MMP-2、TIMP-2在腦膜瘤組織中的表達(dá)及臨床意義

厲宗祥，曾現(xiàn)偉，季泰令，潘 順

(1濰坊醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261042;2濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院)

腦膜瘤多為良性腫瘤，生長(zhǎng)緩慢，約0.9% ～10.6%的腦膜瘤呈惡性并具有侵襲性，術(shù)后復(fù)發(fā)率高。2005年3月～2010年1月，我們采用免疫組化SP法檢測(cè)腦膜瘤組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)與基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-2(TIMP-2)的表達(dá)，旨在進(jìn)一步探討其在腦膜瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選取濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)切除的腦膜瘤組織標(biāo)本35份，患者男14例，女21例;年齡2～73歲，平均50歲。均經(jīng)病理證實(shí)，且符合WHO關(guān)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的分類標(biāo)準(zhǔn)［1］。參考病理結(jié)果及影像資料，將腦膜瘤分為惡性腦膜瘤15份(惡性組)，良性腦膜瘤20份(良性組)，兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。試劑:小鼠抗人TIMP-2單克隆抗體，工作濃度1∶100;兔抗人MMP-2多克隆抗體，工作濃度1∶100;IgG-1/2KITSABC小鼠/兔免疫組化試劑;DAB試劑盒。以上試劑均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)公司。

1.2 MMP-2、TIMP-2表達(dá)檢測(cè) 所有組織標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋，4 μl厚連續(xù)切片進(jìn)行免疫組織學(xué)染色。采用免疫組化SP法，切片常規(guī)至水，微波修復(fù)抗原，3%H2O2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，正常血清封閉，滴加一抗，濃度為1∶100，4℃過(guò)夜。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):MMP-2和TIMP-2的免疫著色部位均為胞質(zhì)和胞膜，以胞質(zhì)或胞膜呈均一棕黃色顆粒者為陽(yáng)性，無(wú)棕黃色著色顆粒的細(xì)胞為陰性。在×400視野下計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞核范圍為一個(gè)視野，計(jì)算5個(gè)視野免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞百分比平均值。每張玻片先經(jīng)一人觀察，另一人復(fù)查。根據(jù)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞的比率，記錄為半定量結(jié)果:未染色為(-)，陽(yáng)性細(xì)胞5% ～20%且染色強(qiáng)度較弱為(+)，21～50%且染色強(qiáng)度中等為(++)，＞50%且染色強(qiáng)度較強(qiáng)為(+++)。分析 MMP-2與TIMP-2表達(dá)的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，兩指標(biāo)在腦膜瘤中的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

惡性組及良性組MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率分別為73.3%(11/15)、15%(3/20)，TIMP-2 陽(yáng)性表達(dá)率分別為13.3%(2/15)、80%(16/20)，兩組比較 P 均＜0.01。腦膜瘤中MMP-2與TIMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.545，P ＜0.01)。

3 討論

腦膜瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見腫瘤之一，其人群發(fā)生率為6/100000，約占顱內(nèi)原發(fā)腫瘤的20%［2］。其中女性多于男性，生育期(30～50歲)患者約占80%，而在兒童中少見。腦膜瘤多為良性腫瘤，常與硬腦膜粘連并可侵犯硬腦膜，生長(zhǎng)緩慢，約0.9% ～10.6%的腦膜瘤呈惡性并具有侵襲性生物行為，惡性腦膜瘤發(fā)病年齡輕、病程短，病情進(jìn)展迅速［3］。術(shù)前CT、MRI檢查可確診大多數(shù)腦膜瘤，但鑒別其良惡性較困難。惡性腦膜瘤治療困難，術(shù)后復(fù)發(fā)率高。

Ⅳ型膠原是硬腦膜的關(guān)鍵成分，起硬腦膜屏障作用，能抵抗炎癥或腫瘤造成的吸收和破壞。MMP-2、MMP-9以細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ型膠原為主要底物，與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TIMPs是機(jī)體內(nèi)存在的MMPs特異性抑制劑，是一組多基因家族的編碼蛋白，目前已克隆出4種，分別為TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3 和 TIMP-4［4］。它們能與 MMPs 形成復(fù)合抑制物抑制MMPs，下調(diào)MMPs細(xì)胞外基質(zhì)降解活性，抑制腫瘤血管生成，從而抑制瘤細(xì)胞的侵襲性［5，6］。本研究惡性組MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率高于良性組，TIMP-2陽(yáng)性表達(dá)率低于良性組，P均＜0.01;腦膜瘤中MMP-2與TIMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。表明從良性腦膜瘤并進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒阅X膜瘤的過(guò)程中，MMP-2表達(dá)增多，TIMP-2表達(dá)減少均在其中起著一定的作用，參與了腦膜瘤的惡變過(guò)程。

總之，MMP-2可作為判斷腫瘤惡變的指標(biāo)，TIMP-2可作為腫瘤非惡變的指標(biāo)。其可對(duì)腦膜瘤預(yù)后評(píng)估、治療方法有指導(dǎo)作用。

［1］張福林，李振新.應(yīng)用WHO神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤新分類使腦腫瘤診斷規(guī)范化［J］.中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志，2001，27(2):151-152.

［2］王忠誠(chéng).神經(jīng)外科學(xué)［M］.武漢:湖北科學(xué)技術(shù)出版社，2005:587-588.

［3］Carrasco JR，Jacqueline R，Penne RB，et al.Optic nerve sheath meningiomas and advanced treatment options［J］.Current Opinion Ophthalmology，2004，15(5):406-410.

［4］Velasco G，Lopez-Otin C.Strategies for cloning new MMPs and TIMPs［J］.Methods Mol Biol，2001，(151):25-44.

［5］Zucker S，Hymowitz M，Conner C，et al.Measurement of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in blood and tissues［J］.Ann NY Acad Sci，1999，(878):212-217.

［6］Liotta LA，Steeg PS，Stetler-Stevenson WG.Cancer metastasis and angiogenesis:an imbalance of positive and negative regulation［J］.Cell，1991，64(2):327-336.