精制冠心系列制劑提取工藝再評(píng)價(jià)研究

劉 濤， 唐 玉， 劉曉鳳， 彭曉鳳， 謝夢(mèng)蝶

(1.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 四川 成都 610106； 2.四川天一學(xué)院， 四川 綿竹 618200；3.成都大學(xué) 張瀾學(xué)院， 四川 成都 610106)

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精制冠心系列制劑提取工藝再評(píng)價(jià)研究

劉 濤1， 唐 玉1， 劉曉鳳2， 彭曉鳳1， 謝夢(mèng)蝶3

(1.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 四川 成都 610106； 2.四川天一學(xué)院， 四川 綿竹 618200；3.成都大學(xué) 張瀾學(xué)院， 四川 成都 610106)

對(duì)精制冠心系列制劑提取工藝進(jìn)行再評(píng)價(jià)研究，為改進(jìn)該系列制劑的生產(chǎn)工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).以有效成分提取轉(zhuǎn)移率和出膏率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，利用單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)全面試驗(yàn)考察精制冠心系列制劑提取工藝的可優(yōu)化參數(shù)和未明確參數(shù)，并確定其最佳提取工藝.精制冠心系列的最佳提取工藝為改進(jìn)后的精制冠心片提取工藝，具體為：丹參、赤芍、川芎、紅花用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量70%乙醇提取3 h，第二次加入8倍量70%乙醇提取2 h.結(jié)果表明，改進(jìn)后的精制冠心系列提取工藝穩(wěn)定可行，有效成分提取轉(zhuǎn)移率較高，可用于工業(yè)大生產(chǎn).

精制冠心系列制劑；提取工藝；再評(píng)價(jià)研究

0 引 言

精制冠心系列制劑由丹參、川芎、赤芍、紅花、降香5味中藥材組成，是《中國(guó)藥典》2015版一部收錄的中藥復(fù)方制劑，包括精制冠心片和精制冠心顆粒，具有活血化瘀之功效，臨床用于淤血內(nèi)停所致的胸痹，冠心病與心絞痛等癥[1].方中丹參與赤芍為君藥，丹參的主要成分為丹參酮IIA與丹酚酸B，赤芍的主要成分為芍藥苷.丹參酮IIA具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗心律失常等藥理作用；丹酚酸B具有保護(hù)心肌梗死、抑制動(dòng)脈粥樣硬化等藥理作用；芍藥苷具有保護(hù)腦缺血后血腦屏障及大腦局部血流量等藥理作用[2-4].同是源于冠心康顆粒的精制冠心片與冠心顆粒2種中成藥[5]，其提取工藝卻不同，導(dǎo)致其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能不同.何種提取工藝較佳，有待研究評(píng)價(jià).對(duì)此，本研究以基于中藥工藝與質(zhì)量控制的中成藥再評(píng)價(jià)研究理論[6]為基礎(chǔ)，以指標(biāo)成分提取轉(zhuǎn)移率和出膏率的綜合評(píng)分[7]為指標(biāo)，對(duì)精制冠心系列制劑提取工藝進(jìn)行再評(píng)價(jià)研究，擬為改進(jìn)該系列制劑的生產(chǎn)工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 試藥與儀器

1.1 試 藥

實(shí)驗(yàn)所用試藥包括：丹參(批號(hào)20160730)、川芎(批號(hào)20131224)、赤芍(批號(hào)20141214)、紅花(批號(hào)20141214)、降香(批號(hào)20141214)，均購(gòu)自于成都市荷花池中藥材市場(chǎng)，經(jīng)成都大學(xué)徐玉玲副教授鑒定為正品；芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)150913，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%)、丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào)151119，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%)、丹參酮IIA對(duì)照品(批號(hào)160304，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%)購(gòu)自四川維克奇生物技術(shù)有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，其余為分析純，均購(gòu)自成都市科龍化工試劑廠(chǎng)；水為怡寶純凈水.

1.2 儀 器

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括：DZTW型電子調(diào)溫電熱套(天津市靜海縣工興電器廠(chǎng))；DZF-6050A型真空恒溫干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；SHZ-DⅢ型循環(huán)水真空泵(鄭州杜甫儀器廠(chǎng))；P230型高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司)；FA2004型分析天平(上海良平儀器儀表有限公司)；BS-6KH型電子天平(上海友聲衡器有限公司)；酒精計(jì)(武強(qiáng)同輝儀表廠(chǎng))；HS3120型超聲波清洗器.

2 方法與結(jié)果

2.1 指標(biāo)成分的含量測(cè)定

2.1.1 精制冠心片中芍藥苷、丹酚酸B、丹參酮IIA的含量測(cè)定.

精制冠心片中芍藥苷、 丹酚酸B、丹參酮IIA按《中國(guó)藥典》2015版一部“精制冠心片”項(xiàng)下方法測(cè)定[1].2.1.2 精制冠心顆粒中芍藥苷、丹酚酸B含量測(cè)定.

精制冠心顆粒中芍藥苷、丹酚酸B按《中國(guó)藥典》2015版一部“精制冠心顆粒”項(xiàng)下方法測(cè)定[1].

2.2 干膏率的測(cè)定

取干燥至恒重的蒸發(fā)皿，精密加入50 mL藥液，水浴蒸干，于105 ℃烘3 h，干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱(chēng)定質(zhì)量，計(jì)算確定干膏率.

2.3 精制冠心片提取工藝參數(shù)確定

按《中國(guó)藥典》2015版一部方法，精制冠心片中丹參、赤芍、川芎、紅花提取工藝中提取所用乙醇濃度偏大且未明確乙醇用量.對(duì)此，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)其進(jìn)行再評(píng)價(jià)研究.

2.3.1 提取所用溶媒量及所用溶媒濃度考察.

在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取乙醇用量、乙醇濃度為考察因素，以芍藥苷轉(zhuǎn)移率、丹酚酸B轉(zhuǎn)移率、丹參酮ⅡA轉(zhuǎn)移率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，按處方比例稱(chēng)取丹參37.6 g，赤芍18.8 g，川芎18.8 g，紅花18.8 g，共4份，按L4(23)正交表安排實(shí)驗(yàn)，按“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定.實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果見(jiàn)表1，方差分析見(jiàn)表2.

表1 兩因素兩水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：綜合評(píng)分=芍藥苷轉(zhuǎn)移率/芍藥苷最大轉(zhuǎn)移率×33.33+丹酚酸B轉(zhuǎn)移率/丹酚酸B最大轉(zhuǎn)移率×33.33+丹參酮ⅡA轉(zhuǎn)移率/丹參酮ⅡA最大轉(zhuǎn)移率×33.33

表2 兩因素兩水平試驗(yàn)顯著性差異分析表

由表1、2可知：各因素對(duì)提取工藝的影響因素順序?yàn)锽(乙醇用量)>A(乙醇濃度)；方差分析表明，因素B具有顯著性影響，因素A影響不顯著.根據(jù)數(shù)據(jù)分析，選取最佳提取工藝為A2B1，即加入10倍量70%乙醇回流提取2次.

2.3.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn).

按“2.3.1”項(xiàng)下優(yōu)選的提取工藝平行制備3份供試品，按“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定.驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芍藥苷、丹酚酸B與丹參酮IIA的轉(zhuǎn)移率RSD分別為，1.69%、4.71%與4.92%，說(shuō)明優(yōu)選的提取工藝較穩(wěn)定可行.

2.3.3 2次加入溶媒量?jī)?yōu)化.

取丹參37.6 g、赤芍18.8 g、川芎18.8 g、紅花18.8 g，加入70%乙醇回流提取2次，每次加入的溶媒量不同，第一次提取3 h，第二次提取2 h.采用單因素試驗(yàn)法，并按“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定.實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 優(yōu)化2次加入溶媒量

由表3結(jié)果可知，精制冠心片的最佳提取工藝為：丹參、赤芍、川芎、紅花按照《中國(guó)藥典》2015版一部規(guī)定的處方比例，用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量乙醇提取3 h，第二次加入8倍量乙醇提取2 h.

2.4 精制冠心顆粒提取工藝參數(shù)確定

按《中國(guó)藥典》2015版一部方法，精制冠心顆粒中丹參、赤芍、川芎、降香提取工藝中溶媒量不確定，冷凝回流次數(shù)多且提取時(shí)間較長(zhǎng).對(duì)此，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)其進(jìn)行再評(píng)價(jià)研究.

2.4.1 精制冠心顆粒中丹參、赤芍、川芎、降香提取工藝參數(shù)確定.

選取溶媒量(用水量)、提取次數(shù)為考察因素，以芍藥苷轉(zhuǎn)移率、丹酚酸B轉(zhuǎn)移率與干膏率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，按處方比例稱(chēng)取丹參30.0 g，赤芍15.0 g，川芎15.0 g，降香10.0 g，因素水平實(shí)驗(yàn)安排見(jiàn)表4，按“2.1.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定，按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行干膏率測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析見(jiàn)表6.

表4 全面實(shí)驗(yàn)因素水平表

表5 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表

注：綜合評(píng)分=丹酚酸B轉(zhuǎn)移率/丹酚酸B最大轉(zhuǎn)移率×50.00+芍藥苷轉(zhuǎn)移率/芍藥苷最大轉(zhuǎn)移率×30.00+出膏率/最大出膏率×20.00[9].

表6 綜合評(píng)分方差分析

由表5、6可知，各因素對(duì)提取工藝的影響因素順序?yàn)锽(提取次數(shù))>A(溶媒量)；方差分析表明，因素B具有顯著性影響，因素A影響不顯著.根據(jù)數(shù)據(jù)分析，選取最佳提取工藝為A1B3，即以水為提取溶媒，選取溶媒量為4倍，回流提取3次，提取時(shí)間分別為1.5 h、1 h、0.5 h.

2.4.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn).

按“2.4.1”項(xiàng)下優(yōu)選的提取工藝平行制備3份供試品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定，按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行干膏率測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芍藥苷轉(zhuǎn)移率、丹酚酸B轉(zhuǎn)移率、出膏率RSD分別為：2.97%、4.57%、0.80%，說(shuō)明優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定可行.

2.4.3 精制冠心顆粒工藝對(duì)比實(shí)驗(yàn).

稱(chēng)取丹參30.0 g，赤芍15.0 g，川芎15.0 g，降香10.0 g，以4倍量水進(jìn)行提取.按照《中國(guó)藥典》2015版一部規(guī)定工藝平行制備3份供試品，即供試品1、供試品2、供試品3.按“2.4.1”項(xiàng)下優(yōu)選的提取工藝平行制備3份供試品，即供試品4、供試品5、供試品6.對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7.

表7 提取工藝對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表7結(jié)果可知，“2.4.1”項(xiàng)下優(yōu)選的提取工藝不僅比《中國(guó)藥典》2015版一部規(guī)定提取工藝芍藥苷轉(zhuǎn)移率、丹酚酸B轉(zhuǎn)移率、出膏率的綜合評(píng)分高，結(jié)果穩(wěn)定，而且提取時(shí)間大大縮短，適合工業(yè)化大生產(chǎn)流程.因此，精制冠心顆粒的最佳提取工藝為：丹參、赤芍、川芎、降香按照《中國(guó)藥典》2015版一部規(guī)定的處方比例，以水為提取溶媒，選取溶媒量為4倍，回流提取3次，提取時(shí)間分別為1.5 h、1 h、0.5 h.

2.5 中間體顯著性差異對(duì)比實(shí)驗(yàn)

按“2.3.1”項(xiàng)下優(yōu)選的提取工藝平行制備3份精制冠心片中間體，即供試品1、供試品2、供試品3.按“2.4.1”項(xiàng)下優(yōu)選的提取工藝平行制備3份精制冠心顆粒中間體，即供試品4、供試品5、供試品6.按“2.1.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定，按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行干膏率測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8.

表8 中間體顯著性差異對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：P為供試品1、供試品2、供試品3與供試品4、供試品5、供試品6之間的顯著性差異.

由表8結(jié)果可知，精制冠心片中間體與精制冠心顆粒中間體的芍藥苷轉(zhuǎn)移率、丹酚酸B轉(zhuǎn)移率、出膏率無(wú)顯著性差異，而丹參酮IIA轉(zhuǎn)移率具有極顯著性.丹參酮IIA微溶于水，精制冠心顆粒由于提取工藝原因，丹參酮IIA幾乎完全喪失.丹參酮IIA作為君藥丹參的主要藥效成分，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血栓、抗心律失常等藥理作用，與精制冠心系列處方功能主治相符，為處方中不可或缺的藥效物質(zhì)基礎(chǔ).

據(jù)此，精制冠心系列的最佳提取工藝為改進(jìn)后的精制冠心片提取工藝，即：丹參、赤芍、川芎、紅花用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量70%乙醇提取3 h，第二次加入8倍量70%乙醇提取2 h.

3 討 論

藥物上市后的再評(píng)價(jià)是藥品研究的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，是確保用藥安全的有效手段，也是對(duì)新藥評(píng)價(jià)的擴(kuò)大和延伸[8-10].由于精制冠心片與顆粒處方相同，功能主治相同，但因提取工藝參數(shù)不明確，提取工藝不一致，可能引起成品物質(zhì)基礎(chǔ)不一致，因此有必要對(duì)其進(jìn)行再評(píng)價(jià)研究.本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)明確了上述2種劑型的提取工藝參數(shù)，使其提取工藝路線(xiàn)更合理可行，確定精制冠心系列的最佳提取工藝為改進(jìn)后的精制冠心片提取工藝，此為改進(jìn)該系列制劑的生產(chǎn)工藝提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù).需指出的是，為了進(jìn)一步對(duì)比2種劑型藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的差異，還需要進(jìn)一步展開(kāi)其HPLC指紋圖譜的研究工作，以便更全面有效地控制2種制劑的質(zhì)量.

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Re-evaluation on Extraction Process of Refined Crown Series Preparations

LIUTao1,TANGYu1,LIUXiaofeng2,PENGXiaofeng1,XIEMengdie3

(1.School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China;2.Sichuan Tianyi University, Mianzhu 618200, China; 3.School of Zhanglan, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

The study of the re-evaluation on the extraction process of refined crown series preparations provided experimental basis for improving the production technology of the series.With the comprehensive evaluation of the extraction transfer rate and the dry extraction ratio as index, the single factor test,the orthogonal test and comprehensive test were used to investigate the optimizable parameters and unspecified parameters to find the best extraction process of refined crown series preparations.The optimal extraction process of refined crown series preparations was the improved extraction process of refined coronary tablets:Salvia miltiorrhiza Bge,Paeonia veitchii Lynch,Ligusticum chuanxiong Hort and Carthamustinctorius L were extracted twice with 70% ethanol reflux,and 10 times of 70% ethanol was added and the extraction lasted for 3 h for the first time,and 8 times of 70% ethanol was added and the extraction lasted for 2 h for the second time.The conclusion drawn from the paper is that the improved extraction process of refined crown series preparations is stable and feasible,which has higher effective component extraction transfer rate and can be used for industrial production.

refined crowns series preparations;extraction process;re-evaluation

1004-5422(2017)02-0131-04

2017-04-05.

四川省千人計(jì)劃(2013332)資助項(xiàng)目.

劉 濤(1976 — )， 男， 博士， 研究員， 從事中成藥開(kāi)發(fā)與再評(píng)價(jià)研究.

R284.2

A