• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    密孔菌固態(tài)發(fā)酵農(nóng)業(yè)廢棄物產(chǎn)漆酶活性的研究

    2017-07-05 13:06:55李秀男牛子琪胡衛(wèi)成王新風
    關(guān)鍵詞:孔菌木屑廢棄物

    李秀男, 牛子琪, 胡衛(wèi)成,2,3, 王新風,2,4

    (1.淮陰師范學院 生命科學學院, 江蘇 淮安 223300; 2.淮安市食品組分與功能食品重點實驗室, 江蘇 淮安 223300; 3.江蘇省區(qū)域農(nóng)業(yè)與環(huán)境保護協(xié)同創(chuàng)新中心, 江蘇 淮安 223300;4.江蘇省生物質(zhì)能與酶技術(shù)重點實驗室, 江蘇 淮安 223300)

    密孔菌固態(tài)發(fā)酵農(nóng)業(yè)廢棄物產(chǎn)漆酶活性的研究

    李秀男1, 牛子琪1, 胡衛(wèi)成1,2,3, 王新風1,2,4

    (1.淮陰師范學院 生命科學學院, 江蘇 淮安 223300; 2.淮安市食品組分與功能食品重點實驗室, 江蘇 淮安 223300; 3.江蘇省區(qū)域農(nóng)業(yè)與環(huán)境保護協(xié)同創(chuàng)新中心, 江蘇 淮安 223300;4.江蘇省生物質(zhì)能與酶技術(shù)重點實驗室, 江蘇 淮安 223300)

    分別以玉米秸稈、小麥秸稈和楊樹木屑為原料,研究了一株密孔菌在發(fā)酵不同農(nóng)業(yè)廢棄物時漆酶的活性.結(jié)果表明,農(nóng)業(yè)廢棄物對密孔菌產(chǎn)漆酶具有良好的誘導效果,且以玉米秸稈的效果最佳,漆酶酶活可達40.92 U·mg-1.Cu2+的存在或濃度變化顯著影響密孔菌產(chǎn)酶,當添加0.02% Cu2+時,菌株在小麥秸稈和木屑培養(yǎng)基上產(chǎn)酶活分別達到41.24 U·mg-1和57.13 U·mg-1;當Cu2+濃度為0.04%時,菌株在玉米秸稈培養(yǎng)基上分泌漆酶酶活達到峰值94.92 U·mg-1.pH值對密孔菌產(chǎn)漆酶有明顯影響,在中酸性環(huán)境中菌株產(chǎn)漆酶酶活較高.菌株在小麥秸稈和玉米秸稈培養(yǎng)基上發(fā)酵產(chǎn)酶的最適溫度較高,分別為35℃和40℃,且在整個發(fā)酵周期能維持較高較穩(wěn)定的酶活水平.因此,密孔菌有很好產(chǎn)漆酶和降解農(nóng)作物秸稈的能力,可用于農(nóng)作物秸稈處理.

    密孔菌; 固態(tài)發(fā)酵; 農(nóng)業(yè)廢棄物; 漆酶

    0 引言

    漆酶是一類含銅多酚氧化酶,廣泛存在于高等植物和真菌體內(nèi)[1].目前已知真菌類的擔子菌、子囊菌和半知菌大多都具有產(chǎn)漆酶能力,其中具有降解木質(zhì)素能力的白腐菌是主要的漆酶產(chǎn)生菌[2].在過去的幾十年中,人們發(fā)現(xiàn)漆酶具有廣泛的底物特異性,可以氧化酚類、芳胺類、羧酸類、甾體激素與生物色素、金屬有機化合物和一些非酚類物質(zhì),且副產(chǎn)物只有水,被譽為“綠色酶”.漆酶不僅在生物制漿、生物漂白以及有毒化合物的降解等方面有重要的應用前景,而且在合成工業(yè)、生物檢測、染料降解等方面也具有潛在的應用前景[3-5].它們的應用從紡織到紙漿和造紙工業(yè)[6-7],從食品[8]到有機合成[9]和制藥工業(yè)[10],從生物降解到環(huán)境保護和生態(tài)修復[11-13]等多個領域越來越廣泛,隨著人們對漆酶作用機理的深入了解,以及對白腐真菌這一降解木質(zhì)素明星微生物的研究,利用白腐真菌來處理農(nóng)業(yè)廢棄物的研究也就走進了研究者的視線.

    目前,我國已成為世界上農(nóng)業(yè)廢棄物產(chǎn)出量最大的國家,其中農(nóng)作物秸稈年產(chǎn)量達7億噸(干質(zhì)量),畜禽糞便排放量30多億噸,鋸末、刨花等林業(yè)廢棄物16 000噸[14].在我國各地政府部門的大力倡導下,作為主要農(nóng)業(yè)廢棄物的秸稈大多以直接還田的方式行處理,如江蘇省淮安市秸稈年產(chǎn)量達420萬噸,其中夏季所產(chǎn)的秸稈還田量可達95%.秸稈還田的過程也是微生物降解的過程,農(nóng)業(yè)廢棄物是一種富含木質(zhì)素資源(如稻草中含木質(zhì)素10%~15%,纖維素35%~40%和半纖維素25%~30%),也是一種天然的漆酶誘導劑[15].本文將討論一株密孔菌(Pycnoporuscoccineus)在發(fā)酵不同農(nóng)業(yè)廢棄物時漆酶的活性變化情況,旨在為加強農(nóng)業(yè)廢棄物的綜合利用和對農(nóng)業(yè)面源污染的綜合治理尋找理論依據(jù).

    1 材料方法

    1.1 菌種

    緋紅密孔菌(Pycnoporuscoccineus),采自江蘇省溧陽市天目湖南山竹海翠谷莊園板栗林,本實驗室保存.

    1.2 試劑和儀器

    2,2-連氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS),美國Sigma 公司產(chǎn)品;考馬斯亮藍G250和牛血清蛋白,Amresco分裝;冰乙酸,無水乙酸鈉為市售分析純.

    T6新世紀紫外可見分光光度計(北京普析).

    1.3 培養(yǎng)基

    母種活化培養(yǎng)基: PDA固體培養(yǎng)基.

    液體種子培養(yǎng)基: 土豆200 g,葡萄糖20 g,酵母膏5 g,自來水1000 mL.

    固體發(fā)酵培養(yǎng)基: 楊樹木屑、玉米秸稈、小麥秸稈分別輕度粉碎,按每種基質(zhì)的總質(zhì)量加入2%蔗糖、1% Ca(OH)2、1% KH2PO4、0.5% MgSO4、0.5%酵母膏、2%石膏、10 mg·L-1VB,以最終培養(yǎng)基含水量為65%為標準加入適量自來水,反復搓揉均勻,用塑料薄膜蓋2 h.

    銅離子濃度試驗培養(yǎng)基: 在固體發(fā)酵培養(yǎng)基基礎上加入CuSO4·5H2O,調(diào)整培養(yǎng)基中銅離子濃度分別為(0.01%、0.02%、0.03%、0.04%),以未加CuSO4·5H2O的培養(yǎng)基為空白對照考察銅離子濃度對緋紅密孔菌產(chǎn)漆酶的影響.

    pH試驗培養(yǎng)基: 根據(jù)試驗培養(yǎng)基計算所需自來水體積,將除石膏外的各試劑溶于定量自來水中,用檸檬酸和Na2CO3分別調(diào)節(jié)pH為3.0,5.0,7.0,9.0,11.0,加入石膏,均勻拌入固體基質(zhì)中.考察發(fā)酵料初始pH對緋紅密孔菌產(chǎn)漆酶的影響.

    溫度試驗培養(yǎng)基: 在固體發(fā)酵培養(yǎng)基基礎上加入適量的CuSO4·5H2O,分別置于不同溫度下(20℃,25℃,30℃,35℃,40℃)培養(yǎng),考察培養(yǎng)溫度對緋紅密孔菌產(chǎn)漆酶的影響.

    1.4 方法

    1.4.1 發(fā)酵培養(yǎng)

    將活化后的母種,接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基,25℃,120 r·min-1恒溫振蕩,避光培養(yǎng)5 d后,得到液體菌種.配制固體培養(yǎng)基,按每罐10 g基質(zhì)(小麥秸稈、玉米秸稈或木屑)分裝于玻璃罐頭瓶中,每罐發(fā)酵料終體積約占1/3.將液體菌種接種于不同配方的固體培養(yǎng)基上,適宜溫度下恒溫避光培養(yǎng).

    1.4.2 粗酶液獲取

    在無菌條件下, 隨機選擇生長狀態(tài)一致的菌絲體培養(yǎng)料1 g, 置于加入15 mL醋酸緩沖液(0.2 mol·L-1,pH 4.5)的100 mL三角瓶中,25℃,120 rpm的搖床中浸提2 h,4 000 r·min-1離心10 min后取上清液,即為粗酶液.

    1.4.3 可溶性蛋白測定

    采用考馬斯亮藍G250法[16].蛋白濃度在20 ~80μg·mL-1之間,蛋白含量與吸光度值呈很好的線性關(guān)系,兩者間的回歸方程為:y=0.0062x+0.0081,相關(guān)系數(shù)r=0.9981.

    1.4.4 酶活測定方法

    漆酶活力的測定采用ABTS法[1],以2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)為底物,量取2 mL ABTS,將3.2 mL pH 4.5的醋酸緩沖液和0.8 mL稀釋好的粗酶液混合,使反應總體積為6 mL.測定反應前3 min內(nèi)420 nm 處每30 s吸光值的變化,酶活定義為粗酶液中每mg蛋白每分鐘引起吸光度增加0.1所需要的酶量,單位為U·mg-1.酶活計算公式:

    其中,V酶為添加酶液體積(mL);n為蛋白含量(μg·mL-1).

    2 結(jié)果

    2.1 農(nóng)業(yè)廢棄物對密孔菌漆酶活性的影響

    如表1所示,密孔菌在玉米秸稈培養(yǎng)基上產(chǎn)酶酶活最高,在培養(yǎng)的第11 d,漆酶酶活達到峰值40.92 U·mg-1.而菌株在小麥秸稈和木屑培養(yǎng)基上產(chǎn)酶酶活最大值相差不多,分別為12.33 U·mg-1和11.18 U·mg-1.這可能是由于廢棄物的種類或所取廢棄物的部位不同,而導致各發(fā)酵培養(yǎng)基中纖維素、半纖維素、木質(zhì)素含量不同造成的結(jié)果[17].

    表1 農(nóng)業(yè)廢棄物對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    2.2 Cu2+對密孔菌漆酶活性的影響

    漆酶作為一種含銅的多酚氧化酶,屬于藍色多銅氧化酶[18].它的活性位點主要由4個3種不同類型的銅離子組成,因此銅離子是漆酶分泌的一個重要影響因素[19].本實驗通過改變產(chǎn)酶培養(yǎng)基中Cu2+濃度,研究其對漆酶產(chǎn)量的影響.結(jié)果如表2~表4所示.

    表2 小麥秸稈培養(yǎng)基上Cu2+對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    表3 玉米秸稈培養(yǎng)基上Cu2+對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    表4 木屑培養(yǎng)基上Cu2+對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    結(jié)果表明,在以不同農(nóng)業(yè)廢棄物為主料的培養(yǎng)基上,Cu2+對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響也不相同.對于小麥秸稈,當Cu2+濃度為0.02%時,菌株產(chǎn)漆酶酶活最高,為41.24 U·mg-1.對于玉米秸稈,當Cu2+濃度為0.04%時,菌株分泌漆酶酶活達到峰值94.92 U·mg-1.在培養(yǎng)初期,添加Cu2+的培養(yǎng)基產(chǎn)酶酶活低于空白培養(yǎng)基,而隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加,Cu2+對菌株分泌漆酶的促進作用逐漸表現(xiàn)出來;而木屑培養(yǎng)基中,Cu2+濃度為0.02%時,菌株產(chǎn)漆酶酶活最高,達到57.13 U·mg-1.并且在整個培養(yǎng)過程中,添加0.02%和0.03%濃度Cu2+的培養(yǎng)基產(chǎn)漆酶酶活均高于空白培養(yǎng)基,Cu2+對菌株產(chǎn)漆酶的促進作用十分顯著.過高或過低濃度的銅離子都不利于漆酶的分泌.

    2.3 發(fā)酵料初始pH對密孔菌漆酶活性的影響

    研究表明,漆酶合成與活力表達受環(huán)境pH影響顯著[20-21].本實驗調(diào)整3種發(fā)酵料不同初始pH值,考察其對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響.實驗結(jié)果如表5~表7所示.

    表5 小麥秸稈培養(yǎng)基上發(fā)酵料初始pH對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    表6 玉米秸稈培養(yǎng)基上發(fā)酵料初始pH對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    表7 木屑培養(yǎng)基上發(fā)酵料初始pH對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    結(jié)果顯示,菌株在中酸性條件下分泌漆酶酶活較高,而在堿性環(huán)境中產(chǎn)酶酶活極低甚至檢測不出.此外,菌株在不同培養(yǎng)基上產(chǎn)酶所需最適pH也存在差異.對于小麥秸稈和玉米秸稈培養(yǎng)基,菌株在偏中性環(huán)境中產(chǎn)酶酶活較高,分別在初始pH為7和5時達到酶活峰值45.79 U·mg-1和59.77 U·mg-1;而在木屑培養(yǎng)基中,菌株更適宜在偏酸性環(huán)境中生長,在初始pH值為3時酶活最高,為86.14 U·mg-1,且出現(xiàn)的時間晚于小麥秸稈和玉米秸稈.有研究表明,真菌在中偏酸性環(huán)境下酶活較高,這與本實驗研究結(jié)果基本一致[22].尹艷麗等[23]認為偏酸性條件,一方面會促進白腐菌生長,另一方面,由于漆酶的最適作用pH為酸性,因而能使白腐菌分泌的漆酶保持較高活性.

    2.4 培養(yǎng)溫度對密孔菌漆酶活性的影響

    微生物的生命活動都是由一系列的生化反應組成的,這些反應受溫度影響極其明顯,所以溫度是影響微生物生長繁殖的重要因素之一[24].本實驗設置不同的培養(yǎng)溫度,考察其對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響.實驗結(jié)果如表8~表10所示.

    表8 小麥秸稈培養(yǎng)基上培養(yǎng)溫度對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    表9 玉米秸稈培養(yǎng)基上培養(yǎng)溫度對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    表10 木屑培養(yǎng)基上培養(yǎng)溫度對密孔菌產(chǎn)酶活性的影響 (U·mg-1)

    結(jié)果顯示,培養(yǎng)溫度對密孔菌產(chǎn)酶酶活具有較大的影響.菌株在以不同農(nóng)業(yè)廢棄物為主料的培養(yǎng)基上所需的最適溫度也不同.在小麥秸稈培養(yǎng)基上,當培養(yǎng)溫度為35℃時,在培養(yǎng)的第4 d,酶活達到最大值65.07 U·mg-1.但隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加,酶活下降非常迅速.而當培養(yǎng)溫度為40℃時,在整個培養(yǎng)周期內(nèi),酶活均能穩(wěn)定維持在20 U·mg-1上下.在玉米秸稈培養(yǎng)基上,當培養(yǎng)溫度為40℃時,在培養(yǎng)的第12 d,菌株產(chǎn)酶酶活達到峰值34.80 U·mg-1,整個培養(yǎng)周期內(nèi),菌株都能維持較高的酶活.實驗中我們還發(fā)現(xiàn),40℃高溫條件下,菌絲體生長狀況欠佳,因此我們認為密孔菌產(chǎn)的漆酶在較高的溫度下活性會增強.在木屑培養(yǎng)基上,當培養(yǎng)溫度為25℃時,菌絲生長至12~14 d,酶活達到16~17 U·mg-1,且在此溫度下,菌絲生長茂密.在高于25℃溫度條件下,反應體系中的酶活最大值均出現(xiàn)提早,并且最大酶活較低.這可能因為木屑培養(yǎng)料透氣性和保水性都較差,較高溫度會導致濕度下降,不利于其發(fā)酵.相比于小麥秸稈和玉米秸稈培養(yǎng)基,木屑酶活最大值出現(xiàn)的時間較晚,這可能與木屑培養(yǎng)基營養(yǎng)成分與前兩者不同,菌株在其上生長較慢有關(guān).并且在40℃培養(yǎng)條件下,菌株在木屑培養(yǎng)基上產(chǎn)酶酶活低于小麥和玉米秸稈培養(yǎng)基,這可能與木屑保水性較差有關(guān).

    3 討論

    農(nóng)作物秸稈等廢棄物對密孔菌產(chǎn)漆酶具有良好的誘導效果,主要是因為半纖維素和木質(zhì)素結(jié)構(gòu)是白腐真菌的主要降解部位[25-26],密孔菌在以玉米秸稈為主料的培養(yǎng)基上產(chǎn)漆酶酶活高于以小麥秸稈和楊樹木屑為主料的培養(yǎng)基,可達40.92 U·mg-1.這是因為玉米秸稈、小麥秸稈以及楊樹木屑三者的組成成分、含量以及物理結(jié)構(gòu)不同,玉米、小麥秸稈和楊樹木屑中木質(zhì)素的含量分別為14.93%,20.51%和35%[27-28].隨著發(fā)酵周期的延長,漆酶活性逐漸下降,主要是因為菌絲生長活力下降和秸稈中的木質(zhì)素只能部分被降解的緣故[29].

    Cu2+的存在或濃度變化顯著影響密孔菌產(chǎn)漆酶的酶活.多數(shù)漆酶是含銅的蛋白,而漆酶基因轉(zhuǎn)錄合成時需要銅離子的調(diào)節(jié),因此在限銅或缺銅時,漆酶蛋白表達受限,所以活力較低[30].發(fā)酵料中的Cu2+濃度對密孔菌的漆酶活性的影響,隨著秸稈種類的不同而存在差異,具體的調(diào)節(jié)機理則需進一步的研究.

    pH值對密孔菌產(chǎn)漆酶有明顯影響,在中酸性環(huán)境中菌株產(chǎn)漆酶酶活較高.一般認為培養(yǎng)基中的氫離子和氫氧根離子對微生物的影響是間接的,首先作用于胞外可解離的弱酸或弱堿,形成易透過細胞膜的游離態(tài)進入胞內(nèi),再作用于參與代謝的各種酶類,從而影響菌體的生長和酶的合成[31].

    菌株在小麥秸稈和玉米秸稈培養(yǎng)基上發(fā)酵產(chǎn)酶的最適溫度較高,分別為35℃和40℃,且在整個發(fā)酵周期能維持較高較穩(wěn)定的酶活水平.運用本實驗菌株進行這兩類農(nóng)業(yè)廢棄物降解時,在保持較高濕度的同時,應適當增加堆料厚度,提高料內(nèi)溫度.

    對于不同的農(nóng)業(yè)廢棄物,菌株產(chǎn)酶的最適銅離子濃度、最適pH和最適培養(yǎng)溫度也是不同的,因此我們要因材制宜.密孔菌能利用農(nóng)業(yè)廢棄物發(fā)酵產(chǎn)漆酶,可以作為外源菌劑縮短秸稈還田周期,在農(nóng)業(yè)廢棄物資源利用方面具有廣闊的應用前景.此外,產(chǎn)生的漆酶具有降解DDT等多種污染物的能力,還可以起到環(huán)境保護和生態(tài)修復的作用.

    [1] Feng X Y,Chen H Y,Xue D S. Enhancement of Laccase Activity by Marine-derived Deuteromycete Pestalotiopsis sp. J63 with Agricultural Residues and Inducers[J]. Chinese Journal Chemical Engineering,2013,21(10): 1182-1189.

    [2] 王佳玲,余惠生,付時雨,等.白腐菌漆酶的研究進展[J].微生物學通報, 1998,25(4):233-236.

    [3] Ian D. Reid, Michael G. Paice. Biological bleaching of kraft pulps by white-rot fungi and their enzymes[J]. FEMS Microbiology Reviews. 1994, 13(2-3):369-375.

    [4] Angel T. Martinez, Susana Camarero, Francisco Guillen, et al.Progress in biopulping of non-woody materials: Chemical, enzymatic and ultrastructural aspects of wheat straw delignification with ligninolytic fungi from the genus Pleurotus[J]. FEMS Microbiology Reviews, 1994,13(2-3):265-273.

    [5] 許穎,蘭進.真菌漆酶研究進展[J]. 食用菌學報,2005,12(1):57-64.

    [6] 侯紅漫,周集體,陳麗.白腐菌漆酶特性及異生芳香化合物的降解[J].林產(chǎn)化學與工業(yè),2003,23(1):89-94.

    [7] 吳香波,謝益民,馮曉靜.白腐菌漆酶催化聚合造紙廢水中木素的研究[J].環(huán)境科學與技術(shù), 2010, 33(1):23-26.

    [8] 左瑩,馬惠玲,羅耀紅,等.栓菌屬漆酶催化兒茶素和綠原酸生物轉(zhuǎn)化的動力學研究[J].食品研究與開發(fā), 2008,29(5):39-43.

    [9] 賴超鳳,李 爽,彭麗麗,等.漆酶及其在有機合成中應用的研究進展[J].化工進展,2010,29(7):1300-1308.

    [10] Melissa R D, Carolina O N, Raul G M, et al. Biotransformation kinetics of pharmaceutical and industrial micropollutants in groundwaters by a laccase cocktail from Pycnoporus sanguineus CS43 fungi[J]. International Biodeterioration & Biodegradation,2016,108:34-41.

    [11] Federica Spina, Chiara Cordero, Tiziana Schiliro, et al. Removal of micropollutants by fungal laccases in model solution and municipal wastewater: evaluation of estrogenic activity and ecotoxicity[J]. Journal of Cleaner Production,2015,100:185-194.

    [12] 李丹,張波,李玉.高產(chǎn)漆酶菌株的篩選及其對秸稈降解初探[J].吉林農(nóng)業(yè)科學,2013,38(6):90-94.

    [13] Zhao Y C,Yi X Y,Li M H,et al. Biodegradation Kinetics of DDT in Soil under Different Environmental Conditions by Laccase Extract from White Rot Fungi[J].Chinese Journal of Chemical Engineering, 2010,18(3) 486-492.

    [14] 科學技術(shù)部,農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)廢棄物(秸稈、糞便)綜合利用技術(shù)成果匯編[R/OL].(2015-10-09)[2016-11-15].http://www.most.gov.cn/tztg/201510/t20151020_122045.htm

    [15] Moldes D,Lorenzo M,Sanroman M A, Different proportions of laccase isoenzymes produced by submerged cultures of Trametes versicolor grown on lignocellulosic wastes[J].Biotechnology Letters,2004,26(4):327-330.

    [16] 李合生.現(xiàn)代植物生理生化實驗原理和技術(shù)[M].北京:高等教育出版社, 2000:184-185.

    [17] 趙蒙蒙,姜曼,周祚萬.幾種農(nóng)作物秸稈的成分分析[J].材料導報,2011,25(16):122-125.

    [18] Nina H,Laura-Leena K,Kris tina K,et al.Crystal structure of a laccase from Melanocarpus albonyces with an intact trinuclear copper site[J].Nature Structural Biology,2002,9(8):601-605.

    [19] Galhaup C,Haltrich D.Enhanced formation of laccase activity by the white-rot fungus Trametes pubescens in the presence of copper[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2001, 56(1-2): 225-232.

    [20] 史伯安,雷福厚,但悠夢,等.酸度對漆樹酶活性的影響[J].中國生漆, 1996(1):8-11.

    [21] 黃慧艷,張曉昱.漆酶測定過程中緩沖體系的影響研究[J].工業(yè)微生物, 2005,35(4):29-32.

    [22] Thurston C F. The structure and function of fungal laccases[J]. Microbiology, 1994, 140(1): 19-26.

    [23] 尹艷麗,張曉昱,王宏勛,等.不同搖瓶條件對側(cè)耳菌生長及漆酶分泌的影響[J].生物技術(shù),2004,14(5):72-76.

    [24] 王廣慧,戴明,魏雅冬.真菌液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)漆酶的培養(yǎng)條件優(yōu)化研究進展[J].造紙科學與技術(shù),2011,30(6):92-97.

    [25] Sharma R K,Arora D S. Changes in biochemical constituents of paddy straw during degradation by white rot fungi and its impact on in vitro digestibility[J]. Appli Microbiol, 2010, 109(2): 679-686.

    [26] Martinez A T,Speranza M,Francisco J R, et al. Biodegradation of lignocellulosics: microbial, chemical, and enzymatic aspects of the fungal attack of lignin.Int Microbiol Off J Span Soc Microbiol[J]. International Microbiology, 2005, 8(3): 195-204.

    [27] 范樹國,周麗娟,邱璐.硫酸法測定4種常見農(nóng)作物秸稈的木質(zhì)素含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學,2010(5):395-398.

    [28] 鞠洪波,郎子健.食用菌對山楊木質(zhì)素及纖維素的降解[J].東北林業(yè)大學學報, 2007,35(12):41-42.

    [29] 陳合,張強.菌酶共降解玉米秸稈的工藝研究[J].農(nóng)業(yè)工程學報,2008,24(3):270-273.

    [30] Collins P J,Dobson A. Regulation of laccase gene transcription in Trametes versicolor[J].Applied and Environmental Microbiology,1997,63(9):3444-3450.

    [31] 司靜,崔寶凱,戴玉成.栓孔菌屬漆酶高產(chǎn)菌株的初步篩選及其產(chǎn)酶條件的優(yōu)化[J].微生物學通報,2011,38(3):405-416.

    [責任編輯:蔣海龍]

    Research on Laccase Production by Pycnoporus in Solid-Stage Fermentation using Agricultural Residues

    LI Xiu-nan1, NIU Zi-qi1, HU Wei-cheng1,2,3, WANG Xin-feng1,2,4

    (1.College of Life Sciences, Huaiyin Normal University, Huaian Jiangsu 223300, China) (2.Huaian Key Laboratory of Food Components and Functional Foods, Huaian Jiangsu 223300, China) (3.Jiangsu Collaborative Innovation Center of Regional Modern Agriculture & Environmental protection, Huaian Jiangsu 223300, China) (4.Jiangsu Key Laboratory for Biomass-based Energy and Enzyme Technology, Huaian Jiangsu 223300, China)

    The aim of this study is to investigate laccase production by Pycnoporus in solid-stage fermentation using different agricultural residues, such as corn stalk, wheat straw and poplar sawdust. The results reveled that agricultural residues can induce Pycnoporus to produce laccase and corn stalk showed the highest effect with production of 40.92 Umg-1. Moreover, the concentration of Cu2+has a significant effect on laccase production and the production could reach 41.24Umg protein-1 and 57.13Umg-1using wheat straw and poplar sawdust as medium with 0.02% Cu2+; the production of laccase could reach 94.92 U·mg-1using corn stalk as medium with 0.04% Cu2+. Lassase production was affected by pH obviously and the activity of laccase was higher in neutral and acid environment. The optimum temperature for Pycnoporus to produce laccase in wheat straw medium and corn stalk medium was 35°C and 40°C, respectively. Moreover, laccase activity could maintain a high and stable level during the whole fermentation period. The results from this study indicate that Pycnoporus has a high efficacy in producing laccase and degrading crop straw, which can be used in the treatment of crop straw.

    pycnoporus; solid state fermentation; agricultural wastes; laccase

    2017-03-28

    江蘇省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201510323013Z); 江蘇高校品牌專業(yè)建設工程資助項目(PPZY2015A018); 江蘇省農(nóng)業(yè)自主創(chuàng)新基金項目(CX(13)3026)

    王新風(1964-),男,江蘇漣水人,教授,主要從事微生物及食用菌等研究. E-mail: wangxf@hytc.edu.cn

    S147.4

    A

    1671-6876(2017)02-0147-07

    猜你喜歡
    孔菌木屑廢棄物
    木屑和鐵屑的分離實驗
    復方樺褐孔菌咀嚼片的制備及對高血脂癥小鼠降血脂作用
    制造了全世界三分之一廢棄物的產(chǎn)業(yè)
    英語文摘(2022年6期)2022-07-23 05:46:26
    樺褐孔菌的研究現(xiàn)狀及應用前景*
    新型醫(yī)療廢棄物焚化艙
    電子廢棄物
    世界博覽(2020年19期)2020-10-30 10:02:46
    木屑
    飛天(2020年4期)2020-04-17 14:48:24
    “廢棄物”中有孩子的快樂
    油頁巖與木屑混合熱解特性研究
    擬黃薄孔菌菌絲體的固體培養(yǎng)條件及CAT和SOD活力動態(tài)研究
    一本久久精品| 丰满少妇做爰视频| 下体分泌物呈黄色| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产不卡av网站在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 两性夫妻黄色片| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 久久久精品免费免费高清| 看免费成人av毛片| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久av网站| 成年女人毛片免费观看观看9 | 少妇人妻久久综合中文| 日韩av不卡免费在线播放| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| av有码第一页| 久久精品国产亚洲av涩爱| 蜜桃在线观看..| 97精品久久久久久久久久精品| 在现免费观看毛片| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 搡老岳熟女国产| 国产精品九九99| 国产高清不卡午夜福利| 婷婷色综合大香蕉| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲熟女毛片儿| 国产xxxxx性猛交| 国产精品.久久久| 1024视频免费在线观看| 多毛熟女@视频| 一个人免费看片子| 91字幕亚洲| av视频免费观看在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 国产成人精品在线电影| av网站免费在线观看视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 后天国语完整版免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 青春草视频在线免费观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲av日韩在线播放| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 精品国产国语对白av| 亚洲一区中文字幕在线| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产av国产精品国产| a 毛片基地| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品一区二区精品视频观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线观看www视频免费| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美在线一区亚洲| www.精华液| 国产精品久久久久成人av| 午夜福利影视在线免费观看| av在线老鸭窝| 人体艺术视频欧美日本| e午夜精品久久久久久久| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品久久久久久精品古装| 午夜免费成人在线视频| 国产精品一区二区在线观看99| 满18在线观看网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 丝袜美足系列| 新久久久久国产一级毛片| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲黑人精品在线| 首页视频小说图片口味搜索 | 久久久欧美国产精品| 久久人妻熟女aⅴ| 99热网站在线观看| 精品高清国产在线一区| 久久人人爽人人片av| 国产主播在线观看一区二区 | 精品第一国产精品| 久久久久久免费高清国产稀缺| 1024香蕉在线观看| 青草久久国产| 亚洲情色 制服丝袜| a级毛片黄视频| av不卡在线播放| 在线看a的网站| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 人成视频在线观看免费观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 久久亚洲精品不卡| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲熟女精品中文字幕| 精品久久蜜臀av无| 中文字幕色久视频| 色视频在线一区二区三区| 91九色精品人成在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲专区中文字幕在线| 美女中出高潮动态图| 考比视频在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲人成77777在线视频| 国产福利在线免费观看视频| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲人成电影免费在线| 国产97色在线日韩免费| 亚洲欧洲日产国产| 好男人视频免费观看在线| 亚洲av片天天在线观看| 日韩一区二区三区影片| 在线观看人妻少妇| 国产欧美日韩精品亚洲av| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲精品一二三| 国产三级黄色录像| 这个男人来自地球电影免费观看| 制服人妻中文乱码| 日本av免费视频播放| √禁漫天堂资源中文www| 热99国产精品久久久久久7| 99久久人妻综合| 老司机影院毛片| 日韩大码丰满熟妇| 国产成人啪精品午夜网站| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美成人午夜精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美精品一区二区大全| 国产97色在线日韩免费| 男男h啪啪无遮挡| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久女婷五月综合色啪小说| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲精品在线美女| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产精品一区二区在线观看99| 久久这里只有精品19| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产成人精品久久二区二区免费| 自线自在国产av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品免费久久久久久久清纯 | 日本av手机在线免费观看| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品一二三| 18在线观看网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 色播在线永久视频| 蜜桃国产av成人99| 国产成人系列免费观看| 在线天堂中文资源库| 一区二区三区精品91| xxx大片免费视频| 国产99久久九九免费精品| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | av不卡在线播放| 美女视频免费永久观看网站| 精品一区二区三卡| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久精品国产亚洲av高清一级| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 超碰97精品在线观看| 大陆偷拍与自拍| 男女边吃奶边做爰视频| videos熟女内射| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 最近最新中文字幕大全免费视频 | 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久久国产一区二区| 性色av一级| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品欧美亚洲77777| 国产高清视频在线播放一区 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 美国免费a级毛片| 三上悠亚av全集在线观看| 99国产综合亚洲精品| 国产激情久久老熟女| 激情视频va一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 黑人猛操日本美女一级片| 成年av动漫网址| 国产精品 国内视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 搡老岳熟女国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区国产| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久ye,这里只有精品| 午夜免费成人在线视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产在线免费精品| 国产一区二区 视频在线| 一个人免费看片子| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品99久久99久久久不卡| 岛国毛片在线播放| 久久影院123| 男女午夜视频在线观看| 观看av在线不卡| 久久久久网色| 性高湖久久久久久久久免费观看| 9色porny在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 黄色片一级片一级黄色片| 九色亚洲精品在线播放| 99精国产麻豆久久婷婷| 中文字幕av电影在线播放| 国产高清视频在线播放一区 | 国产黄频视频在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 成人国产av品久久久| 久久久精品免费免费高清| 日本a在线网址| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 午夜91福利影院| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲国产av影院在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品福利观看| 男人添女人高潮全过程视频| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲综合色网址| www日本在线高清视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 高清av免费在线| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 美女国产高潮福利片在线看| 免费观看av网站的网址| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产在线免费精品| xxxhd国产人妻xxx| 尾随美女入室| 伦理电影免费视频| 国产精品久久久av美女十八| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一级黄片播放器| 久久久国产精品麻豆| 欧美大码av| 国产日韩欧美在线精品| 成人国产av品久久久| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品一区二区三卡| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 蜜桃国产av成人99| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 9热在线视频观看99| 视频区欧美日本亚洲| 多毛熟女@视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 午夜福利在线免费观看网站| 日本av手机在线免费观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 欧美性长视频在线观看| 亚洲成人国产一区在线观看 | 午夜福利,免费看| 91麻豆av在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 成人国语在线视频| 精品亚洲成国产av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产爽快片一区二区三区| 成人手机av| 老司机影院成人| 天天添夜夜摸| 亚洲国产最新在线播放| 视频区欧美日本亚洲| 黄色怎么调成土黄色| 蜜桃在线观看..| 日韩av免费高清视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 日韩制服骚丝袜av| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 少妇人妻 视频| 悠悠久久av| 麻豆av在线久日| 女性被躁到高潮视频| 最近中文字幕2019免费版| 久久青草综合色| 日韩电影二区| 午夜激情久久久久久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜两性在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| 国产片特级美女逼逼视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 无限看片的www在线观看| 午夜福利免费观看在线| 精品高清国产在线一区| 久久女婷五月综合色啪小说| av国产久精品久网站免费入址| 黄色视频不卡| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲,欧美精品.| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 成人午夜精彩视频在线观看| 伦理电影免费视频| 国产又色又爽无遮挡免| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产日韩欧美在线精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲av男天堂| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 两人在一起打扑克的视频| 久久久久久久国产电影| 操出白浆在线播放| av线在线观看网站| 七月丁香在线播放| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产野战对白在线观看| 操美女的视频在线观看| 精品人妻1区二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 精品人妻1区二区| 亚洲国产av影院在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲成色77777| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 看免费成人av毛片| 美女福利国产在线| 亚洲成色77777| 久久精品久久精品一区二区三区| 岛国毛片在线播放| 91精品国产国语对白视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 97在线人人人人妻| 操美女的视频在线观看| 中文字幕制服av| 久久精品成人免费网站| 久久人人爽人人片av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 超碰97精品在线观看| 国产黄频视频在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 成人免费观看视频高清| 亚洲av片天天在线观看| 免费观看av网站的网址| 手机成人av网站| 美女大奶头黄色视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲熟女毛片儿| 在线观看免费日韩欧美大片| 丝袜在线中文字幕| 99热国产这里只有精品6| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲精品国产av蜜桃| bbb黄色大片| 乱人伦中国视频| 亚洲免费av在线视频| 亚洲成人免费av在线播放| 国产成人91sexporn| 精品人妻一区二区三区麻豆| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 2018国产大陆天天弄谢| 1024香蕉在线观看| av国产精品久久久久影院| 久久鲁丝午夜福利片| av在线播放精品| 色94色欧美一区二区| 一级毛片我不卡| 精品免费久久久久久久清纯 | 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产一区二区激情短视频 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| av国产精品久久久久影院| 男女无遮挡免费网站观看| 国产麻豆69| 热re99久久精品国产66热6| 大话2 男鬼变身卡| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产一卡二卡三卡精品| av网站在线播放免费| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产色视频综合| 欧美精品亚洲一区二区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产成人免费观看mmmm| 纯流量卡能插随身wifi吗| 人成视频在线观看免费观看| 99国产精品99久久久久| 亚洲第一青青草原| 午夜久久久在线观看| videos熟女内射| 又大又黄又爽视频免费| 国产亚洲av高清不卡| 婷婷色麻豆天堂久久| 婷婷成人精品国产| 最黄视频免费看| 男人舔女人的私密视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产高清视频在线播放一区 | 欧美久久黑人一区二区| 国产一区二区激情短视频 | 男女无遮挡免费网站观看| 人人妻人人澡人人看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久狼人影院| 9色porny在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产高清视频在线播放一区 | 日韩人妻精品一区2区三区| av国产久精品久网站免费入址| 国产精品九九99| 亚洲情色 制服丝袜| 少妇被粗大的猛进出69影院| 中文字幕色久视频| 亚洲成人免费av在线播放| 精品久久久久久电影网| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产色视频综合| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲免费av在线视频| 午夜免费观看性视频| 亚洲情色 制服丝袜| 色94色欧美一区二区| www日本在线高清视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 成人三级做爰电影| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 美女大奶头黄色视频| 欧美日韩黄片免| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久精品免费免费高清| 一级毛片女人18水好多 | 亚洲精品第二区| 欧美日韩一级在线毛片| 搡老岳熟女国产| 中国国产av一级| 九草在线视频观看| 五月天丁香电影| 中文欧美无线码| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| svipshipincom国产片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| netflix在线观看网站| 男的添女的下面高潮视频| 美女视频免费永久观看网站| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美精品一区二区大全| 国产高清视频在线播放一区 | 美国免费a级毛片| 国产福利在线免费观看视频| 手机成人av网站| 电影成人av| 精品福利观看| 天天操日日干夜夜撸| 一本久久精品| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产一区亚洲一区在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av视频免费观看在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲精品久久午夜乱码| h视频一区二区三区| 午夜老司机福利片| 中文字幕亚洲精品专区| 精品国产乱码久久久久久小说| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲人成电影观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 秋霞在线观看毛片| 亚洲人成电影观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品久久久久久精品古装| 久久性视频一级片| 亚洲精品国产区一区二| 久9热在线精品视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 99香蕉大伊视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产国语露脸激情在线看| 精品人妻1区二区| 少妇的丰满在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| av一本久久久久| 蜜桃在线观看..| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 蜜桃在线观看..| 色视频在线一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看| 操出白浆在线播放| 在线观看免费高清a一片| 丁香六月天网| 黄色片一级片一级黄色片| 老汉色∧v一级毛片| 制服诱惑二区| 老司机靠b影院| 欧美日韩福利视频一区二区| 男人舔女人的私密视频| 女人精品久久久久毛片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久久国产一区二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 老司机亚洲免费影院| 美女高潮到喷水免费观看| 热re99久久国产66热| 国产精品一区二区在线观看99| 国产99久久九九免费精品| www.av在线官网国产| 亚洲,一卡二卡三卡| 99精国产麻豆久久婷婷| 老司机影院成人| 国产又爽黄色视频| 好男人视频免费观看在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久国产精品人妻蜜桃| 波野结衣二区三区在线| av不卡在线播放| 国产成人影院久久av| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产极品粉嫩免费观看在线| 十八禁高潮呻吟视频| 高清av免费在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| av电影中文网址| 婷婷色麻豆天堂久久| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲成人国产一区在线观看 | 日本欧美视频一区| 亚洲欧洲日产国产| 国产不卡av网站在线观看| 精品第一国产精品| 成人亚洲精品一区在线观看| 女性被躁到高潮视频| 日韩大码丰满熟妇| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 黄色怎么调成土黄色| 午夜福利在线免费观看网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产熟女午夜一区二区三区| av在线老鸭窝| 久久久久精品国产欧美久久久 | 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美日韩一级在线毛片| 在线观看人妻少妇| 国产激情久久老熟女| 久久亚洲国产成人精品v| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 男女国产视频网站| 人妻 亚洲 视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产三级黄色录像| 老司机亚洲免费影院| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产高清视频在线播放一区 | 青草久久国产|