犢牦牛副傷寒性腹瀉的病原分離鑒定及耐藥性檢測(cè)

白海濤

（青海省玉樹(shù)州雜多縣畜牧獸醫(yī)站，雜多 815300）

犢牦牛副傷寒性腹瀉的病原分離鑒定及耐藥性檢測(cè)

白海濤

（青海省玉樹(shù)州雜多縣畜牧獸醫(yī)站，雜多 815300）

無(wú)菌采集玉樹(shù)州雜多縣部分腹瀉犢牦牛新鮮糞便及病死犢牦牛肝、肺及小腸內(nèi)容物樣品共10份，應(yīng)用常規(guī)的病原分離鑒定技術(shù)進(jìn)行腹瀉病原的分離與鑒定，最終確定病原體為沙門(mén)菌。同時(shí)隨機(jī)選取15種抗生素對(duì)分離菌株進(jìn)行了耐藥性檢測(cè)。結(jié)果顯示：分離株的耐藥情況十分嚴(yán)重，為避免新的耐藥菌株的產(chǎn)生，選用敏感藥物交替治療，并配合對(duì)癥治療和采取相應(yīng)的預(yù)防措施，最后有效地控制了疫情流行。

犢牦牛；副傷寒性腹瀉；病原；分離鑒定；耐藥性檢測(cè)

牛沙門(mén)菌病又稱(chēng)牛副傷寒，是由沙門(mén)菌引起的牛的一種急性、慢性消耗性傳染病，各年齡段和不同品種的牛均可感染，但牦牛更為易感，特別是以10～40日齡的犢牦牛多發(fā)，一般呈現(xiàn)散發(fā)或地方流行［1］，發(fā)病率達(dá)20%以上，死亡率5%～75%。該病以消化道和呼吸道感染為主要癥狀［2］，如犢牛發(fā)病后常出現(xiàn)腹瀉、體溫升高和呼吸困難；死后剖檢可見(jiàn)出血性、卡他性腸炎和間質(zhì)性肺炎。目前，沙門(mén)菌已成為僅次于致病性大腸埃希菌的犢牛腸道病原菌。2016年3月中旬，青海省玉樹(shù)州雜多縣一牧戶(hù)24頭初生犢牛中10頭先后出現(xiàn)以頑固下痢、迅速衰竭為主要癥狀的疾病，發(fā)病率41.67%；前后共死亡4頭，致死率40.0%，經(jīng)流行病學(xué)資料分析、病料采集與檢驗(yàn)，綜合診斷為犢牛副傷寒，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來(lái)源 無(wú)菌采集青海省玉樹(shù)州雜多縣部分腹瀉犢牦牛新鮮糞便及病死犢牦牛肝、肺及小腸內(nèi)容物樣品10份，置滅菌小試管中并編號(hào)，放4℃冰箱備用。

1.1.2 培養(yǎng)基及試劑 SS瓊脂平板、普通營(yíng)養(yǎng)肉湯、普通瓊脂斜面和生理鹽水均由雜多縣畜牧獸醫(yī)站實(shí)驗(yàn)室自制。葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、水楊苷、靛基質(zhì)、硫化氫、西蒙氏枸櫞酸鹽、硝酸鹽、尿素酶、MR、V－P和半固體等14種生化培養(yǎng)基均購(gòu)于北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任

1.1.3 藥敏紙片 丁胺卡那霉素(AN）、復(fù)達(dá)欣（CAZ）、強(qiáng)力霉素（DX）、紅霉素（E）、呋喃妥因（FT）、慶大霉素（GM10）、卡那霉素（K）、呋喃唑酮（LVP）、利福平（RA）、鏈霉素（S300）、復(fù)方新諾明（SXT）、四環(huán)素（TE）、妥布霉素（TM）、萬(wàn)古霉素（VA）、頭孢呋辛（XM）等15種藥敏紙片均購(gòu)于杭州微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 目的菌的分離 分別無(wú)菌剪取少許肝、肺等實(shí)質(zhì)臟器及勾取少許糞便無(wú)菌接種到普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)18～24 h后劃線種環(huán)于SS平板上，37℃溫箱培養(yǎng)并觀察菌落形態(tài)；同時(shí)進(jìn)行樣品的涂片或觸片，革蘭氏染色鏡檢。

1.2.2 目的菌的純化及移植 挑選SS平板上可疑菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢并進(jìn)行數(shù)次純化培養(yǎng)，最后將純化好的疑似沙門(mén)菌劃線接種于普通瓊脂斜面，37℃溫箱培養(yǎng)18～24 h后置4℃冰箱備用。

1.2.3 生化鑒定 將上述純化好的疑似沙門(mén)氏菌菌株分別無(wú)菌接種到上述14種生化培養(yǎng)基中，37℃溫箱培養(yǎng)24～48 h，觀察結(jié)果。

1.2.4 藥敏試驗(yàn) 將上述沙門(mén)菌分離株斜面用生理鹽水洗下后與麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷幔x取9×108活菌/mL濃度的菌懸液，用滅菌棉簽蘸取菌液后并在管內(nèi)壁上擠去多余菌液，均勻涂布MH（A）培養(yǎng)基表面3次，再分別依次貼上15種藥敏紙片，每塊平板貼3片，37℃培養(yǎng)18～24 h判定結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）藥敏紙片擴(kuò)散法法規(guī)。

2 結(jié)果

2.1 目的菌的培養(yǎng)特性及菌落形態(tài)觀察

在 SS培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成圓形、隆起、邊緣整齊、灰白色的菌落，菌落中心變黑，邊緣灰白色；在營(yíng)養(yǎng)肉湯中生長(zhǎng)較好，呈現(xiàn)均勻渾濁。挑取可疑菌落涂片、革蘭氏染色鏡檢，見(jiàn)與肝臟組織觸片染色鏡檢相同的兩端鈍圓、細(xì)長(zhǎng)的紅色小桿菌。

2.2 生化鑒定

詳見(jiàn)表1。

表1 沙門(mén)菌的生化結(jié)果

2.3 藥敏試驗(yàn) 用游標(biāo)卡尺測(cè)抑菌圈直徑大小，測(cè)3次取平均值，見(jiàn)表2。

表2 沙門(mén)菌的耐藥性檢測(cè)結(jié)果

2.4 防治

2.4.1 預(yù)防措施 對(duì)死亡犢牦牛采取深埋處理，同時(shí)用3%燒堿溶液消毒污染草地；為防止牦牛母子相互傳播，隔離腹瀉犢牦牛每天用0.1%高錳酸鉀水溶液對(duì)母牦牛乳頭消毒，而后人工擠奶再飼喂于犢牦牛。

2.4.2 藥物治療 筆者對(duì)分離獲得的沙門(mén)菌進(jìn)行了耐藥性檢測(cè)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取復(fù)方新諾明和鏈霉素交替治療犢牦牛副傷寒，取得了較為理想的治療效果，一周后腹瀉犢牦牛全部康復(fù)。具體治療方法：復(fù)方新諾明按犢牦牛體重70 mg/kg口服，首次劑量加倍，每日2次；鏈霉素肌肉注射，每次100萬(wàn)IU，每日2次；為緩解腹瀉脫水癥狀，用5%葡萄糖生理鹽水1 000～2 000 mL和5%碳酸氫鈉液50～150 mL靜脈滴注以補(bǔ)水補(bǔ)堿，每日2次。

3 討論

（1）由于雜多縣實(shí)驗(yàn)室條件有限，只能應(yīng)用傳統(tǒng)的病原分離鑒定技術(shù)對(duì)此次疑似副傷寒進(jìn)行病原的分離與鑒定。結(jié)果顯示，從腹瀉犢牦牛糞便和病死犢牛肝、肺中均分離獲得了疑似沙門(mén)菌，涂片（觸片）染色鏡檢結(jié)果符合沙門(mén)菌的染色與培養(yǎng)特性，通過(guò)對(duì)該分離菌的生化鑒定，最終鑒定為沙門(mén)菌。

（2）處于高寒地區(qū)的雜多縣在冬春季節(jié)的氣候變化不定，若初生犢牦牛長(zhǎng)時(shí)間處于不良外界條件下，極易導(dǎo)致?tīng)倥C(jī)體抵抗力降低誘發(fā)副傷寒的發(fā)生。為避免此現(xiàn)象的出現(xiàn)，應(yīng)加強(qiáng)妊娠牦牛和犢牛的飼養(yǎng)管理。讓犢牦牛在出生1 h內(nèi)吃上初乳，母牦牛在產(chǎn)后7～10 d內(nèi)不擠奶，奶全讓犢牛吃，然后再由每天擠1次向擠2次過(guò)渡。若在產(chǎn)犢期犢牦牛發(fā)生腹瀉或死亡現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)勤遷帳篷、更換牧地，保持高燥、清潔的小環(huán)境，適時(shí)處理病牛排出的糞便并搞好消毒工作。

（3）抗生素的耐藥性問(wèn)題現(xiàn)已成為當(dāng)今世界關(guān)注的焦點(diǎn)，由于我國(guó)是世界上濫用抗生素最為嚴(yán)重的國(guó)家之一，對(duì)此已經(jīng)有大量的文獻(xiàn)曾經(jīng)報(bào)道過(guò)。加之沙門(mén)菌的抗菌譜越來(lái)越廣，強(qiáng)度也越來(lái)越大［3－4］。為此，筆者選取15種常見(jiàn)抗生素對(duì)分離菌株進(jìn)行了耐藥性監(jiān)測(cè)。結(jié)果顯示，此次分離的沙門(mén)菌對(duì)鏈霉素和復(fù)方新諾明2種藥物敏感；對(duì)呋喃妥因、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素和頭孢呋辛等5種藥物中介；但對(duì)丁胺卡那霉素、復(fù)達(dá)欣、強(qiáng)力霉素、紅霉素、呋喃唑酮、利福平、四環(huán)素、萬(wàn)古霉素等8種藥物耐藥，平均耐藥率達(dá)53.33%（8/15），這可能與該區(qū)域長(zhǎng)期使用抗菌藥物有關(guān)。因此，在治療時(shí)筆者選擇鏈霉素和復(fù)方新諾明作為首選藥物對(duì)腹瀉犢牦牛進(jìn)行交替治療，同時(shí)還采取了對(duì)癥治療和相應(yīng)的預(yù)防措施，最后取得了較好的治療效果。

［1］ 蔡寶祥.實(shí)用家畜傳染病學(xué)［M］.4版.上海：上?？萍汲霭嫔?，2001.

［2］ 陳伯祥.牛副傷寒病原學(xué)及疫苗的研究現(xiàn)狀［J］.黃牛雜志，2001，27（6）：61-62.

［3］ 胡四海，周祖岳，李晉雄，等.93株沙門(mén)氏菌的菌型分布對(duì)抗生素的敏感性研究［J］.衡陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，28（2）：130-131.

［4］ 郭銳，盧玉蛾.117株鼠傷寒沙門(mén)氏菌的鑒定和抗生素敏感性測(cè)定［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，9（19）：1909-1910.

S823.7

A

2095-3887（2017）03-0046-03

10.3969/j.issn.2095－3887.2017.03.012

2017-03-26

白海濤（1981-），男，獸醫(yī)師，大學(xué)本科，主要從事畜牧技術(shù)推廣和動(dòng)物防疫檢疫工作。公司（批號(hào)：080606）。