分值的線性關(guān)系得到了回歸方程Y=678.79X+270.42（r=0.996），這個結(jié)果的得出說明鹽酸二甲雙胍在0.10 ～ 1.04 μg 的范圍內(nèi)的進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系處于良好狀態(tài)。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

將已經(jīng)吸取準(zhǔn)備的3種溶液各10 μL分別注入到高效液相色譜儀并用非接觸電導(dǎo)檢測器檢測，得到的結(jié)果記錄入色譜圖。在這一過程中同一位置的吸收峰在供試品溶液和對照品溶液中都有顯現(xiàn)，空白對照則沒有，即說明實驗輔料對實驗的測定并沒有干擾。

2.5 精密度實驗

從鹽酸二甲雙胍對照品溶液中準(zhǔn)確的量取出10 μL該溶液，將該溶液連續(xù)進(jìn)樣 6 次測定峰面積，結(jié)果表明峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 0.20%（n=6），即實驗中使用的色譜條件比較好，實驗所用的儀器也有比較好的精密度。

2.6 重復(fù)性實驗

將鹽酸二甲雙胍試品5份，按供試品溶液的制備方法制備（批號為131225），在同一色譜條件下取出5份試品的溶液各10 μL進(jìn)行測定。結(jié)果表明這5份溶液的鹽酸二甲雙胍測定結(jié)果的含量的重復(fù)性較好（平均含量為101.3%，RSD為0.49%）。

2.7 穩(wěn)定性試驗

將鹽酸二甲雙胍對照品溶液準(zhǔn)確量取并分別測定5次的0、2、4、8、12 h，色譜選取實驗要求的條件并測定記錄峰面積。最后測定的鹽酸二甲雙胍實驗結(jié)果表明峰面積基本沒有什么變化[峰面積的RSD為0.82%（n=6）]，說明鹽酸二甲雙胍的對照品溶液在12 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.8 供試品測定

將不同批號的鹽酸二甲雙胍緩釋片樣品分別制備供試品溶液，再依次取3個供試品溶液10 μL；一一注入液相色譜儀，觀察并記錄實驗所測定的色譜圖，得出3個不同批號樣品中鹽酸二甲雙胍的各自的含量。結(jié)果表明3個溶液中批號131225的鹽酸二甲雙胍的含量為101.17%，RSD為0.35%；批號為815078的鹽酸二甲雙胍的含量為101.13%，RSD為0.56%；批號為150301的鹽酸二甲雙胍的含量為100.93%，RSD為0.35%。

3 討論

3.1 檢測器

電化學(xué)檢測具有很多的優(yōu)點，比如選擇性好、靈敏度高、檢測設(shè)備廉價、操作簡便等。而液相色譜儀中的這類檢測裝置繁多，常見的有蒸發(fā)光散射、紫外、二極管陣列、示差折光、熒光、化學(xué)發(fā)光、拉曼光譜、電化學(xué)、質(zhì)譜等。與傳統(tǒng)的易造成電極污染并難以清洗的傳統(tǒng)接觸式電導(dǎo)檢測器檢測電極與緩沖溶液直接接觸不同，近幾年新興的這種非接觸電導(dǎo)檢測技術(shù)中所用的許多功能結(jié)構(gòu)都比較新，具體表現(xiàn)再它的檢測池以及防污染上。它的檢測池結(jié)構(gòu)很簡單，還可以使電極與被測溶液無法直接接觸，防止了電極污染、分離電壓干擾等問題的出現(xiàn)。使測定分析物更加簡單便捷了。

3.2 流動相

由于鹽酸二甲雙胍的特定，它能在水和甲醇溶液中只能短時間留存一會，通過一系列的嚴(yán)密對比，得出磷酸二氫銨溶液是作為流動相最好的選擇。

3.3 流速、色譜柱

實驗的流速能夠?qū)嶒炛械某龇鍟r間起到很大的影響作用，流速越大，色譜柱壓力越大，而過大的壓力很有可能導(dǎo)致色譜柱損壞。該實驗所用的特定色譜條件對于鹽酸二甲雙胍的測定十分有利，它能保證實驗的流速、色譜柱壓力、色譜柱幾個要素都處在一個相對穩(wěn)定的位置。色譜柱使鹽酸二甲雙胍的分離度提高，靈敏度上升。在該實驗輔料不對實驗造成任何影響、不干擾實驗的特定條件下，鹽酸二甲雙胍的峰形相對較好、出峰也快、分離效果高于一般實驗。該實驗結(jié)果表明該實驗方法可以經(jīng)受實 驗的反復(fù)考驗、不會因此而出現(xiàn)數(shù)據(jù)等方面的誤差，實驗的速度也比較快、實驗方法簡單、準(zhǔn)確性強(qiáng)、對于鹽酸二甲雙胍的測定很有獨特的優(yōu)越處，即使再很少的實驗次數(shù)、實驗數(shù)據(jù)下也能很大程度地保證實驗的準(zhǔn)確性，是鹽酸二甲雙胍含量測定可選的可靠實驗方法。有了這一測定方法，鹽酸二甲雙胍含量的測定再也不是難題，它為鹽酸二甲雙胍含量的測定提供了重要的參考依據(jù)，該實驗應(yīng)該得到大量的推廣應(yīng)用，該實驗的推廣，能夠使人們對鹽酸二甲雙胍的掌握更加快速準(zhǔn)確。

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（收稿日期：2016-12-14）