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    春蘭“龍字”的離體快繁技術(shù)研究

    2017-07-03 01:21:56馮兆光李小東
    山東林業(yè)科技 2017年2期
    關(guān)鍵詞:褐化春蘭生根

    馮兆光,李小東,徐 兵

    (青州市花卉高科技博覽園管理委員會(huì),山東 青州 262500)

    春蘭(Cymbidium goeringii)是國(guó)蘭種類(lèi)最豐富多彩的一個(gè)種,也是栽培過(guò)程中繁殖最困難的一個(gè)種之一,其香味最佳,但繁殖系數(shù)很低,最多1年2~3倍,通過(guò)組織培養(yǎng)方法能快速滿足生產(chǎn)需要,在短時(shí)間內(nèi)提供大量種苗。目前蘭花組織培養(yǎng)在如大花蕙蘭、蝴蝶蘭、雜交蘭等工廠化生產(chǎn)技術(shù)已經(jīng)非常成熟,但國(guó)蘭由于價(jià)格昂貴、易褐化、再生過(guò)程難度高,難以實(shí)現(xiàn)工廠化快繁[1]。本研究以春蘭荷型水仙的典型代表“龍字”為研究材料,研究國(guó)蘭通過(guò)組織培養(yǎng)獲得再生苗的方法,以期為實(shí)現(xiàn)國(guó)蘭的工廠化生產(chǎn)提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 取材及消毒

    供試材料為春蘭“龍字”的側(cè)芽,取材前先室內(nèi)養(yǎng)護(hù)3~4個(gè)月,澆水時(shí)避免澆到新芽上。待芽長(zhǎng)到3~4 cm時(shí)取下,用洗衣粉水輕輕洗凈表面,在超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%酒精浸泡30 s,再用0.1%的升汞浸泡8~10 min,然后用無(wú)菌水洗5次,每次5 min,剝掉外層葉片后,接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。

    1.2 供試培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

    (1)誘導(dǎo)培養(yǎng)基:

    1#MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+AC0.2g/L;

    2#MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

    (2)龍根增殖培養(yǎng)基:

    3#MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L;

    4#1/2 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L;

    5#MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L;

    6#1/2 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

    (3)芽分化培養(yǎng)基:

    分化培養(yǎng)基篩選采用3因素4水平的L16(43)正交設(shè)計(jì)(表1),每個(gè)處理接種4瓶,每瓶接種10塊龍根,重復(fù)3次。

    表1 供試因素及水平

    (4)生根培養(yǎng)基:

    23#1/2 MS+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L;24#1/2MS+NA A0.5mg/L+AC1g/L+香蕉泥 50g/L;25#B5+BA 2 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1 g/L+香蕉泥50 g/L。

    上述培養(yǎng)基pH 5.8,瓊脂6 g/L,蔗糖30 g/L,于121℃殺菌 20 min。

    (5)培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度 26±1℃,光照 14 h/d,光源由LED燈提供,光照強(qiáng)度1500 Lx。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 龍根誘導(dǎo)培養(yǎng)

    誘導(dǎo)培養(yǎng)20 d后,部分芽體仍無(wú)生長(zhǎng)痕跡,一段時(shí)間后逐漸褐化死亡,30 d后少數(shù)芽體逐漸變綠頂端或周?chē)饾u生長(zhǎng)出較細(xì)的龍根,說(shuō)明誘導(dǎo)成功。誘導(dǎo)培養(yǎng)基中需添加少許活性炭能有效防止褐化,添加BA和NAA激素濃度越高龍根生長(zhǎng)量越多。誘導(dǎo)率最高的培養(yǎng)基是2#MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L,產(chǎn)生龍根多,生長(zhǎng)快(表2)。

    表2 叢生芽誘導(dǎo)結(jié)果

    2.2 龍根增殖培養(yǎng)

    表3 芽增殖培養(yǎng)結(jié)果

    將誘導(dǎo)獲得的根狀莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基,60 d轉(zhuǎn)接一次,最高增殖倍數(shù)為6倍。無(wú)機(jī)鹽含量的增加和激素濃度的增加均能提高龍根增殖倍數(shù),提高BA濃度能使龍根分叉較多從而提高增殖倍數(shù),提高NAA濃度能使龍根伸長(zhǎng)、變粗,BA/NAA比值較小的情況下龍根細(xì)長(zhǎng),所生長(zhǎng)的芽不壯,對(duì)比之下最適宜龍根增殖的培養(yǎng)基為4#1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L(表3)。

    2.3 龍根分化研究

    選取2~3 cm粗壯的龍根,接種到分化培養(yǎng)基中,每瓶接種10塊龍根。暗培養(yǎng)7 d后,正常光照培養(yǎng)。正常情況20 d后形成粗壯的芽點(diǎn),40 d左右形成芽,120 d左右芽苗可生長(zhǎng)到5 cm以上,BA/NAA比例越大分化越快,單用BA或NAA時(shí)分化較慢,分化芽數(shù)量少,添加AC可減輕褐化,但會(huì)降低芽苗分化率,并且苗瘦弱。綜合考慮芽誘導(dǎo)率和苗生長(zhǎng)情況確定18#培養(yǎng)基最佳即MS(NH4NO3 0.4 g/L)+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,龍根幾乎不增殖,苗壯,直立生長(zhǎng)(表4)。

    2.4 生根培養(yǎng)

    選取5 cm以上小苗接種到生根培養(yǎng)基中,20 d后開(kāi)始生根,24#培養(yǎng)基生根最快,但30 d后23#、24#培養(yǎng)基中部分小苗停止生長(zhǎng),從頂端或根部生長(zhǎng)龍根。60 d后生根率最高的是25#培養(yǎng)基,生長(zhǎng)側(cè)芽,不存在龍根生長(zhǎng)現(xiàn)象。經(jīng)篩選最佳生根培養(yǎng)基為25#B5+BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1.0 g/L+香蕉泥50 g/L。

    表4 芽分化培養(yǎng)結(jié)果

    表5 生根培養(yǎng)結(jié)果

    2.5 組培苗移栽

    組培苗生長(zhǎng)到90 d以上、苗高10 cm以上時(shí)及時(shí)練苗,在散射光下培養(yǎng)20 d左右后,此時(shí)可開(kāi)蓋移栽。洗凈根部殘留的培養(yǎng)基,用濕潤(rùn)的苔蘚包裹移栽到穴盤(pán)中。把握好干透澆透的澆水原則,20 d內(nèi)光照控制在5000 lx以下,成活率90%以上。

    3 討論

    近年來(lái),春蘭由于花香、清雅、價(jià)格合適,比較受消費(fèi)者歡迎,國(guó)蘭組培成為花卉種苗公司的發(fā)展目標(biāo)[2],尤其是具有代表性的春蘭品種:龍字、大富貴、綠云、宋梅等頗受歡迎。由于春蘭組培過(guò)程中易褐化、再生難度大,因此盡快獲得成熟的組培技術(shù)成為研究重點(diǎn)。大量生產(chǎn)中可以借鑒洋蘭組培技術(shù)添加防褐化的VC、pvp等抗氧化劑,添加有機(jī)物質(zhì)如蘋(píng)果汁、椰汁中增加分化出芽率[3]。

    與其他研究者使用的生根培養(yǎng)基不同,本研究使用BA與NAA混合,達(dá)到了使苗側(cè)芽生長(zhǎng)同時(shí)生根的雙重目的。

    [1]李洪林,楊波.春蘭根狀莖離體培養(yǎng)與快速繁殖(簡(jiǎn)報(bào)).亞熱帶植物科學(xué)[J],2012,41(4):67-68.

    [2]牛田,張林,王厚新等.春蘭‘金荷鼎’雜交后代離體快繁的研究.農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)[J],2013(3):44-46.

    [3]孫芳,李承秀,張林等.春蘭名品雜交后代快繁與分化研究.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)[J],2012,28(10):189-193.

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