地塞米松預(yù)防兔移植靜脈再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究

凌林 胡名松

421001南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院(湖南衡陽)

地塞米松預(yù)防兔移植靜脈再狹窄的實(shí)驗(yàn)研究

凌林 胡名松

421001南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院(湖南衡陽)

目的：觀察局部應(yīng)用地塞米松對(duì)新西蘭兔自體移植靜脈再狹窄的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。方法：新西蘭兔30只，建立兔自體頸外靜脈-頸總動(dòng)脈移植模型，隨機(jī)分3組：空白對(duì)照組、生物蛋白膠組和地塞米松組。各組動(dòng)物分別于術(shù)后3周測(cè)量?jī)?nèi)膜、中膜厚度及管壁炎性細(xì)胞數(shù)、周期蛋白(PCNA)陽性細(xì)胞率和凋亡細(xì)胞陽性率。結(jié)果：術(shù)后3周，地塞米松組較生物蛋白膠組、空白對(duì)照組均明顯降低內(nèi)膜、中膜增生厚度，炎性細(xì)胞數(shù)減少；生物蛋白膠組較空白對(duì)照組也可抑制內(nèi)膜、中膜厚度增生，3組數(shù)據(jù)PCNA陽性細(xì)胞率、凋亡細(xì)胞陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：地塞米松在新西蘭兔自體靜脈移植中能通過抑制局部炎性反應(yīng)，抑制平滑肌細(xì)胞增殖、促使血管平滑肌細(xì)胞凋亡，從而防止移植靜脈再狹窄。

地塞米松；生物蛋白膠；再狹窄；增殖；凋亡

冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)(CABG)能迅速改善缺血癥狀，具有良好的手術(shù)效果。但術(shù)后第1年即有12%～20%的移植血管發(fā)生阻塞，此后每年再有約4%出現(xiàn)阻塞[1]，如何抑制移植血管內(nèi)膜、中膜增生成為提高CABG遠(yuǎn)期療效的關(guān)鍵。

資料與方法

試驗(yàn)材料：清潔級(jí)新西蘭大白兔30只，雌雄不限，兔齡12個(gè)月，體重2.1～2.4 kg，由南華大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

試驗(yàn)方法：①建立模型：新西蘭大白兔30只，隨機(jī)分3組，3組均建立大鼠自體頸外靜脈-頸內(nèi)動(dòng)脈移植模型，即切取頸外靜脈2 cm與離斷的頸內(nèi)動(dòng)脈行端端間斷吻合術(shù)，生物蛋白膠組及地塞米松組建立移植模型后移植靜脈段分別用生物蛋白膠0.2 mL均勻包繞和混有地塞米松磷酸鈉注射液的生物蛋白膠0.2 mL。②試驗(yàn)數(shù)據(jù)：各組動(dòng)物分別于術(shù)后第3周取移植靜脈標(biāo)本，標(biāo)本病理切片行HE染色測(cè)量?jī)?nèi)膜、中膜厚度及管壁炎性細(xì)胞數(shù)，免疫組化檢測(cè)PCNA陽性細(xì)胞率、TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞陽性率。

結(jié) 果

地塞米松組與蛋白膠組、空白對(duì)照組比較，內(nèi)膜、中膜、炎性細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；蛋白膠組與空白對(duì)照組內(nèi)膜、中膜差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但兩者之間的炎性細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

增殖的平滑肌細(xì)胞核為呈棕黃色顆粒，凋亡的平滑肌細(xì)胞TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒染色后細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中有紫黑色顆粒者為陽性細(xì)胞，分別在400倍高倍鏡下計(jì)算陽性細(xì)胞總數(shù)，計(jì)算其陽性細(xì)胞百分比，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

討 論

CABG術(shù)后發(fā)生再狹窄是多途徑、多因素、多基因參與的復(fù)雜病理過程，具體發(fā)生機(jī)制目前仍不完全明確。目前多數(shù)研究認(rèn)為炎性反應(yīng)后平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡失衡引起內(nèi)膜增生是內(nèi)膜增生的重要機(jī)制[2]。從本實(shí)驗(yàn)來看，TUNEL法檢測(cè)凋亡陽性細(xì)胞及PCNA陽性細(xì)胞在內(nèi)膜中均有表達(dá)，且前者陽性比率明顯高于后者，這表明血管平滑肌細(xì)胞的增殖和凋亡同時(shí)參加了靜脈移植術(shù)后血管重構(gòu)過程，并且說明增殖增加而凋亡不足導(dǎo)致靜脈移植物中膜、內(nèi)膜增厚從而引起移植血管再狹窄。

表1 各組內(nèi)膜、中膜、炎性細(xì)胞數(shù)測(cè)量的結(jié)果(±s)

表1 各組內(nèi)膜、中膜、炎性細(xì)胞數(shù)測(cè)量的結(jié)果(±s)

注：與對(duì)照組比較，?P＜0.05；與生物蛋白膠組比較，△P＜0.05。

組別 內(nèi)膜厚度(μm) 中膜厚度(μm) 炎性細(xì)胞數(shù)(個(gè)/視野)空白對(duì)照組 48.62±2.90 120.23±1.60 5.27±2.04生物蛋白膠組 38.85±2.94? 116.39±1.35? 6.23±2.13地塞米松組 22.02±3.02?△ 111.78±1.77?△ 2.29±0.77?△

表2 各組增殖指數(shù)、凋亡指數(shù)結(jié)果(±s，%)

表2 各組增殖指數(shù)、凋亡指數(shù)結(jié)果(±s，%)

注：與對(duì)照組比較，?P＜0.05；與生物蛋白膠組比較，△P＜0.05。

組別 增殖指數(shù) 凋亡指數(shù)空白對(duì)照組 41.37±2.41 15.33±1.56生物蛋白膠組 39.14±1.74? 18.83±0.74?地塞米松組 24.91±1.51?△ 20.68±1.45?△

目前對(duì)于移植血管再狹窄的防治方法主要有機(jī)械治療與藥物治療；前者主要通過外周支持從而減少移植靜脈管壁增生[3]，目前生物可吸收材料外支架引起越來越多學(xué)者的重視，且研究結(jié)果令人滿意。本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用生物蛋白膠作為一種生物可吸收材料外支架，對(duì)移植血管外周支持作用，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明其可明顯減輕移植血管內(nèi)膜、中膜增厚(P＜0.05)。至于藥物治療方面，有研究表明抗血小板藥物、降血脂藥物均能降低術(shù)后死亡率，減少心肌梗死、卒中、腸系膜動(dòng)脈栓塞和腎功能衰竭發(fā)生率，并且明顯減輕移植靜脈橋內(nèi)膜增生程度，降低二次手術(shù)率。也有學(xué)者認(rèn)為紫杉醇及雷帕霉素具有抑制血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖作用，從而防止移植靜脈再狹窄發(fā)生。甚至有研究將內(nèi)皮一氧化氮合酶導(dǎo)入人大隱靜脈細(xì)胞內(nèi)，使內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)一氧化氮的合成顯著增加，達(dá)到預(yù)防移植靜脈再狹窄的目的；目前基因治療也已經(jīng)在很多領(lǐng)域開展了大量研究，并且在CABG再狹窄防治的實(shí)驗(yàn)研究中，許多外源性基因也被成功地轉(zhuǎn)入損傷的血管。研究表明地塞米松能顯著抑制活化巨噬細(xì)胞，從而減少原代培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(VSMCs)增殖，為CABG術(shù)后血管壁局部炎性反應(yīng)可促進(jìn)新生內(nèi)膜中VSMCs的增殖提供了直接、客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)通過在移植血管周圍使用地塞米松，可觀察到地塞米松組較對(duì)照組可明顯減少血管壁炎性細(xì)胞數(shù)、引起VSMCs增殖減少并且凋亡增多、抑制移植血管內(nèi)膜、中膜增厚(P＜0.05)，從而保護(hù)血管內(nèi)皮完整，減輕移植靜脈的狹窄程度，其作用機(jī)制可能與減輕炎性反應(yīng)，抑制VSMCs的過度增殖并促進(jìn)凋亡，保護(hù)移植血管內(nèi)膜有關(guān)。

近年來，人們逐漸認(rèn)識(shí)到炎癥反應(yīng)在再狹窄形成中的作用，并已深入到再狹窄分子生物學(xué)機(jī)制這一領(lǐng)域的研究，并且多基因聯(lián)合治療、物理方法和藥物治療等多途徑、立體化治療手段也將是預(yù)防移植血管再狹窄的發(fā)展方向。

[1]劉巍,周玉杰,劉宇揚(yáng),等.靜脈橋病變的介入治療及臨床預(yù)后觀察[J].心肺血管病雜志,2013,32(3)：247-250.

[2]Lugano R,Pena E,Casani L,et al.UPA promotes lipid-loaded vascular smooth muscle cell migration through LRP-1[J].CardiovascRes,2013,100(2)：262-271.

[3]Hussain ST,Smedira NG,Roselli EE.Use of polytetrafluoroethylene graft to prevent recurrence of saphenous vein graft aneurysm after coronary artery bypass surgery[J].Thoracic Cardiovas Sur,2013,145(6)：1674-1675.

Experimental study of dexamethasone on prevention of restenosis in rabbit vein grafts

Ling Lin,Hu Mingsong
The Second Hospital Affiliated to Nanhua University(Hengyang City,Hunan Province)421001

Objective：To observe the effect of dexamethasone on the restenosis of autologous vein graft in New Zealand rabbits,and to explore its possible mechanism.Methods：30 New Zealand rabbits were selected.A rabbit model of autogenous external jugular vein graft was established.They were randomly divided into the 3 groups：the blank control group,the fibrin glue group,and the dexamethasone group.The intima media thickness,the number of inflammatory cells,the number of circulating cells(PCNA)and the positive rate of apoptotic cells were measured at 3 weeks postoperatively of all animals.Results：At 3 weeks after operation,the thickness of intima and media was significantly lower in the dexamethasone group than that in the fibrin glue group and the control group,and the number of inflammatory cells decreased.Compared with the blank control group,the fibrin glue group inhibited the proliferation of intima and media thickness,and the positive rate of PCNA positive cells and apoptotic cells were significantly different among the 3 groups,with statistically significant(P＜0.05).Conclusion：Dexamethasone can inhibit local inflammatory response and the proliferation of vascular smooth muscle cells and promote the apoptosis of vascular smooth muscle cells,which can prevent the restenosis of vein grafts.

Dexamethasone;Fibrin glue;Restenosis;Proliferation;Apoptosis

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.14.1