活血散對急性軟組織損傷的修復(fù)作用及其消炎止痛效果的實驗研究

劉俊寧+王慶蓮+張燕

[摘要]目的 研究林如高老先生的經(jīng)驗方活血散對急性軟組織損傷的消炎止痛效果及其對損傷軟組織的修復(fù)和治療作用。方法 采用56只小鼠為實驗動物，雌雄各半，隨機分組時各組小鼠均為雌雄各半。取16只小鼠，隨機分為模型對照組（8只）和活血散治療組（8只），通過二甲苯耳廓腫脹法觀察活血散的消炎作用；取16只小鼠，隨機分為模型對照組（8只）和活血散治療組（8只），通過醋酸扭體法觀察活血散的止痛效果。24只小鼠造急性軟組織損傷模型，隨機分為活血散治療組（12只）和模型對照組（12只）兩組，分別在治療后2、4 d每組隨機抽取6只小鼠（雌雄各半），于麻醉后切取損傷處皮下及肌肉組織進(jìn)行組織學(xué)觀察。結(jié)果 活血散治療組小鼠的耳廓腫脹程度明顯輕于模型對照組（P<0.05）；活血散治療組小鼠扭體次數(shù)明顯少于模型對照組小鼠（P<0.05）；活血散治療組骨骼肌細(xì)胞修復(fù)進(jìn)程明顯早于模型對照組。結(jié)論 活血散具有較好的消炎止痛效果，可加快急性軟組織損傷的修復(fù)進(jìn)程。

[關(guān)鍵詞]急性軟組織損傷；林如高；活血散；修復(fù)作用

[中圖分類號] R274.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）05（c）-0009-03

[Abstract]Objective To study the effect of Huoxue Powder of old Mr.LIN Ru-gao on acute soft tissues injury and its effect on repair and treatment of damaged soft tissues.Methods Experimental animals were 56 mice，half of male and female.Each group of mice were half of male and female.16 mice were randomly divided into model control group（8 mice） and Huoxue Powder treatment group（8 mice）.The anti-inflammatory effect of Huoxue Powder was observed by xylene auricle swelling method；16 mice were randomly divided into model control group （8 mice） and Huoxue Powder treatment group（8 mice，half of male and female）.The analgesic effect of Huoxue Powder was observed by acetic acid writhing method.24 mice were randomly divided into two groups：the group （12 mice） and the model control group （12 mice）.Six mice（half of male and female） were randomly selected at 2 and 4 days after treatment，and the subcutaneous and muscle tissues were taken at the time of anesthesia to observe the histological.Results The degree of ear swelling in mice of Huoxue Powder treatment group was significantly lighter than that in model control group （P<0.05）.The number of writhing in mice of Huoxue Powder treatment group was significantly less than that in model control group （P<0.05）.The repair process of skeletal muscle cells in the treatment group was significantly earlier than that in the model control group.Conclusion Huoxue Powder has a good anti-inflammatory analgesic effect，which can accelerate the repair of acute soft tissue injury process.

[Key words]Acute soft tissue injury；LIN Ru-gao；Huoxue Powder；Repair effect

活血散為南少林名中醫(yī)林如高老先生的經(jīng)驗方，方劑共由16味中藥組成，即乳香、沒藥、沉香、三七各30 g，梔子、赤芍、羌活、桂枝、白芷、血竭、無名異、續(xù)斷、骨碎補、紫荊皮各60 g，五加皮90 g，楠香150 g。具有活血祛瘀疏風(fēng)散結(jié)、消腫定痛之功用。用于治療傷筋、骨折初、中期局部腫痛者。用時將上述諸藥共研磨成粉，酒水各半或用茶水與蜂蜜調(diào)成糊狀敷于患處，每次敷藥5～6 h，1次/d[1]。本藥為福州盤嶼中醫(yī)骨科醫(yī)院院內(nèi)制劑，為證實其臨床療效，本研究從抗炎、止痛、消腫以及對軟組織修復(fù)的促進(jìn)作用等方面進(jìn)行研究，驗證和闡述其作用機制。

1對象與方法

1.1動物

SPF級7周齡健康小鼠56只，雌雄各半，體重30～35 g，上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供[動物合格證號：SCXK（滬）2012-0002]，于福建中醫(yī)藥大學(xué)清潔級實驗動物中心飼養(yǎng)。

1.2藥品

實驗藥品購自福州盤嶼中醫(yī)骨科醫(yī)院，商標(biāo)注冊號：第3263158，生產(chǎn)批號：151102，50 g/包，活血散為散劑。

1.3活血散消炎作用的研究

實驗中采用二甲苯耳廓腫脹法驗證其消炎作用，將16只小鼠隨機分為兩組，即模型對照組和活血散治療組，每組雌雄各4只。將小鼠耳后頸背部剪毛脫毛約1 cm×1 cm，活血散治療組于脫毛處貼活血散敷貼，模型對照組則于脫毛處黏貼紗布塊，用醫(yī)用膠布捆敷固定。敷藥24 h后，用移液槍在小鼠左耳內(nèi)面和耳背對稱部緩慢滴加二甲苯位并涂勻，左耳內(nèi)面和背面各15 μl，共30 μl。涂二甲苯1 h后處死受試小鼠，用直徑6.0 mm的打孔器在在左耳涂藥部位打下組織圓片，右耳同一部位打下相同大小的圓片，組織天平稱重后計算其腫脹程度，腫脹程度=（左耳重-右耳重）/右耳重[2]。

1.4活血散止痛作用的研究

采用醋酸扭體法，小鼠隨機分為模型對照組、活血散治療組兩組，每組8只，雌雄各半。治療組于小鼠下肢足三里處貼活血散治療墊，模型對照組于同一處貼相同尺寸空白紗布墊，膠布固定24 h。治療24 h后，每只小鼠腹腔注射1%冰醋酸溶液0.2 ml/10 g，觀察15 min內(nèi)小鼠因疼痛引起的扭體次數(shù)，從注射醋酸開始計時，每只共觀察20 min[3]。

1.5活血散對軟組織修復(fù)作用的實驗研究

1.5.1軟組織損傷小鼠模型制備 SPF級小鼠24只，采用1%戊巴比妥（10 ml/kg體重）腹腔注射麻醉，左臀大腿部剪毛脫毛約1.0 cm×1.0 cm，取側(cè)臥位固定于打擊臺上，暴露左臀大腿部脫毛區(qū)，標(biāo)記打擊位置，用50 g砝碼作為打擊錘，打擊高度5 cm，自由落體打擊標(biāo)記處，連續(xù)5次，造成小鼠局部出現(xiàn)急性軟組織損傷[4-5]。

1.5.2造模小鼠分組處理及指標(biāo)檢測 造模小鼠隨機分組：①活血散治療組：造模1 d后，于損傷處貼敷活血散，共12只，膠布固定；②模型對照組：造模1 d后，于損傷處貼敷同尺寸空白紗布，共12只，膠布固定。分別于治療后2、4 d，分批取材，每次每組雌雄各半處死取材6只小鼠。用1%戊巴比妥（10 ml/kg體重）腹腔注射麻醉后，以損傷處為中心切取約0.5 cm×0.5 cm皮下組織及骨骼肌組織，10%福爾馬林固定。常規(guī)石蠟包埋，HE染色，觀察骨骼肌細(xì)胞和膠原纖維的增生情況以及軟組織的修復(fù)程度。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1活血散消炎作用的研究結(jié)果

活血散治療組小鼠耳廓腫脹程度明顯輕于模型對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2活血散止痛作用的研究結(jié)果

注射醋酸后，小鼠因疼痛開始扭體，15 min內(nèi)活血散治療組小鼠扭體次數(shù)明顯少于模型對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）（表2）。

2.3活血散對軟組織修復(fù)作用的研究結(jié)果

治療后2 d，模型對照組損傷部位組織腫脹，骨骼肌纖維出現(xiàn)明顯增生；活血散治療組損傷部位骨骼肌纖維增粗腫脹，結(jié)締組織增生活躍。治療后4 d，模型對照組損傷部位骨骼肌纖維腫脹情況明顯減輕，纖維增生活躍；活血散治療組損傷部位骨骼肌腫脹消失，纖維增生趨于穩(wěn)定?；钛⒅委熃M骨骼肌纖維修復(fù)程度明顯快于模型組照組（圖1）。

3討論

急性軟組織損傷癥屬中醫(yī)痹癥范疇，傷筋骨折初中期，由于外力的打擊，導(dǎo)致筋絡(luò)損傷，瘀血留滯于內(nèi)，導(dǎo)致氣血運行阻滯，局部出現(xiàn)青紫腫脹。“惡血留內(nèi)，經(jīng)絡(luò)受阻”，治療宜采取活血祛瘀，舒筋活絡(luò)的方法促進(jìn)氣血通暢，則瘀腫消退[6-8]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，急性軟組織損傷后出現(xiàn)局部毛細(xì)血管破裂，出血滲出增多，局部壓力增大，最終導(dǎo)致局部組織細(xì)胞腫脹壞死，出現(xiàn)無菌性炎癥反應(yīng)，從而出現(xiàn)組織細(xì)胞損傷不斷加重的惡性循環(huán)[9-12]。藥物外用可直接通過局部滲透作用達(dá)到患處，并可減少口服藥物后因代謝而造成的藥物損失，以及對胃腸道的影響[13-14]。

采用中藥外敷法治療具有使用方便、對日常生活影響少的優(yōu)點[15]。林如高老先生的活血散據(jù)“血不活則瘀不能去”“瘀不去則新不生”的原則，引用外治之法，方用乳香，沒藥、血竭活血祛瘀，無名異、赤芍、三七止血散瘀；羌活、桂枝、白芷、五加皮祛風(fēng)勝濕、散寒止痛，沉香、楠香行氣通絡(luò)、舒筋消腫；梔子清熱解毒、涼血利濕；紫荊皮、續(xù)斷、骨碎補可補肝腎、強筋骨。從而達(dá)到行氣消腫，活血祛瘀，散結(jié)定痛的效果[1]。

實驗結(jié)果表明，外敷活血散小鼠的耳廓腫脹程度明顯輕于模型組小鼠；采用醋酸扭體法，小鼠15 min內(nèi)扭體次數(shù)亦明顯少于模型組。說明活血散具備有效的、較好的消炎消腫鎮(zhèn)痛效果。組織學(xué)觀察結(jié)果顯示活血散治療組軟組織修復(fù)進(jìn)程明顯優(yōu)于模型組。說明其具有減輕損傷局部炎癥反應(yīng)，減輕組織損傷，促進(jìn)軟組織修復(fù)，縮短病程的作用。

本研究從理論上驗證了活血散對急性軟組織損傷的治療作用，初步闡述了其作用機制，為活血散的臨床運用提供了理論依據(jù)?；钛⒌木唧w作用機制仍需進(jìn)一步研究進(jìn)行闡釋，組方中各味中藥的作用及其具體機制亦需深入進(jìn)行研究闡釋。

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（收稿日期：2017-04-10 本文編輯：任 念）