口蹄疫三價苗對荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

趙赫，趙慶彬，王穆峰，陳立冬，楊志勇

(1.天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381；2.赤峰市元寶山區(qū)獸醫(yī)局，赤峰 024000)

口蹄疫三價苗對荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

趙赫1，趙慶彬1，王穆峰1，陳立冬2，楊志勇1

(1.天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381；2.赤峰市元寶山區(qū)獸醫(yī)局，赤峰 024000)

為研究口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價滅活疫苗注射對荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響，本研究對 2～11歲荷斯坦種公牛肌肉注射口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價滅活疫苗后，統(tǒng)計分析注射前半個月及注射后第1、2、3、4周的荷斯坦種公牛射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、凍精精子畸形率和凍精產(chǎn)量的差異性。結(jié)果顯示：（1）2～11歲種公牛各時間段的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量無顯著差異（P＞0．05）；而注射后第1周的凍精產(chǎn)量、注射后第2周的畸形率顯著高于注射前半個月（P＜0．05），其他各時間段之間無顯著差異（P＞0．05）。（2）2歲種公牛，注射后第2周的畸形率顯著高于注射前半個月（P＜0．05），其他各時間段之間無顯著差異（P＞0．05）；（3）3～5歲種公牛注射后第2周的畸形率顯著高于注射后第1周（P＜0．05），其他各時間段差異不顯著（P＞0．05）。（4）7～11歲種公牛，注射后第1周的畸形率和凍精產(chǎn)量顯著高于注射前半個月（P＜0．05），其他各時間段差異不顯著（P＞0．05）?？梢缘贸觯谔阋逴型、亞洲Ⅰ型、A型三價滅活疫苗注射對荷斯坦種公牛射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力無顯著影響，對凍精產(chǎn)量無不利影響，并導致畸形率升高，但對不同年齡段種公牛影響不完全相同。

口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價滅活疫苗；種公牛；精液

口蹄疫是發(fā)生在偶蹄動物中的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，發(fā)病率高，可引起大范圍的易感動物感染發(fā)病，造成嚴重的經(jīng)濟損失，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類疫病中第一位烈性傳染病，我國農(nóng)業(yè)部也將其列為A類傳染病之首[1]。根據(jù)我國《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》的相關(guān)規(guī)定[2]，國家對口蹄疫實行強制免疫，免疫方法為口蹄疫疫苗注射?？谔阋逴型、亞洲Ⅰ型、A型三價滅活疫苗是近幾年我國自主研制的新型口蹄疫疫苗，達到了口蹄疫防疫中的“一針防三病”的效果，國內(nèi)多個種公牛站采用口蹄疫三價苗來防控口蹄疫疫病。本試驗對口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價滅活疫苗（以下稱口蹄疫三價苗）注射前后，2～11歲荷斯坦種公牛的射精量、精液品質(zhì)及凍精產(chǎn)量進行了對比分析，評估了口蹄疫三價苗注射對種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響。

1 材料與方法

1．1 試驗動物

25頭體格健壯、性欲旺盛、正常進行精液生產(chǎn)且年齡為2～11歲的荷斯坦種公牛，統(tǒng)一進行飼養(yǎng)、采精，自由飲水、運動。飼養(yǎng)管理參照《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》（NY/T1446-2007）[3]進行。

表1 口蹄疫三價苗對2～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

1．2 主要儀器

數(shù)顯水浴鍋（TL402～420B，江蘇姜堰市醫(yī)療器械公司），彩色攝像機（TK～C1481BEC，JVC JAPAN），鏡檢加熱器（NFV52，富士平工業(yè)株式會社），相差顯微鏡（BX41，OLYMPUS JAPAN），密度儀（ACCUCELL，IMV FRANCE）分析天平（ER～108A，AND JAPAN），精液二次稀釋裝置（FA～435，F(xiàn)HK JAPAN），全自動細管精液冷凍儀（EUROTHERM 2704，IMV FRANCE），超凈工作臺（DL～CJ～1ND～Ⅱ，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司），高壓滅菌器（SS～325，TOMY JAPAN），恒溫培養(yǎng)箱（MIR～260，三洋電機株式會社）。

1．3 疫苗免疫

在秋季，采用口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價滅活疫苗（金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)），在種公牛頸部進行肌肉注射，劑量為1mL/頭。

1．4 精液采集、質(zhì)量檢測和冷凍精液制作

口蹄疫三價苗注射前后，嚴格按照《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》（NY/T1234-2006）[4]對種公牛進行精液采集，并對精液進行質(zhì)量檢測、稀釋、冷凍制作和儲存。采精頻率為2次/周。

由采精人員進行精液采集，室內(nèi)技術(shù)人員利用相差顯微鏡及相應的顯像系統(tǒng)進行鮮精活力檢查，并通過密度儀來檢測鮮精密度，再利用分析天平稱量精液采集管和精液的重量來計算射精量。將鮮精活力達到國家標準的精液用種公牛站配置的專用稀釋液進行稀釋，放置4℃冷柜中平衡，并通過精液二次稀釋裝置對其進行二次稀釋。然后進行分裝、打印、冷凍，并將凍精產(chǎn)品暫時儲存起來。待經(jīng)過型式檢驗合格后，方可儲存于相應的液氮罐中，并放置于冷凍精液儲存庫中長期貯存。

1．5 凍精產(chǎn)品型式檢驗

嚴格按照中華人民共和國國家標準《牛冷凍精液》（GB 4143-2008）[5]進行型式檢驗，包括鮮精活力、凍精活力、凍精精子畸形率（簡稱“畸形率”，下同）等。

1．6 統(tǒng)計分析采用統(tǒng)計軟件SPSS 19.0 One Way ANOVA進行方差分析，并進行Duncan檢驗 ，各時間段數(shù)據(jù)均以“Mean±SD”表示。

2 結(jié)果與分析

2．1 口蹄疫三價苗對2～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響從表1可以看出，注射前半個月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力差異均不顯著（P＞0.05）；而注射后第1周的凍精產(chǎn)量（簡稱“產(chǎn)量”，下同）、注射后第2周的畸形率均顯著高于注射前半個月（P＜0.05），其他各時間段差異不顯著（P＞0.05）。

2．2 口蹄疫三價苗對2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

從表2可以看出，注射前半個月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力和產(chǎn)量差異不顯著（P＞0.05），而注射后第2周的畸形率顯著高于注射前半個月（P＜0.05），其他各時間段差異不顯著（P＞0.05）。

表2 口蹄疫三價苗對2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

表3 口蹄疫三價苗對3～5歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

2．3 口蹄疫三價苗對3～5歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

從表3可以看出，注射前半個月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力和產(chǎn)量差異不顯著（P＞0.05）。而注射后第2周的畸形率顯著高于其注射后第1周（P＜0.05），其他各時間段差異不顯著（P＞0.05）。

2．4 口蹄疫三價苗對7～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

從表4可以看出，注射前半個月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度和凍精活力差異不顯著（P＞0.05）。而注射后第1周的畸形率和產(chǎn)量顯著高于注射前半個月（P＜0.05），其他各時間段差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

口蹄疫三價滅活疫苗一免多效，縮短了防疫周期，使防疫工作省工省時，減少了對牲畜的免疫刺激次數(shù)，其免疫效果良好、安全性高、防疫范圍更廣，自面世以來，深受市場歡迎，并已逐漸成為口蹄疫疫苗的主要選擇對象。口蹄疫疫苗注射是種公牛站春秋兩季防疫的工作重點，而種公牛在24～36月齡達到體成熟，3～6歲時是利用的最佳年齡，種公牛以后隨著年齡的增長，公牛的性欲與精液品質(zhì)開始下降[6]。所以，本試驗統(tǒng)計分析了口蹄疫三價苗對2～11歲荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響，并分析了其對2歲、3～5歲和7～11歲三個年齡段種公牛影響的差異性。

從統(tǒng)計結(jié)果來看，口蹄疫三價滅活疫苗注射對荷斯坦種公牛的射精量、鮮精活力、鮮精密度和凍精活力無顯著影響；而相對于注射前半個月，注射后第1周的產(chǎn)量、注射后第2周的畸形率均升高。這表明，口蹄疫三價苗注射后未對精液產(chǎn)量產(chǎn)生不利影響，但卻導致了注射后第2周的畸形率升高，影響時間為1周，而其他方面無顯著影響。但對不同年齡段的公牛影響又不盡相同。相同之處是對射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力無顯著影響。不同之處是，2歲種公牛注射后第2周的畸形率與注射前半個月相比，顯著升高；3～5歲種公牛注射后第2周的畸形率與注射后第1周相比，顯著升高； 而7～9歲種公牛注射后第1周的畸形率和產(chǎn)量與

表4 口蹄疫三價苗對7～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

4 結(jié)論

口蹄疫三價滅活疫苗注射對荷斯坦種公牛射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力無顯著影響，對凍精產(chǎn)量無不利影響，并能導致畸形率升高，但對不同年齡段種公牛影響不完全相同。其中，凍精產(chǎn)量升高應該是種公牛冷凍精液生產(chǎn)受夏季高溫不利影響逐漸消失、產(chǎn)量不斷恢復的結(jié)果；而口蹄疫三價苗注射前后畸形率的變化，可能與疫苗的注射應激及疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對動物細胞具有毒性作用有關(guān)[7]，也可能與口蹄疫免疫反應有關(guān)。對不同年齡段種公牛產(chǎn)生不同的影響，這可能與不同生理階段的生殖機能特點有關(guān)，其影響機理有待進一步研究。

[1] 陳征,鄭明．口蹄疫疫苗的正確使用[J]．中國獸藥雜志,2009,43(9): 55-56．

[2] 《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》農(nóng)醫(yī)發(fā)[2007]12號．

[3] 《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》（NY/T1446-2007）．

[4] 《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》（NY/T1234-2006）．

[5] 《牛冷凍精液》（GB 4143-2008）．

[6] 翁春玲,佟國軍,隋明． 影響種公牛精液品質(zhì)的因素[J]．黑龍江動物繁殖,2009,17(2):42-44．

[7] 蔣文俊,李華春,李樂,等．口蹄疫疫苗研究進展[J]．畜牧與獸醫(yī),2004,36(5):42-43．

The Effect of Foot-and-mouth Disease Trivalent Vaccine on the Production of Frozen Semen of Holstein Bull

ZHAO He1, ZHAO Qing-bin1, WANG Mu-feng1, CHEN Li-dong2, YANG Zhi-yong1
(1.Tianjin Diary Cattle Development Center, Tianjin 300381; 2.The Veterinary Bureau of Yuanbaoshan District, Chifeng 024000)

The objective of the study was to explore the effect of injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 ,and Type A) Bivalent Vaccine on the production of frozen semen of Holstein bulls. After intramuscular injecting Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 ,and Type A)Trivalent Vaccine into Holstein bull of 2～11 years old, the difference of the volume per ejaculate, the sperm motility and theconcentration of fresh semen, the sperm motility, the abnormal sperm percentage and the production of frozen semen were analyzed statistically, when two weeks before the injection, the first week, the second week, the third week and the fourth week after the injection. Results showed that: (1)In Holstein bulls of 2～11years old, it had no significant difference in each period that the volume per ejaculate, the concentration and the sperm motility of fresh semen, the sperm motility of frozen semen (P＞0.05); the production of the first week and the abnormal sperm percentage of the second week were higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05), and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05).(2)In bulls of 2 years old, the abnormal sperm percentage of the second week was higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05),and it had no significant difference in each period(P＞0.05).(3)In bulls of 3～5 years old, the abnormal sperm percentage of the second week were higher than that of the first week after the injection (P＜0.05),and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05). (4) In bulls of 7～11 years old, the production and the abnormal sperm percentage of the first week were higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05), and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05). The conclusion could be drawn that there was no statistical differences in the volume per ejaculate, the sperm motility and the concentration of fresh semen, the sperm motility of frozen semen of Holstein bull kept for covering that the injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 and Type A) Trivalent Vaccine, and had no adverse effect on the production, and induced the higher of the abnormal sperm percentage of frozen semen, and these statistical differences in different stages of the age were different.

Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 and Type A) Trivalent Vaccine, Inactivated; Bull kept for covering; Semen

S858.23

A

1004-4264（2017）05-0024-05

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.05.007

第二屆“牛人”攝影大賽作品 《收獲》——王學凱 中國農(nóng)業(yè)大學動物科技學院

2016-09-27

趙赫（1981-），女，天津人，碩士，主要從事奶牛生產(chǎn)性能測定工作。