仔豬致病性大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

趙美盈

（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青海西寧 810000）

仔豬致病性大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

趙美盈

（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青海西寧 810000）

從西寧市4個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)采集到50份仔豬黃、白痢腹瀉糞便樣品，總共分離出50株大腸桿菌，其中致病性大腸桿菌有10株，對(duì)該10株致病性大腸菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)對(duì)丁胺卡那霉素、菌必治和恩諾沙星等藥物敏感，對(duì)慶大霉素、四環(huán)素、氨芐青霉素、阿莫西林以及復(fù)方新諾明等藥物有耐藥性。臨床上選用敏感藥物防治仔豬大腸桿菌病，能夠有效控制疫病。

仔豬；致病性大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

仔豬大腸桿菌病是由大腸埃希氏桿菌引起的一種急性傳染病，可導(dǎo)致新生仔豬生長(zhǎng)發(fā)育不良或大批量死亡，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。根據(jù)仔豬發(fā)病日齡和臨床表現(xiàn)，能夠分為三種：仔豬黃?。ǘ喟l(fā)于1～3日齡仔豬，以排出黃色糞便和迅速死亡為特征）、仔豬白?。ǘ喟l(fā)于7～30日齡仔豬，以排出灰白色粥狀糞便為特征）和仔豬水腫病（常見于斷奶后1～2周的仔豬，發(fā)病突然，致死率高達(dá)100%）。本文對(duì)50份仔豬黃、白痢腹瀉糞便樣品進(jìn)行了細(xì)菌分離、生化試驗(yàn)、動(dòng)物致病性試驗(yàn)及藥物敏感性試驗(yàn)，旨在為防治仔豬大腸柑橘病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 病料采集

從西寧市4個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)（A、B、C、D）采集到50份仔豬（1～30日齡）腹瀉糞便樣品。其中A豬場(chǎng)15份樣品，B豬場(chǎng)23份樣品，C豬場(chǎng)6份樣品和D豬場(chǎng)6份樣品。

1.2 培養(yǎng)基和藥物

營(yíng)養(yǎng)肉湯、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、微量生化鑒定管以及藥敏紙片。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

50只體重約20g的小白鼠。

2 方法

2.1 細(xì)菌分離

取少量樣品，在麥康凱瓊脂平板上劃線進(jìn)行細(xì)菌分離，于37℃培養(yǎng)24h后觀察菌落的生長(zhǎng)情況，再?gòu)柠溈祫P瓊脂平板上挑取單個(gè)可疑菌落劃線于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于37℃培養(yǎng)24h后觀察培養(yǎng)基上的菌落特征，然后對(duì)可疑菌落涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

2.2 生化試驗(yàn)

對(duì)分離菌進(jìn)行腸桿菌常規(guī)生化試驗(yàn)，試驗(yàn)項(xiàng)目有：糖分解試驗(yàn)（甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖和麥芽糖），甲基紅試驗(yàn)（M-R試驗(yàn)），靛基質(zhì)試驗(yàn)，硫化氫試驗(yàn)，枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)，尿素酶試驗(yàn)以及動(dòng)力試驗(yàn)。

2.3 動(dòng)物致病性試驗(yàn)

將52只健康小白鼠分成試驗(yàn)組（50只）和對(duì)照組（2只）。采用分離菌肉湯培養(yǎng)物腹腔接種試驗(yàn)組小白鼠，按0.4ml/只，每株分離菌接種一只；采用無(wú)菌肉湯接種對(duì)照組小白鼠，按0.4ml/只。間隔2h觀察一次小白鼠發(fā)病死亡狀況，持續(xù)觀察2d，將病死小白鼠先用新潔爾滅浸泡，無(wú)菌剖檢，采集心血涂片，經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，并將病料接種再伊紅美藍(lán)瓊脂，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)4個(gè)豬場(chǎng)致死性大腸桿菌分離率。

2.4 藥敏試驗(yàn)

對(duì)分離的致病性大腸桿菌采用圓形紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 細(xì)菌分離結(jié)果

共分離出50株細(xì)菌。分離菌在麥康凱瓊脂平板上的菌落特征表現(xiàn)為濕潤(rùn)、邊緣整齊，隆起、圓形，呈紅色，中等大小；在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上的菌落特征表現(xiàn)為邊緣整齊、隆起、圓形，呈紫黑色、帶金屬光澤，中等大小。分離的菌株革蘭氏染色均為陰性，為無(wú)芽胞、無(wú)莢膜、兩端鈍圓的短桿菌，初步判定為大腸桿菌。

3.2 分離菌生化試驗(yàn)結(jié)果

所有分離菌株均可分解葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；均可分解甘露醇、麥芽糖和乳糖，產(chǎn)酸；部分菌株可以分解蔗糖，產(chǎn)酸。所有菌株經(jīng)動(dòng)力試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)以及甲基紅試驗(yàn)（M-R試驗(yàn)）為陽(yáng)性；經(jīng)尿素酶試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)和硫化氫試驗(yàn)為陰性，所有菌株生化反應(yīng)結(jié)果同大腸桿菌典型的生化反應(yīng)特性相一致，據(jù)此能夠判定分離菌株均為大腸桿菌。

3.3 動(dòng)物致病性試驗(yàn)結(jié)果（表1）

將分離菌株接種小白鼠約18h后，開始出現(xiàn)死亡，2d內(nèi)有10個(gè)菌株導(dǎo)致小白鼠死亡，接種其他菌株的小白鼠有輕微癥狀；對(duì)照組的2只小白鼠健活。

表1 仔豬大腸桿菌病原分離結(jié)果

3.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

10株致病性大腸桿菌對(duì)丁胺卡那霉素、菌必治和恩諾沙星敏感；對(duì)慶大霉素、四環(huán)素、氨芐青霉素、阿莫西林以及復(fù)方新諾明不敏感（耐藥率100%）；對(duì)環(huán)丙沙星、氟哌酸中度敏感；對(duì)鏈霉素、卡那霉素、痢特靈、頭孢氨芐及氯霉素有耐藥性。

4 小結(jié)與討論

（1）4個(gè)豬場(chǎng)50份糞便樣品均可分離出大腸桿菌，其中10株是致病性菌株。4個(gè)豬場(chǎng)（A、B、C、D）致病性大腸桿菌檢出率分別為20%、17.4%、33.3%和16.7%，由此可見導(dǎo)致仔豬發(fā)生腹瀉的原因部分是由致病性大腸桿菌直接感染引起，還有部分原因是豬場(chǎng)日常飼喂管理不當(dāng)，造成仔豬機(jī)體抗病力下降，由條件致病菌或其他病原體引起。

（2）藥敏試驗(yàn)結(jié)果能夠看出，大腸桿菌對(duì)多種藥物如鏈霉素、卡那霉素、氯霉素以及氨芐青霉素、阿莫西林等均產(chǎn)生了耐藥性，原因可能是豬場(chǎng)長(zhǎng)期使用抗生素防治疾病，或普遍使用抗生素作為飼料添加劑，以致大腸桿菌的耐藥性非常嚴(yán)重。為此，豬場(chǎng)防治疾病時(shí)應(yīng)首先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，采用對(duì)疾病敏感性強(qiáng)的藥物治療，盡量聯(lián)合交叉用藥，防止耐藥菌株的產(chǎn)生。

（3）臨床上仔豬大腸桿菌病的發(fā)生同仔豬機(jī)體抵抗力、環(huán)境衛(wèi)生條件、氣候變化、飼料營(yíng)養(yǎng)及飼養(yǎng)管理等因素密切相關(guān)，應(yīng)從堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、嚴(yán)格引種，注重母豬飼管、改善飼養(yǎng)條件，疫苗注射以及合理選擇用藥等方面綜合防控本病。

[1] 姚火春.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[2] 周華林，熊江林，王長(zhǎng)義，等.豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2009，36（1）：109-111.