PRAME、APPL1在原發(fā)性肺腺癌中的表達(dá)及臨床意義

王芳 包迪

PRAME、APPL1在原發(fā)性肺腺癌中的表達(dá)及臨床意義

王芳 包迪

目的 探討黑色素瘤特異性抗原(PRAME)、適應(yīng)性蛋白L1(Adaptor protein containing PH domain，APPL1)在原發(fā)性肺腺癌中的表達(dá)及臨床意義。方法 收集2014年2月至2015年12月期間被我院收治的52例原發(fā)性肺腺癌患者手術(shù)切除的肺腺癌組織和癌旁組織為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。采用RT-PCR技術(shù)檢測組織標(biāo)本中的PRAME、APPL1 mRNA表達(dá)量。結(jié)果 肺腺癌組織中PRAME表達(dá)水平低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺腺癌組織中APPL1表達(dá)水平高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著肺腺癌病例病理分期的升高、腫瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌組織中PRAME mRNA表達(dá)減弱，APPL1 mRNA表達(dá)增強(qiáng)，此外，肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與病例是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織，PRAME mRNA水平低于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織(P<0.05)。原發(fā)性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.412，P=0.007)。結(jié)論 PRAME在原發(fā)性肺腺癌組織中的表達(dá)水平低于癌旁組織，APPL1在原發(fā)性肺腺癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁組織。PRAME、APPL1的表達(dá)與原發(fā)性肺腺癌組織的病理分期、腫瘤體積、分化程度及是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

原發(fā)性肺腺癌；PRAME；APPL1；臨床病理

肺癌是常見的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在全世界惡性腫瘤中居前列[1-2]。原發(fā)性肺腺癌是肺癌的一種，在中國，其發(fā)病人數(shù)和死亡率逐年上升[3]。原發(fā)性肺腺癌早期臨床癥狀不明顯，其具有血行轉(zhuǎn)移早、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移早等特征，且對放化療敏感性差，目前手術(shù)治療是其治療的主要手段[4]。

黑色素瘤特異性抗原(PRAME)是在黑色素瘤組織中首先被發(fā)現(xiàn)，是腫瘤睪丸抗原家族成員[5]，適應(yīng)性蛋白L1(Adaptor protein containing PH domain，APPL1)是細(xì)胞內(nèi)的一種適應(yīng)性蛋白[6]。PRAME、APPL1兩種生化標(biāo)志物在惡性腫瘤組織中存在異常表達(dá)。本研究通過檢測原發(fā)性肺腺癌患者組織中PRAME、APPL1等指標(biāo)的表達(dá)水平，旨在探討PRAME、APPL1在原發(fā)性肺腺癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義。

資料與方法

一、一般資料

收集2014年2月至2015年12月期間被我院收治的52例原發(fā)性肺腺癌(診斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[7])患者手術(shù)切除的肺腺癌組織和癌旁組織為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本?；颊吣挲g45-80歲，平均年齡為59.61±8.79歲，體質(zhì)量指數(shù)為22.18±4.59 kg/m2；由我院病理科進(jìn)行病理活檢確診為原發(fā)性肺腺癌，52例原發(fā)性肺腺癌患者中，低分化22例，中高分化30例，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例；按照臨床分期的不同分為，Ⅰ-Ⅱ期30例，Ⅲ-Ⅳ期22例。均無飲酒史，其中6例有肺癌家族史，22例有吸煙史，患者手術(shù)前未接受放化療治療。本研究經(jīng)入組者簽署知情同意書，并獲我院倫理委員會審批通過。

二、標(biāo)本的采集及處理

原發(fā)性肺腺癌組織和癌旁組織標(biāo)本切除離體后立即投入液氮中，冷凍后儲存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

三、實(shí)驗(yàn)方法

采用購自于賽飛(中國)有限公司的9701梯度PCR儀行RT-PCR，檢測原發(fā)性肺腺癌組織和癌旁組織中PRAME、APPL1 mRNA的表達(dá)水平，以GAPDH為內(nèi)參PRAME上游引物為：5'TGCAGGCTCTCTATGTGGACTCT3'，下游引物為：5'TT'CATCACGTGCCTGAGCAA3'。APPL1上游引物為：5' TGAAGGTCGGAGTCAACGG3'，下游引物為：5' CTGGAAGATGGTGATGGGAT3'。PCR反應(yīng)步驟：94℃預(yù)變性3min；94℃變性20s，60℃退火30s，72℃延伸40s；35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、肺腺癌組織、癌旁組織中PRAME、APPL1 mRNA水平比較

肺腺癌組織中PRAME表達(dá)水平低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺腺癌組織中APPL1表達(dá)水平高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。(見表1)。

表1 肺腺癌組織、癌旁組織中PRAME、APPL1 mRNA水平比較

注：*P<0.05，與癌旁組織比較

二、不同臨床病理的原發(fā)性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平

肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與患者年齡、解剖部位無關(guān)，隨著肺腺癌病例病理分期的升高、腫瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌組織中PRAME mRNA表達(dá)減弱，APPL1 mRNA表達(dá)增強(qiáng)，此外，肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與病例是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織，PRAME mRNA水平低于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織，P<0.05。(見表2)。

三、相關(guān)性分析

原發(fā)性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.412，P=0.007)。

討 論

近年來原發(fā)性肺腺癌發(fā)病率和發(fā)病人數(shù)不斷攀升[8]。由于原發(fā)性肺腺癌對放化療敏感性較差，因此臨床上原發(fā)性肺腺癌仍然以手術(shù)治療為主。對于惡性腫瘤來說，普遍存在癌前病變、原位癌、腫瘤早期治療效果較好的現(xiàn)象，因此對原發(fā)性肺腺癌盡早發(fā)現(xiàn)、盡早治療對提高患者治療效果具有重要意義[9]。

PRAME是腫瘤睪丸抗原家族成員之一，具有能讓腫瘤溶解的功能。PRAME在多種腫瘤組織中有表達(dá)，同時(shí)也可表達(dá)于卵巢、腎上腺等正常組織中。目前已發(fā)現(xiàn)PRAME與兒童髓性白血病關(guān)系密切，但其與肺癌的關(guān)系尚不清楚[10]。APPL1是機(jī)體體內(nèi)的一種適應(yīng)性蛋白，可與膜受體結(jié)合，在體內(nèi)的諸多生物反應(yīng)過程中廣泛發(fā)揮作用[11]。APPL1在生化反應(yīng)過程中起銜接、調(diào)節(jié)的作用，同時(shí)可以介導(dǎo)脂聯(lián)素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[12-13]。有研究發(fā)現(xiàn)，PRAME、APPL1等生化標(biāo)志物在惡性腫瘤組織中可以異常表達(dá)[14-15]。本研究RT-PCR結(jié)果顯示，肺腺癌組織中PRAME表達(dá)水平低于癌旁組織(P<0.05)。肺腺癌組織中APPL1表達(dá)水平高于癌旁組織(P<0.05)。表明原發(fā)性肺腺癌組織中，PRAME低表達(dá)，而APPL1高表達(dá)。與相關(guān)研究[14-15]結(jié)果一致。

影響因素nPRAMEmRNAt值P值A(chǔ)PPL1mRNAt值P值年齡 ≥60歲2312．07±5．590．860．23125．41±6．810．910．196 <60歲2912．69±5．7123．98±6．34解剖部位 外周型3712．11±5．450．800．29425．64±6．840．870．196 中央型1512．69±5．6723．97±6．42病理分期 Ⅰ-Ⅱ期3015．32±6．074．810．00021．39±6．075．180．000 Ⅲ-Ⅳ期2211．07±5．5027．92±6．94腫瘤大小 >3cm1515．79±5．914．260．00027．91±6．865．300．000 ≤3cm3711．10±5．0721．17±6．64分化程度 低分化2211．07±5．094．410．00028．19±6．895．390．000 中高分化3015．37±6．0821．04±6．39淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有2910．88±5．045．170．00028．14±6．965．410．000 無2315．39±6．1221．01±6．41

為探討PRAME、APPL1在不同臨床病理肺癌組織中的表達(dá)情況，我們采用RT-PCR技術(shù)檢測了不同臨床病理組織中PRAME、APPL1的水平。檢測結(jié)果顯示，原發(fā)性肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與患者年齡、解剖部位無關(guān)，但隨著肺腺癌病例病理分期的升高、腫瘤大小的增加、分化程度的降低，肺腺癌組織中PRAME mRNA表達(dá)減弱，APPL1 mRNA表達(dá)增強(qiáng)。即PRAME、APPL1的表達(dá)水平與原發(fā)性肺腺癌的病理分期、病灶大小、分化程度密切相關(guān)。此外，我們在實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，肺腺癌組織中PRAME、APPL1 mRNA水平與病例是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織，PRAME mRNA水平低于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織(P<0.05)，APPL1 mRNA水平高于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺腺癌組織(P<0.05)。有學(xué)者在研究中也發(fā)現(xiàn)，PRAME、APPL1的表達(dá)與原發(fā)性肺腺癌分化程度分別呈正相關(guān)、負(fù)相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別呈負(fù)相關(guān)、正相關(guān)[14-15]。本研究結(jié)果與相關(guān)研究[14-15]結(jié)果一致。這表明PRAME、APPL1的異常表達(dá)可能參與了原發(fā)性肺腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，與患者病情惡化有關(guān)。這表明PRAME的表達(dá)減弱、APPL1的表達(dá)增強(qiáng)可能參與了原發(fā)性肺腺癌癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，與患者的預(yù)后存在一定的關(guān)系。

此外，我們在研究中還發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肺腺癌組織中PRAME、APPL1的表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)。這表明PRAME、APPL1在原發(fā)性肺腺癌的發(fā)病及進(jìn)展過程中可能共同起作用。PRAME的高表達(dá)對原發(fā)性肺腺癌的發(fā)病可能起抑制作用，而APPL1的高表達(dá)對原發(fā)性肺腺癌的發(fā)病可能起促進(jìn)作用。

綜上所述，PRAME在原發(fā)性肺腺癌組織中的表達(dá)水平低于癌旁組織，APPL1在原發(fā)性肺腺癌組織中的表達(dá)水平高于癌旁組織。PRAME、APPL1的表達(dá)與原發(fā)性肺腺癌組織的病理分期、腫瘤體積、分化程度及是否伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。PRAME、APPL1在原發(fā)性肺腺癌的發(fā)病、病情進(jìn)展、惡化過程中可能共同發(fā)揮作用。

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Expression of PRAME and APPL1 in primary lung adenocarcinoma and its clinical significance

WANGFang,BAODi
NorthBranchofXiangyangCentralHospital,Xiangyang,Hubei441000,China

Objective To study the expression of PRAME and APPL1 in primary lung adenocarcinoma and its clinical significance. Methods From February 2014 to December 2015 in our hospital, 52 cases of lung adenocarcinoma tissue and tissue adjacent to carcinoma specimens by surgical resection of primary lung adenocarcinoma patients were collected for experiment. The levels of PRAME and APPL1 mRNA of tissue samples were detected by RT-PCR technique. Results The expression level of PRAME in lung adenocarcinoma tissues was lower than in tissues adjacent to carcinoma (P<0.05). The expression level of APPL1 in lung adenocarcinoma tissue was higher than in tissues adjacent to carcinoma (P<0.05). With the increase of pathological stage of lung adenocarcinoma and tumor size and the decrease of differentiation degree, the expression of PRAME mRNA in lung adenocarcinoma tissues weakened, and APPL1 mRNA enhanced. In addition, the level of PRAME and APPL1 mRNA was related with whether the cases were complicated with lymph node metastasis or not. The level of PRAME mRNA was lower in patients associated with lymph node metastasis than in patients without lymph node metastasis (P<0.05), and APPL1 mRNA was higher in patients associated with lymph node metastasis than in patients without lymph node metastasis (P<0.05). In primary lung adenocarcinoma tissues, PRAME and APPL1 mRNA showed a negative correlation (r=-0.412,P=0.007). Conclusion PRAME expression in primary lung adenocarcinoma tissue is lower than tissue adjacent to carcinoma. APPL1 expression in primary lung adenocarcinoma tissue is higher than tissue adjacent to carcinoma. PRAME and APPL1 expression in primary lung adenocarcinoma tissue is related to the pathological staging, tumor size, degree of differentiation and whether associated with lymph node metastasis.

primary lung adenocarcinoma; PRAME; APPL1; clinical pathology

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.07.019

441000 湖北 襄陽，襄陽市中心醫(yī)院(湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院)腫瘤科

包迪，E-mail:75118300@qq.com

2016-11-04]