赭曲霉毒素A快速檢測方法研究進(jìn)展及其在中藥中的應(yīng)用前景

胡淑榮+應(yīng)光耀+胡玉莉+楊世海+楊美華

[摘要] 赭曲霉毒素A（OTA）是一類主要由曲霉屬和青霉屬等真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，具有強(qiáng)烈的腎毒性，致畸、致癌、致突變等作用。研究表明OTA不僅廣泛污染于食品飼料和農(nóng)作物中，近年來在香辛料、甘草等中草藥中也被證實(shí)廣泛存在。鑒于OTA的普遍性和危害性，該文分別綜述了可視化試紙條、流式微球技術(shù)、電化學(xué)傳感器、表面增強(qiáng)拉曼光譜等技術(shù)在OTA快速檢測上的應(yīng)用，預(yù)期為實(shí)現(xiàn)OTA檢測快速化、操作簡單化、儀器小型化的高通量檢測研究和應(yīng)用提供參考。

[關(guān)鍵詞] 赭曲霉毒素A；中藥；快速檢測方法

[Abstract] Ochratoxin A （OTA） is a toxic secondary metabolite mainly produced by Aspergillus and Penicillium species，with strong renal toxicity，teratogenic，carcinogenic，mutagenic effect. Studies have shown that OTA is not only widely contaminated in food and feed crops，but also has been widely contaminated in Chinese herbal medicines such as spices，licorice and so on. In view of OTA′s universality and harmfulness，this paper summarizes the flow visualization test strip，microsphere，electrochemical sensor，surface enhanced Raman spectroscopy technology in OTA rapid detection，which provides reference for the research and application of high throughout detection instrument miniaturization in order to achieve OTA quick detection and simple operation.

[Key words] ochratoxin A；Chinese medicine；rapid detection method

隨著中藥材出口逐年增加，我國中藥材的安全問題也受到了全世界的廣泛關(guān)注。中藥材安全問題除了其自身的內(nèi)源性毒素，例如川烏中的烏頭堿、雷公藤中的雷公藤堿等外，真菌毒素、農(nóng)藥、重金屬這3大主要外源性污染物也嚴(yán)重威脅著中藥材的安全性和品質(zhì)。由于中藥材本身營養(yǎng)成分豐富和外部環(huán)境的影響，在種植、采收、加工、運(yùn)輸和儲藏過程中操作不當(dāng)極易污染真菌，進(jìn)而產(chǎn)生各種真菌毒素[1]。

真菌毒素是由真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，種類繁多，包括黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏馬毒素、玉米赤霉烯酮等，其中赭曲霉毒素A（OTA）是由二氫異香豆素以酰胺鍵結(jié)合1個(gè)苯丙氨酸形成的苯基氨酰衍生物，是赭曲霉毒素系列中毒性最強(qiáng)的真菌毒素，在二氫異香豆素環(huán)上的氯原子可以增強(qiáng)毒性，脫氯的赭曲霉毒素B（OTB）其毒性要比OTA小10倍。OTA主要由純綠青霉、赭曲霉和碳黑曲霉產(chǎn)生，不僅具有致癌、致畸和致突變作用，還具有肝腎毒性、免疫毒性等，而且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，只有在250 ℃以上溫度加熱數(shù)分鐘才能降低OTA的濃度，已被國際癌癥研究中心（IARC）定義為Ⅱ類致癌物質(zhì)，這嚴(yán)重影響了中藥的質(zhì)量和療效，對人類健康造成極大威脅，也阻礙其進(jìn)出口貿(mào)易和中藥國際化和現(xiàn)代化進(jìn)程，如歐盟規(guī)定辣椒、肉豆蔻、干姜、姜黃及其混合物中OTA的限量為15 μg·kg^-1，甘草根的浸漬物中OTA 限量為20 μg·kg^-1，中國臺灣對嬰兒食品中OTA的限量標(biāo)準(zhǔn)為不得檢出[2-6]。

1 中藥中赭曲霉毒素污染現(xiàn)狀

中藥大多來源于自然界中的植物和動(dòng)物，而產(chǎn)赭曲霉毒素A的霉菌在自然界中具有廣泛性。因此，中藥也容易受到這些霉菌的侵害。近年來隨著中藥在疾病預(yù)防與治療、保健品、食品開發(fā)等方面重要性的提高，中藥中真菌毒素的污染也備受關(guān)注。為了保障中藥、保健品和食品等安全及人體健康，世界各國及相關(guān)組織十分重視真菌毒素的檢測及其污染的控制。我國中藥材品種繁多，資源豐富，就藥典收錄的品種就有2 000余種，種植和加工技術(shù)有很大的差別，成分基質(zhì)復(fù)雜。近幾年文獻(xiàn)報(bào)道，OTA污染主要集中在根及根莖類、種子果實(shí)類和芳香植物中等[7-12]，見表1。

2 基于抗體的快速檢測方法

基于抗體的快速檢測是以抗體抗原免疫化學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，對抗體抗原含量進(jìn)行測定的一種方法，具有高度的特異性、靈敏度和快速簡便等優(yōu)點(diǎn)。OTA相對分子質(zhì)量為403.82，屬于半抗原，抗原性較弱，在免疫反應(yīng)中，只具有反應(yīng)原性而不具有免疫原性，因此只有與蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)結(jié)合后，才具有免疫原性[13]。

2.1 膠體金免疫色譜技術(shù) 膠體金免疫色譜技術(shù)（gold immunochromatography assay，GICA）是1種將單克隆抗體技術(shù)、膠體金標(biāo)記技術(shù)和免疫檢測技術(shù)等多種方法有機(jī)結(jié)合在一起的固相標(biāo)記免疫檢測技術(shù)。OTA快速檢測試紙條應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的方法，從加樣處開始分別為樣品墊、金標(biāo)墊、NC膜和吸水紙。對金標(biāo)墊用處理液進(jìn)行處理然后噴上金標(biāo)抗體進(jìn)行偶聯(lián)，NC膜的檢測線（T線）為偶聯(lián)了BSA的OTA和控制線（C線）為羊抗鼠的二抗。

賴衛(wèi)華等[14]應(yīng)用競爭抑制免疫層析的方法，研制出了1種用于快速檢測赭曲霉毒素A的膠體金試紙條，其檢測限為10 μg·L^-1，檢測時(shí)間為10 min。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果研究表明，赭曲霉毒素A的結(jié)構(gòu)類似物赭曲霉毒素B，桔霉素與赭曲霉毒素A快速檢測試紙條不產(chǎn)生交叉反應(yīng)，表明赭曲霉毒素A快速檢測試紙條具有較好的特異性。目前該方法由于具有快速、操作簡單、檢測時(shí)間短等特點(diǎn)，可用于大批次樣品的檢測，其在食品和中藥中的檢測會得到充分發(fā)展和廣闊應(yīng)用。

2.2 流式微球技術(shù) 流式微球技術(shù)是將熒光編碼微球與流式細(xì)胞儀相結(jié)合的新型技術(shù)，該技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)高通量同時(shí)分析樣品中的多種待測目標(biāo)，現(xiàn)今已廣泛應(yīng)用于食品、農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境等領(lǐng)域的快速檢測，尤其是小分子物質(zhì)包括農(nóng)藥和真菌毒素的高通量多目標(biāo)的快速檢測[15-18]。

肖昌彬等[19]利用流式微球技術(shù)檢測中藥麥芽中的OTA含量，其將熒光編碼微球與牛血清白蛋白-OTA（BSA-OTA）偶聯(lián)形成微球-蛋白包被抗原偶聯(lián)物，將簡單前處理后的麥芽樣品加入到復(fù)合物溶液后，使樣品中的OTA與微球-蛋白包被抗原偶聯(lián)物共同競爭OTA特異性識別的生物素修飾單克隆抗體，加入熒光探針（異硫氰酸熒光素標(biāo)記羊抗小鼠二抗，F(xiàn)ITC-IgG）孵育1 h后，采用流式細(xì)胞儀檢測微球表面的平均熒光強(qiáng)度，從而實(shí)現(xiàn)麥芽中OTA的定性和定量檢測。該方法檢出限能達(dá)到0.12 μg·L^-1，基質(zhì)干擾小，加樣回收率在93.9%～97.4%，RSD小于3.6%，且線性良好，R²0.989 2。16批實(shí)際麥芽樣品中，檢測到2個(gè)陽性樣品，最高量3.83 μg·kg^-1，且與LC-MS-MS的確證結(jié)果一致。該技術(shù)與其他分析方法相對比，每次檢測所需試劑少，樣品消耗量低，因此檢測成本也較低[20]，對于中藥材中赭曲霉毒素A或其他同類真菌毒素的快速檢測具有巨大前景。

2.3 電阻抗免疫傳感器技術(shù) 生物傳感器技術(shù)是由多學(xué)科領(lǐng)域交叉的產(chǎn)物，當(dāng)利用該技術(shù)進(jìn)行物質(zhì)檢測時(shí)，待測物經(jīng)擴(kuò)散作用進(jìn)入生物活性材料中，通過與識別元件或感受器（如：酶、抗體、適配體等）發(fā)生生物化學(xué)反應(yīng)并產(chǎn)生變化，利用物理和化學(xué)轉(zhuǎn)換器（如：氧電極、光敏管等）和電子放大器將該變化轉(zhuǎn)化成可定量處理的聲、光、電等信號，通過一系列標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以精確測量出待測物質(zhì)的濃度[21]。雖然光學(xué)分析方法的研究相對比較熱門，但是由于電化學(xué)分析方法不受樣品顏色、澄清度等影響，只需要簡單的前處理過程即可實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)物質(zhì)的分析檢測，而且所需的儀器設(shè)備簡單，如電化學(xué)工作站，因其價(jià)格低廉、操作簡單、檢測裝置輕便易攜帶、檢測快速且靈敏度高、易于微型化和集成化的特性，國內(nèi)外環(huán)境工作者將其廣泛應(yīng)用于水體中重金屬的檢測當(dāng)中[22-23]。

根據(jù)檢測信號類型不同，電化學(xué)免疫傳感器可分為電流型、電位型、電導(dǎo)型和阻抗型。由于生物體和生物反應(yīng)的電特性，例如抗體和抗原發(fā)生反應(yīng)后會引起電極間介質(zhì)的阻抗發(fā)生變化，從而通過測量阻抗變化值來實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)分析物的檢測。Francesca等[24]開發(fā)了用于定量測定赭曲霉毒素A（OTA）的一次性絲網(wǎng)印刷碳電極（SPCE）上的阻抗標(biāo)記免疫傳感器。在用金納米顆粒（AuNP）修飾SPCE表面后，通過半胱胺層將抗-OTA固定在工作電極上。在每個(gè)涂覆步驟之后，通過循環(huán)伏安法（CV）和電化學(xué)阻抗譜（EIS）表征改性表面。選擇電容作為在不同OTA濃度下電極表面的電性質(zhì)的可再現(xiàn)的變化的最佳參數(shù)，并且其用于研究所開發(fā)的免疫傳感器的分析參數(shù)。在優(yōu)化條件下免疫傳感器之間的線性關(guān)系為0.3～20 μg·L^-1，檢測下限為0.25 μg·L^-1，適合許多常見食品中的OTA含量檢測。該方法同時(shí)用于測量紅葡萄酒樣品中的OTA，并將結(jié)果與用競爭性ELISA試劑盒結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示免疫傳感器對低于2 μg·kg^-1的OTA較敏感，符合歐洲法規(guī)中對常見產(chǎn)品食品所建立的OTA限量標(biāo)準(zhǔn)。

由于免疫的快速檢測方法大多數(shù)是基于免疫競爭的原理，因此所需的抗體數(shù)量大，如今多數(shù)抗體篩選和制備技術(shù)多是在生理?xiàng)l件下進(jìn)行，從小鼠到家兔，甚至是羊駝和駱駝等大型動(dòng)物都被用于免疫和制備相應(yīng)的抗體，因此該技術(shù)最大的難點(diǎn)就是制備時(shí)間長、費(fèi)用高、具有不穩(wěn)定性。此外抗體本身化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，容易受溫度、pH等影響，發(fā)生不可逆的變性，而且與結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)較多，受復(fù)雜基質(zhì)如中藥材等的干擾大，容易出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，靈敏度也受所制備的抗體的親和力限制，這些不足之處均影響了以抗體為基礎(chǔ)的檢測技術(shù)和方法的推廣和應(yīng)用[25-27]，見表2。

3 基于適配體的快速檢測方法

核酸適配體是經(jīng)指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化（SELEX）技術(shù)在體外化學(xué)合成并通過層層篩選得到的單鏈寡核苷酸片段，一般由數(shù)10個(gè)核苷酸組成，可以是RNA或者單鏈DNA[28]。適配體可結(jié)合物質(zhì)范圍廣泛，不僅可以和酶、蛋白質(zhì)等大分子結(jié)合，也能與氨基酸、激素、真菌毒素、農(nóng)藥，甚至是重金屬元素等生物或化學(xué)小分子產(chǎn)生高特異性、高親和力的結(jié)合[29]。其高親和力結(jié)合主要在于適配體能與各種靶物質(zhì)通過分子間作用力形成更加穩(wěn)定的三維空間結(jié)構(gòu)且與靶分子結(jié)合空間位阻小，因此穩(wěn)定性好，不易受到環(huán)境中的核酸酶、酸堿性物質(zhì)和有機(jī)試劑的影響[30]。Cruz-Aguado和Penner[31]首次篩選出OTA的核酸適配體，不僅為食品、糧食和飼料中OTA的分析檢測帶來便利，也為中藥材快速檢測OTA起到了鋪墊作用。

3.1 膠體金適配體試紙條技術(shù) 膠體金適配體試紙條技術(shù)原理與膠體金免疫試紙條類似，均由樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、測試線（T線）、質(zhì)控線（C線）、PVC底板和吸水墊組成，結(jié)構(gòu)見圖1。在結(jié)合墊上，3′-端經(jīng)巰基修飾的OTA適配體與膠體金通過Au-S鍵合形成穩(wěn)定的金標(biāo)探針，T線上包含一段與OTA適配體互補(bǔ)的核酸片段，并用生物素進(jìn)行修飾，C線上包含一段含胸腺嘧啶的核酸片段，用生物素進(jìn)行修飾，能與OTA適配體結(jié)合。當(dāng)中藥樣品溶液滴在樣品墊中后，由于毛細(xì)管作用，樣品溶液沿著試紙條流動(dòng)，倘若樣品中存在OTA，OTA將與結(jié)合墊中的金標(biāo)探針結(jié)合，根據(jù)競爭法的原理，T線則不顯色，而C線顯色，若樣品中無OTA，則T線和C線均顯色。

Zhou等[32]采用基于適配體技術(shù)的膠體金試紙條應(yīng)用于中藥黃芪中OTA的檢測發(fā)現(xiàn)，膠體金特征、大小、膠體金-適配體結(jié)合物的數(shù)量、遷移速率和甲醇的量都會影響試紙條的檢測靈敏度。最終優(yōu)化后發(fā)現(xiàn)，將膠體金-適配體結(jié)合物濃度稀釋4倍后最終呈現(xiàn)出明顯的顏色變化，通過調(diào)節(jié)運(yùn)行緩沖液成分和比例、膜類型和封閉緩沖液的成分和比例，從而優(yōu)化出最佳遷移速率，在縮短檢測時(shí)間的同時(shí)也提高了檢測靈敏度。此外，還發(fā)現(xiàn)甲醇濃度超過20%后會影響金標(biāo)探針的釋放直接導(dǎo)致顯色效果。研發(fā)的膠體金適配體測流試紙條檢測OTA的檢測限為1 μg·L^-1，檢測用時(shí)為15 min，且與同類毒素?zé)o交叉反應(yīng)。當(dāng)檢測9個(gè)黃芪樣品時(shí)發(fā)現(xiàn)有1個(gè)陽性樣品，結(jié)果與液質(zhì)聯(lián)用的方法一致。雖然試紙條上的顏色深淺與OTA的含量成反比，且檢測耗時(shí)少，但仍是1種半定量的方法，倘若在膠體金材料中引入熒光物質(zhì)，或?qū)l(fā)光材料以夾心法的方式與膠體金和適配體連接，結(jié)合可以讀取熒光強(qiáng)度的設(shè)備，就可以精確快速定量中藥材中OTA的含量，進(jìn)行現(xiàn)場快篩。

3.2 電化學(xué)適配體傳感器技術(shù) 在適配體技術(shù)的基礎(chǔ)上，為了滿足復(fù)雜樣品如食品、飼料和中藥材中痕量目標(biāo)物如農(nóng)藥、真菌毒素等檢測需求，就要尋找到提高檢測靈敏度的信號放大方法。由于金屬納米粒子含有大量的金屬離子，并且可以通過電化學(xué)的方法檢測出來，根據(jù)這一特性可以將金屬納米粒子作為放大檢測信號的信號分子，選擇具有良好生物親和性納米材料作為基底或母體（如SiO₂納米粒子等），將多個(gè)活化后的另一種納米材料（如CdS量子點(diǎn)、磁微球等）裝載在經(jīng)修飾后的基底上形成復(fù)合型納米材料，然后與sDNA反應(yīng)后形成納米信號探針，將cDNA與金電極自組裝形成捕獲探針，將兩者相結(jié)合形成電化學(xué)生物傳感器，利用免疫競爭原理和電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測，就可以定性定量檢測超低含量的目標(biāo)物，如食品、糧食和中藥材中的赭曲霉毒素A[33-35]。

在生物傳感器的領(lǐng)域中，由于納米材料的介入，借助其在光學(xué)、電學(xué)、磁學(xué)和化學(xué)活性等性能上的獨(dú)特表現(xiàn)，使本身就基于納米級別分子運(yùn)作的生物傳感器能夠更好的在小分子化合物檢測上如虎添翼[36]。Bonel等[37]將OTA特異性的適配體與磁微球反應(yīng)孵化成功能化的磁球，利用磁場的磁力將修飾過的磁微球固定于絲網(wǎng)印刷電極上，辣根過氧化物酶-OTA結(jié)合物與供試溶液中游離的OTA產(chǎn)生競爭反應(yīng)，反應(yīng)的產(chǎn)物采用差示脈沖伏安法來測定，該方法在檢測OTA上線性范圍廣，在0.78～8.74 μg·L^-1，且檢測限能達(dá)到0.007 μg·L^-1，在實(shí)際樣品小麥中檢測OTA含量，其結(jié)果的RSD小于8%，專屬性強(qiáng)，與同類毒素也不發(fā)生交叉反應(yīng)。

3.3 表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù) 表面增強(qiáng)拉曼光譜（surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS）技術(shù)是基于拉曼散射效應(yīng)，將待測分子吸附在某些經(jīng)特殊化修飾、具有納米結(jié)構(gòu)特性的金屬表面上，從而增強(qiáng)其拉曼散射效應(yīng)的分子振動(dòng)光譜技術(shù)[38]。該技術(shù)不僅能提供待測分子的詳細(xì)結(jié)構(gòu)信息，而且對待測物的檢測限理論上能達(dá)到單分子的水平，比常規(guī)的拉曼技術(shù)的靈敏度高出數(shù)個(gè)數(shù)量級，從而能實(shí)現(xiàn)對痕量物質(zhì)，尤其是中藥材中的真菌毒素（如赭曲霉毒素A等）的快速定量檢測。為了減少復(fù)雜的基質(zhì)效應(yīng)，SERS的應(yīng)用主要是將貴金屬納米粒（如納米金顆粒、納米銀顆粒等）與信標(biāo)寡核苷酸單鏈相結(jié)合，將該結(jié)合物作為SERS的信號增強(qiáng)基底，從而實(shí)現(xiàn)食品等基質(zhì)中有害小分子物質(zhì)和真菌毒素的高靈敏檢測[39-42]。

Ganbold等[43]用Cy5熒光染料標(biāo)記OTA適配體，并吸附于納米銀顆粒表面，增強(qiáng)了拉曼光譜信號，當(dāng)環(huán)境體系中存在OTA時(shí)，就會與適配體結(jié)合發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，并使原先Cy5-OTA與納米銀顆粒之間的化學(xué)鍵斷裂，從而使拉曼光譜的信號強(qiáng)度下降。在濃度0.1～10 nmol·L^-1，隨著OTA濃度的上升，拉曼光譜的信號強(qiáng)度可以下降到40%。此外他們還采用殺鼠靈作為對照組來驗(yàn)證該方法的抗干擾能力，結(jié)果證明殺鼠靈不會干擾表面增強(qiáng)拉曼光譜的信號及強(qiáng)度。該方法的檢測限極低，能達(dá)到0.1 nmol·L^-1的水平，只需要極少的樣品量和極短的檢測時(shí)間（30 s）就可測得OTA的含量，因此，這在中藥材中OTA的現(xiàn)場實(shí)時(shí)快速檢測具有很大的應(yīng)用前景。

此外，表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)為中醫(yī)藥成分的鑒定提供了一種更為準(zhǔn)確、客觀、直接的鑒定手段。李寧等[44]將表面拉曼光譜技術(shù)與其他檢測手段和數(shù)據(jù)處理方法結(jié)合后成功鑒別出了單味中醫(yī)藥的成分、產(chǎn)地以及真?zhèn)?，在中醫(yī)藥煎劑成分的鑒定中也體現(xiàn)出了其優(yōu)越性。表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)作為一種新的鑒定手段，在中醫(yī)藥鑒定方面有著巨大的潛力，有望成為中醫(yī)藥鑒定的另一強(qiáng)大工具，見表3。

4 其他快速檢測方法

近紅外光譜成像（near-infrared hyperspectral imaging）是一種現(xiàn)代光譜技術(shù)，是將現(xiàn)代電子技術(shù)、光譜分析技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)和化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)相互結(jié)合的集合體[45]。近紅外光譜成像是近年來發(fā)展起來的一種新的分析手段，特別是在分析化學(xué)成分和污染物的空間分布測定方面，近紅外圖像技術(shù)具有實(shí)現(xiàn)快速、無損、原位、在線分析的特點(diǎn)。通過近紅外圖像不但能夠得到生物組織和化學(xué)成分的清晰輪廓和分布信息，而且還可以通過化學(xué)計(jì)量學(xué)方法實(shí)現(xiàn)對特定目標(biāo)成分的定性和定量分析[46]。

Senthilkumar T等[47]使用近紅外（NIR）高光譜成像系統(tǒng)對儲存的小麥中的白曲霉、青霉屬感染和赭曲霉毒素A污染進(jìn)行檢測研究。每兩周對真菌感染的樣品進(jìn)行成像，將從圖像數(shù)據(jù)獲得的三維超立方體轉(zhuǎn)換成二維數(shù)據(jù)。將主成分分析應(yīng)用于二維數(shù)據(jù)并基于最高因子載荷，1 280，1 300，1 350 nm被識別為有效波長。提取對應(yīng)于有效波長的6個(gè)統(tǒng)計(jì)特征和10個(gè)直方圖特征，應(yīng)用二次和馬氏判別分類器對其進(jìn)行線性測定。結(jié)果顯示所有3個(gè)分類器從健康內(nèi)核分離真菌感染的內(nèi)核分類準(zhǔn)確度大于90%。二次判別分類器為成對，雙向和六路分類模型提供了比線性和馬氏分類器更高的分類精度。赭曲霉毒素A污染的樣品除了對應(yīng)于真菌感染的2個(gè)有效波長之外，在1 480 nm具有獨(dú)特的顯著波長，僅在赭曲霉毒素A污染的樣品中鑒定在1 480 nm的峰。赭曲霉毒素A污染的樣品可以使用NIR高光譜成像系統(tǒng)以100%分類精度檢測。 NIR高光譜系統(tǒng)可以區(qū)分不同真菌感染階段和儲存小麥中不同水平的赭曲霉毒素A污染。

近紅外光譜技術(shù)以其速度快、操作簡單、效率高、無污染和成本低等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，它不但能分析與含氫基團(tuán)直接相關(guān)的有機(jī)物，而且在無機(jī)物的檢測上也有很多成功實(shí)例，但是其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。隨著近紅外光譜硬件設(shè)備成本的不斷降低，進(jìn)一步完善軟件的數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法，提高從復(fù)雜、重疊和變化的紅外光譜中提取有效信息的效率，增加光譜的信噪比，將其應(yīng)用于中藥中赭曲霉毒素A的檢測的前景將更加廣闊。

5 總結(jié)與展望

近些年，隨著色譜技術(shù)和液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的不斷升級和推廣，有關(guān)中藥材中真菌毒素，尤其是赭曲霉毒素A污染的報(bào)道逐年增加。液相及其質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)雖然相比過去的薄層色譜等技術(shù)在檢測時(shí)間上縮短了，但是由于其復(fù)雜的前處理過程，儀器無法隨身攜帶等缺陷，無法實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)快速的現(xiàn)場檢測。以抗體-抗原免疫反應(yīng)和適配體為基礎(chǔ)的OTA快速檢測技術(shù)可以填補(bǔ)這個(gè)技術(shù)空缺。本文綜述了可視化試紙條、流式微球技術(shù)、電化學(xué)傳感器、表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)等可實(shí)現(xiàn)儀器小型化、檢測快速化、操作簡單化的OTA檢測方法，同時(shí)這些方法充分顯示了快速檢測在檢測速度、靈敏度、檢測限上的優(yōu)勢。但是這些快速檢測方法或多或少存在著一些缺陷和不足，例如基于抗體的免疫法快速檢測，抗體的自身不穩(wěn)定性和繁瑣的制備方法阻礙了該方法的應(yīng)用普及性和準(zhǔn)確性，以及高生物親和力的納米材料的制備工藝還未成熟，從而增加了新型快速檢測技術(shù)的應(yīng)用成本。所以在未來，高親和力、穩(wěn)定性好的抗體體外快速制備技術(shù)是解決和推進(jìn)中藥材中OTA快速檢測技術(shù)障礙的有效途徑之一?；谶m配體的快速檢測方法中功能化磁球等納米材料的造價(jià)較昂貴，隨著工業(yè)化推進(jìn)和制備工藝的改善，利用其超低的檢測限和超強(qiáng)的去基質(zhì)干擾能力，有望代替現(xiàn)今抗體制備復(fù)雜且費(fèi)時(shí)的免疫檢測方法，若將這一模式轉(zhuǎn)移到中藥材中真菌毒素（如赭曲霉毒素A）的現(xiàn)場快速檢測上，可望實(shí)現(xiàn)中藥材中真菌毒素實(shí)時(shí)高通量的快速檢測。

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