HPLC法測定大黃提取物中5種蒽醌的含量

卓俊睿

遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 貴州省遵義市 563006

HPLC法測定大黃提取物中5種蒽醌的含量

卓俊睿

遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 貴州省遵義市 563006

目的：采取HPLC法測量評定中藥材大黃中5種蒽醌（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）的含量。方法：采用依利特ODS2 C18、柱(200mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相為無水甲醇-濃度0.1%磷酸(75:25,V/ V），流速為1ml/min，檢測波長為255nm，柱溫26℃。結(jié)果：蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸的回歸方程如下：Y=1.97X-0.35，相關(guān)系數(shù)R=0.99993;Y=0.98X-0.21，相關(guān)系數(shù)R=0.99996;Y=1.26X-0.16，相關(guān)系數(shù)R=0.99994;Y= 2.35X +0.17，相關(guān)系數(shù)R=0.99992;Y=1.93X+0.08，相關(guān)系數(shù)R=0.99992;5種蒽醌的回收率如下：99.49%,97.37%,99.21%,98.84%和98.74%。結(jié)論：用HPLC法測定大黃提取物中5種蒽醌的含量不僅簡單快捷，而且具有準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，可以用于推廣。

HPLC法；蘆薈大黃素；大黃素甲醚；大黃酚；大黃素；大黃酸

目前對大黃的研究已較為深入，然而以HPLC法對大黃蒽醌含量的測定仍然欠缺研究，因此開展本研究，希望提供參考。

1 研究材料

大黃樣品采用自成都市大黃中藥材培植基地所產(chǎn)的掌葉大黃。實(shí)驗(yàn)儀器為Ultimate3000高效液相色譜儀、賽多利斯BT125D電子天平及KQ-250D型超聲波清洗器。主要試劑方面，蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸5中對照品及磷酸、分析甲醇、色譜甲醇等均來自市場購買，去離子水由研究者自制。

2 研究方法

2.1 色譜條件

255nm的檢測波長；1ml/min的流速；柱溫26℃；色譜柱采用依利特ODS2 C18、柱(200 mm x4.6 mm,5μm)。

2.2 自制溶液對照品

取適量大黃對照品，應(yīng)用無水甲醇，分別配置5種蒽醌成分（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）的對照品溶液，采用濃度20、10、20、20、和20μg/ml 。

2.3 自制供試品

精確稱量取用大黃中藥材0.500g，放置在25ml的容量瓶內(nèi)，分別添加無水甲醇20ml和超聲波提取35min，待溶液冷卻至接近室內(nèi)溫度，加入無水甲醇，定容到刻度，使震蕩溶解，用0.20μm濾膜過濾。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察

依據(jù)前文所述色譜條件，取用對照品溶液，精密吸取2、5、10、20、40μL，并分別進(jìn)行進(jìn)樣測定，以濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，得到5種蒽醌成分（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）的線性回歸方程。

2.4.2 精密度考察

依據(jù)前文所述色譜條件，吸取對照品的混合溶液，5次連續(xù)進(jìn)樣，計(jì)算5種蒽醌成分（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）峰面積下的RSD。

2.4.3 穩(wěn)定性考察

各吸供試品溶液，間隔2h進(jìn)行一次測定，得到供試品溶液中5種蒽醌成分（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）峰面積下的RSD。

2.4.4 重復(fù)性考察

取大黃樣品精密稱取5份，按照供試品的制備方法，制作溶液用于方法測定，依結(jié)果計(jì)算5種蒽醌成分（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）的保留時(shí)間以及峰面積下的RSD。

2.4.5 回收率考察

大黃樣品已知含量，精密稱取0.500g，共取三份，每一份中加入相同含量的對照品，按照供試品制備方法處理，得出平均回收率及RSD。

2.5 大黃含量測定

按照供試品制備方法，制得大黃樣品溶液后進(jìn)樣20μl，在255nm處，檢測樣品各成分所對應(yīng)峰面積，根據(jù)所計(jì)算的線性回歸方程，得出5種蒽醌成分（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）含量。

3 結(jié)果

3.1 方法學(xué)考察結(jié)果

（1）線性關(guān)系考察。計(jì)算得出大黃樣品中5種蒽醌成分（蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和大黃酸）的線性回歸方程，發(fā)現(xiàn)5種蒽醌成分均呈良好線性關(guān)系。具體結(jié)果見表1。

表1：5種蒽醌成分的線性回歸方程

（2）精密度考察。計(jì)算得出大黃樣品中5種蒽醌成分精密度良好，RSD分別是0.55%、1.25%、1.87%、1.08%和1.61%；（3）穩(wěn)定性考察。計(jì)算得出大黃樣品中5種蒽醌成分穩(wěn)定性良好，在12個(gè)小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。RSD分別是1.91%、1.30%、1.42%、1.54%、1.51%（n=7）；（4）重復(fù)性考察。計(jì)算得出大黃樣品中5種蒽醌成分重復(fù)性較好，在保留時(shí)間上的RSD分別是0.72%、2.04%、1.09%、1.74%、1.63%，在峰面積上的RSD分別是1.44%、1.82%、1.91%、0.74%、1.06%；（5）回收率考察。計(jì)算得出大黃樣品中5種蒽醌成分回收率分別是99. 49% ,97. 37% ,99. 21% ,98. 84%、98. 74%，其RSD分別是0.41%、1.47%、0.55%、1.32%、0.84%；方法學(xué)考察結(jié)果說明，用HPLC法測定大黃提取物中5種蒽醌的含量不僅簡單快捷，而且準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好。

3.2 含量測定結(jié)果

成都產(chǎn)掌葉大黃的5種蒽醌成分分別如下：蘆薈大黃素0.076%；大黃素甲醚0.145%；大黃酚0.823%；大黃素0.187%；大黃酸0.113%。

4 結(jié)論

本研究通過使用HPLC法，對大黃藥材中5種游離蒽醌含量進(jìn)行測定，確定了這種方法簡單快速、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好，可用于大黃藥材質(zhì)量評定。

[1]顏永剛,尹立敏,王紅艷等.HPLC法同時(shí)測定大黃炮制品中10種化 學(xué) 成 分 的 含 量[J].中 國 藥房,2016,27(27):3839-3842.

[2]毛春芳,施忠,羅琳等.HPLC法同時(shí)測定大黃中蘆薈大黃素等11種成分的量[J].中草藥,2014,45(16):2400-2403.

卓俊睿（1991-），女，貴州省遵義市人。遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校助教。碩士學(xué)位。專業(yè)為藥物化學(xué),主要研究方向?yàn)樯锎呋c手性合成。