皖南地區(qū)血液集中化檢測應用分析

黃慧 陳秀蘭 吳潔 潘安杰 馬怡 陳麗 潘潔

皖南地區(qū)血液集中化檢測應用分析

黃慧 陳秀蘭 吳潔 潘安杰 馬怡 陳麗 潘潔

目的 探討皖南地區(qū)血液集中化檢測的意義。方法 對皖南5家血站常規(guī)檢測合格的標本，采用2套血液核酸篩查系統(tǒng)進行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA檢測。酶免陰性、核酸陽性的標本，進行乙肝血清學補充試驗。最后對5家血站的核酸陽性檢出率進行分析。結(jié)果 在集中化檢測期間共檢測39 616例標本，檢出HBV陽性39例，其中蕪湖12例、安慶16例、池州3例、黃山5例、銅陵3例。結(jié)論 各單位送檢的標本質(zhì)量，直接影響核酸檢測結(jié)果準確性。NAT能在ELISA檢測陰性的獻血者血液標本中篩查到核酸陽性標本，有效降低了經(jīng)血傳播傳染病的危險。核酸集中化檢測可進一步提高血液質(zhì)量及保障血液安全。

ELISA檢測 血液集中化檢測 血液安全

2015年新版《血站技術操作規(guī)程》明確提出，HIV、HBV和HCV感染標志物要采用2遍血清學檢測和1遍核酸檢測。NAT相對于血清學檢測能顯著縮短經(jīng)血液傳播傳染病病毒檢測的“窗口期”，降低輸血傳播病毒的風險［1］。本研究對2015年12月~2016年6月期間，皖南地區(qū)5家血站的血液集中化檢測情況，進行總結(jié)分析；同時對本站HBsAg酶免陰性、HBV核酸陽性的標本，進行乙肝血清學補充試驗，以了解本地區(qū)獻血人群乙肝流行情況。

材料與方法

1 標本來源 2015年12月～2016年6月皖南5家血站無償獻血者血液標本，獻血者均符合國家《獻血者健康檢查要求》的相關要求，共計39 616例。外站標本使用標本運輸箱以確保冷鏈過程，抵達本單位時溫度符合要求。

2 試劑與儀器 NAT試劑廠家1：上?？迫A血液核酸篩查系統(tǒng)： 瑞士 Hamilton Microlab Star 全自動加樣儀，美國ABI 7500 Real time PCR 擴增系統(tǒng)，科華HBV、HCV、HIV-1核酸檢測試劑盒。NAT試劑廠家2：達安血液核酸篩查系統(tǒng)：Chemagic STAR核酸提取儀，ABI 7500 Real time PCR 擴增系統(tǒng)，達安血液篩查HBV、HCV、HIV-1病毒核酸檢測試劑盒。所用試劑均批批檢合格，且在有效期內(nèi)使用。

3 檢測方法

3.1 核酸檢測：5家血站常規(guī)各項檢測均合格的標本采用科華或達安血液核酸篩查系統(tǒng)進行8樣本混樣檢測，若混樣管呈反應性則進行樣本拆分實驗，實驗操作均嚴格依據(jù)本單位核酸SOP?；鞓訖z測陰性的標本直接出具合格報告；混樣檢測有反應性則進行相應的拆分實驗，并以單檢結(jié)果為最終結(jié)果。

3.2 血清學補充實驗：對HBsAg酶免陰性、HBV核酸陽性的標本，進一步測定HBsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc五項指標。受限于標本量，故血清學補充實驗僅限于本站HBV 核酸陽性標本。

4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 13. 0 軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

結(jié)果

1 2015年12月～2016年6月共檢測39 616例標本，檢出HBsAg酶免陰性、HBV陽性標本39例，其中蕪湖12例、安慶16例、池州3例、黃山5例、銅陵3例。未發(fā)現(xiàn)HCV RNA、 HIV RNA陽性標本。HBV DNA陽性情況見表1。5家血站中，蕪湖與安慶HBV DNA陽性率差異最大，經(jīng)χ2檢驗，χ2=11.17，P＜0. 01 。

表1 5家血站2015年12月～2016年6月核酸檢測HBV DNA陽性情況

2 安慶、蕪湖2015年12月～2016年4月陽性檢出率對比分析見表2。

3 對本站HBsAg酶免陰性、HBV核酸陽性的標本，進行乙肝血清學補充實驗，結(jié)果見表3。

討 論

近年來，隨著ELISA試劑的不斷優(yōu)化，靈敏度、特異性一直在提高，輸血殘留風險也相應降低，但仍有資料顯示，90%以上HBV和HIV及75%以上HCV的輸血傳播風險來自“窗口期”病毒感染［2-4］。2015年新版《血站技術操作規(guī)程》明確提出HIV、HBV和HCV感染標志物要采用2遍血清學檢測和1遍核酸檢測。目前，高度敏感、高度特異的核酸檢測（NAT）技術已成為我國血液篩查檢測的常規(guī)內(nèi)容，其與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗方法原理完全不同，核酸檢測的應用能有效減少輸血后病毒感染發(fā)生率，可將輸血傳播HBV、HCV和HIV的“窗口期”分別由原來的56 d、70 d和22 d縮短41 d、21 d和11 d［5］。

表2 安慶、蕪湖2015年12月～2016年4月陽性檢出率對比分析

表3 蕪湖市中心血站12例NAT陽性反應性標本的血清學乙肝5項檢測結(jié)果

本站采用科華、達安核酸血篩系統(tǒng)對皖南5家血站2015年12月~2016年6月常規(guī)血清學篩查合格標本共計39 616人份進行核酸檢測，共檢出39例乙肝核酸陽性標本，總陽性率為0.098%（見表1）。其中本站陽性率0.057%和銅陵0.062%與文獻報道的江蘇（0.06%）、唐山（0.040%）、鄭州（0.081%）［5-7］接近；而池州0.165%及黃山0.135%與寶雞（0.114%）、南寧（0.14%）、貴陽（0.16%）［8-10］相近；安慶陽性率0.191%，高于黃山、池州、銅陵三家血站，略低于廣州（0.22%）［11］。血液集中化檢測期間，所有核酸標本不分單位，一視同仁由本站固定的實驗人員進行8樣本混樣檢測，所有實驗均嚴格按本單位核酸SOP操作，對于可能由本實驗室引起的假陰性或假陽性，5家血站機會均等。

由表1可見，本單位的陽性率最低，其次是銅陵、黃山、池州，而安慶最高，由表2可見，安慶每個月的陽性率均高出本單位。分析本單位陽性率低于其余4家血站的原因可能有：①相較其他4家血站，本站自2014年開展核酸檢測至今已有近2年，體采科人員已能熟練操作核酸標本的留樣，對標本質(zhì)量（如嚴禁開蓋、及時顛倒混勻、4 h內(nèi)離心）、運送等能嚴格按要求執(zhí)行，檢驗科接收時亦對核酸標本質(zhì)量嚴格把關，加上領導對核酸檢測的高度重視及實驗前質(zhì)量控制的大力支持，減少了由標本質(zhì)量不合格或污染等原因引起的假陽性。②其余4家血站2015年12月前均未開展核酸檢測，采血人員可能對于留取核酸標本的概念不強，對核酸標本質(zhì)量的重要性也不夠了解，易造成留樣過程污染等假陽性。③外單位標本在送至本站之前，我們對其是否及時離心、冷凍保存等影響實驗結(jié)果的實驗前標本質(zhì)量無法掌控。④5家血站所使用的ELISA試劑不同，在靈敏度、特異性上也許稍有差異，本站乙肝灰區(qū)定為0.7～1.0。據(jù)了解，安慶灰區(qū)0.8～1.0。本站實驗人員在ELISA各項檢測結(jié)果的判定上均非常嚴謹，對于接近灰區(qū)0.7的合格標本，基本上當天不發(fā)報告，次日進行復查，視復查結(jié)果再出具檢測報告，可能在某些程度上也能相對降低核酸陽性率。⑤各家血站所使用的采血袋不同，致原袋血漿中保養(yǎng)液對核酸標本的稀釋程度不一，對核酸結(jié)果的影響可能也不一樣。⑥各地區(qū)乙肝感染情況不一也造成陽性率的不同［9-13］。尤其安慶地區(qū)下設6個縣和1個地級市，面積大地區(qū)廣，每個縣均設有采血點，對于標本的采集、離心和運送等實驗前質(zhì)量控制相對較復雜。由表3可知：在乙肝“兩對半”血清學實驗中，有1例結(jié)果為陰性，可能為血清轉(zhuǎn)換前“窗口期”（WP）感染或HBV隱匿性感染（OBI），HBV WP獻血者血清HBsAg為陰性且會隨著時間推移轉(zhuǎn)為陽性，OBI在感染HBV之初即丟失或之后逐漸丟失血清標志物，這一現(xiàn)象可在嗜肝病毒感染的土撥鼠模型上重現(xiàn)［12］；有4例HBsAb陽性，其中1例為單純HBsAb陽性，其余3例均聯(lián)合HBcAb陽性，可見在HBsAb陽性的標本中也可檢出NAT陽性，保護性抗體陽性亦不能排除OBI；單純HBcAb或聯(lián)合其他標志物陽性的標本10例，為OBI的可能性較高。據(jù)報道，HBsAg陰性而抗-HBc陽性或單純抗-HBc陽性的OBI獻血者標本中，可以檢測到低水平HBV DNA，且這種血液制品能夠具有感染性［13-15］。

酶免陰性、HBV DNA陽性標本后期可進一步做核酸定量檢測及基因型研究，分析獻血者感染的HBV基因型、血清學和病毒特征之間的關系。由于核酸實驗中可能存在的假陽性，各家血站可在后期建立對淘汰獻血者的定期追蹤隨訪，假陽性不僅會增加血液的報廢率，更會影響獻血者的獻血積極性。另外，定期追蹤隨訪可確認乙肝感染真實情況，同時也有助于對ELISA和NAT檢測不一致時結(jié)果的解釋和分析。乙肝核酸檢測作為ELISA檢測的互補實驗，能及時有效測出ELISA陰性標本中“窗口期”和HBV隱匿性感染的標本。2遍血清學檢測和1遍核酸檢測組成的互補血液篩查模式，可有效降低輸血感染病毒風險，保障臨床用血安全。

1 Busch MP，Kleinman SH，Jackson B，et al．Nucleic acid amplification testing of blood donors for transfusion-transmitted infectious diseases：Report of the Inter organizational Task Force on Nucleic Acid Amplification Testing of Blood Donors［J］．Transfusion，2000，40（2）：143-159.

2 何亞琴，張建偉，楊愛華，等．核酸檢測技術在常州地區(qū)獻血篩查中的應用［J］．中國輸血雜志，2011，24（7）：560-562.

3 王東，于原，臧亮，等．單人份核酸檢測在血液乙型肝炎病毒篩查中的應用［J］．國際檢驗醫(yī)學雜志，2012，33（7）：780-781.

4 歐陽玲，華建國，謝秀華，等．核酸檢測技術在深圳地區(qū)獻血者血液病毒篩查中的應用［J］．國際檢驗醫(yī)學雜志，2010，31（7）：764-765.

5 趙紅娜，王藝芳，葛文超，等. 鄭州地區(qū)無償獻血者中核酸檢測的初步應用［J］．中國輸血雜志，2014，27（9）：923-926.

6 蔣昵真，林紅，朱紹文，等．江蘇地區(qū)461165例無償獻血者乙型肝炎流行狀況分析［J］．臨床輸血與檢驗，2015，17（4）：292-294.

7 曹曉，曹慶寶，李杰，等．核酸檢測技術在唐山地區(qū)獻血者血液篩查中的應用［J］．檢驗醫(yī)學與臨床，2014，11（5）：634-637.

8 李晶，周艷，丁衛(wèi)平，等．核酸檢測技術在寶雞地區(qū)血液篩查中的應用［J］．中國輸血雜志，2012，25（8）：784-786.

9 顏秀娟，陸祝選，邱昌文，等．核酸檢測技術應用于血清學篩查合格的獻血者標本檢測［J］．中國輸血雜志，2012，25（12）：1322-1324.

10 鐘江，鄭祥順，周曉泉，等．貴州省血液中心病毒核酸檢測應用分析［J］．重慶醫(yī)學，2016，45（2）：242-243.

11 鄭優(yōu)榮，梁浩堅，李仲平，等．核酸檢測技術在廣州地區(qū)獻血者血液篩查中的應用［J］．中國輸血雜志，2013，26（12）：1211-1214.

12 Mulrooney-Cousins PM，Michalak TI .Persistent occult hepatitis B virus infection：experimental findings and clinical implicantions［J］. World J Gastroenterol，2007，13（43）：5682-5686.

13 Liu CJ，Chen DS，Chen PJ．Epidemiology of HBV infection in Asian blood donors： emphasis on occult HBV infection and the role of NAT［J］．J Clin Virol，2006，36（S1）：S33-S44.

14 Satake M，Taira R，Yugi H，et al．Infectivity of blood components with low hepatitis B virus DNA levels identified in a look back program［J］．Transfusion，2007，47（7）：1197-1205.

15 Stolz M，Tinguely C，Graziani M，et al．Efficacy of individual nucleic acid amplification testing in reducing the risk of transfusion-transmitted hepatitis B virus infection in Switzerland［J］．Transfusion，2010，50（12）：2695-2706.

Analysis of Blood Concentration Detection in Southern Anhui

HUANG Hui，CHEN Xiu-lan，WU Jie，et al .
Wuhu Blood Center Station，Wuhu 241000

Objective To explore the significance of nucleic acid tests for centralized blood screening in southernAnhui. Methods Qualified samples from five blood stations were detected，with two sets of nucleic acid blood screening systems for HBV DNA，HCV RNA and HIV RNA. The samples with negative ELISA and positive NAT were further identified for hepatitis B. Finally，the positive rates of nucleic acids in five blood stations were analyzed. Results During the centralized detection，39616 samples were tested and 39 HBV positive samples were found，including 12 in Wuhu，16 in Anqing，3 in Chizhou，5 in Huangshan，and 3 in Tongling. Conclusion NAT screening can find positive samples from negative samples tested by ELISA .NAT effectively reduced the risk of diseases through blood transfusion. Nucleic acid concentration detection may improve the quality of blood and blood safety.

ELISA detection Blood concentration detection Blood safety

R446.6

A

1671-2587（2017）03-0291-04

2016-09-25）

（本文編輯：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.03.023

241000 安徽省蕪湖市中心血站

黃慧（1983–），女，安徽蕪湖人，主管檢驗師，碩士，主要從事免疫血液學及分子生物學研究，（Tel）18155366038（E-mail）handyhh@163.com。