白術(shù)多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響

李鵬　賀頌　朱鴻翔　徐圭?肖宇辰

【摘要】目的 研究中草藥白術(shù)多糖成分對(duì)正常小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。方法 分別以白術(shù)多糖濃度為125，250，500 mg/（kg·d）小鼠灌胃，對(duì)照組予以等量的生理鹽水，在連續(xù)灌胃30 d之后，通過血清抗體的測(cè)定、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)、脾臟以及相關(guān)臟器指數(shù)來觀察白術(shù)多糖在免疫調(diào)節(jié)上的作用。結(jié)果 在250～500 mg/（kg·d）劑量范圍之內(nèi)，尤其是在300 mg左右我們發(fā)現(xiàn)白術(shù)多糖在小鼠碳廓清指數(shù)一級(jí)Con A所誘導(dǎo)的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力有明顯的提高。結(jié)論 白術(shù)多糖對(duì)正常小鼠具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。

【關(guān)鍵詞】白術(shù)；多糖；免疫調(diào)節(jié)

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2016.32.0.01

多糖存在于動(dòng)植物中，是由單糖形成的天然高分子的化合物，近年來，許多國(guó)內(nèi)外的科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)動(dòng)植物的多糖及其多糖復(fù)合物在參與和介導(dǎo)細(xì)胞免疫和凋亡等調(diào)節(jié)上具有很大的作用。大量研究實(shí)驗(yàn)表明動(dòng)植物多糖具有免疫調(diào)節(jié)生物活性和抗腫瘤活性的作用[1-2]。主要是基于其毒性小，作用廣泛，以及功能較多，目前已成為醫(yī)藥界的熱門研究領(lǐng)域。然而白術(shù)作為最常用的中草藥，具有健脾胃腸、燥濕利水、益氣補(bǔ)中、安胎、止汗以及促進(jìn)血液循環(huán)之功效。本文就白術(shù)多糖的免疫學(xué)的研究領(lǐng)域進(jìn)一步的探索。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠是來自于昆明，雌雄并重兼用體重的范圍是在（21±2.1）g，由溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 試劑白術(shù)多糖

惠州市綠源保健品有限公司；靈芝多糖：南通市力健保健品有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備離心機(jī)

日本波速科技有限公司、HP CLASS100培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)來自江蘇安泰蘇凈集團(tuán)空氣技術(shù)有限公司、MK3553 酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀來自于Thermo Labsystems 公司；倒置顯微鏡來自浙江光電儀器科技公司；型號(hào)UV-1800 紫外-可見分光光度計(jì)韓國(guó)島津公司。

1.4 動(dòng)物分組

取雌雄并重昆明小鼠150只，按照隨機(jī)數(shù)字法進(jìn)行隨機(jī)分成3組，每組50只。實(shí)驗(yàn)方案：分為初次免疫和加強(qiáng)免疫；初次免疫即在實(shí)驗(yàn)的第一天在三組小鼠的大腿內(nèi)側(cè)腹股溝的皮下進(jìn)行注射相對(duì)于的抗原，對(duì)照組按照相對(duì)于的比例進(jìn)行生理鹽水的注射，排除其他的因素。1周后加強(qiáng)免疫，即和初次免疫相同。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第14天，進(jìn)行小鼠眼球的采血，并立即加入3 mL 0.1%碳酸鈉的溶液中，設(shè)定在波長(zhǎng)675 nm處進(jìn)行OD值的測(cè)定，同時(shí)以碳酸鈉溶液作空白對(duì)照。最后將小鼠進(jìn)行頸椎脫臼處理，分別稱取脾臟、肝臟的質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量[3-5]。

1.5 白術(shù)多糖對(duì)Con A誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)過程中，按照1.5節(jié)的方法對(duì)小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組并且進(jìn)一步的給藥，然后進(jìn)行無菌情況下取小鼠脾臟約5 g，放入預(yù)冷后的PBS溶液中，再將其搗碎，進(jìn)行上清溶液的吸取，放入離心機(jī)進(jìn)行1500 r/min離心。棄掉上清液，用1 mL無菌水重懸細(xì)胞沉淀以裂解紅細(xì)胞，靜置40 s之后，加入1.5%

NaCl溶液將其調(diào)整到等滲狀態(tài)。臺(tái)盼蘭染色計(jì)數(shù)，活細(xì)胞數(shù)大于 95%，將脾細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，實(shí)驗(yàn)孔加入10 μL 50 μg/mL ConA，對(duì)照孔加入

10 μLRPMI-1640培養(yǎng)液，然后放置于5% CO2培養(yǎng)箱時(shí)間為48 h，再者每孔加入20 μL 5 mg/mL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，加入異丙醇100 μL/孔，于5% CO2 37℃培養(yǎng)箱放置過夜后，最后用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)量各孔OD值，參考波長(zhǎng)為

630 nm、測(cè)定波長(zhǎng)為570 nm。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

在以上實(shí)驗(yàn)中，白術(shù)多糖組的校正碳廓清指數(shù)α要明顯的高于對(duì)照組，同時(shí)，250 mg，500 mg兩組數(shù)據(jù)要交對(duì)照組有顯著的差異（P<0.05），這就表示白術(shù)多糖能夠顯著的提高單核巨噬細(xì)胞的吞噬活性，同時(shí)增強(qiáng)小鼠的免疫能力，加速碳粒的清除。低劑量的白術(shù)多糖與空白對(duì)照有明顯的差異，表明白術(shù)多糖有一定的免疫作用，白術(shù)多糖的各組計(jì)量之間的的胸腺指數(shù)沒有顯著性差異（P>0.05）。

3 結(jié) 論

在本次的白術(shù)多糖實(shí)驗(yàn)過程中，并沒有發(fā)現(xiàn)白術(shù)多糖的高劑量對(duì)小鼠的免疫功能強(qiáng)于中低計(jì)量的情況，這個(gè)很可能是和多糖在量效之間有一定的關(guān)系，當(dāng)然還有和白術(shù)多糖分子有很大的關(guān)系，當(dāng)然上述的研究結(jié)果可以表明，白術(shù)多糖可以通過免疫調(diào)節(jié)的作用，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的活性，進(jìn)一步的提高免疫細(xì)胞在應(yīng)對(duì)抗原入侵時(shí)的抵抗力，能更好的發(fā)揮免疫的調(diào)節(jié)作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 胡啟明，梅余霞，梁運(yùn)祥.桑黃多糖體外免疫活性研究[J].食品科技，2013，38（9）：142-145.

[2] 呂 峰，林勇毅，陳代園.惹該仁活性多糖對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2013（6）：20-24.

[3] 徐賢柱，饒 華，蔡險(xiǎn)峰，等杜仲葉多糖提取及對(duì)小鼠免疫功能影響研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013（3）：541-542.

[4] 劉亞娟，陳賽娟，李海麗，等.枸杞多糖對(duì)生長(zhǎng)獺兔生產(chǎn)性能及血清生化指標(biāo)的影響[J].中國(guó)飼料，2013（20）：22-25.

[5] 尹美珍，胡 崗，李仲娟，等.艾葉多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)酶活性的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24（9）：2118-2120.

本文編輯：劉帥帥