• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    內(nèi)皮祖細(xì)胞攜帶KAI1/CD82基因?qū)θ吮茄拾┘?xì)胞裸鼠模型肺轉(zhuǎn)移的影響

    2017-06-05 15:06:03汪庚明徐洪波查從亮陳振東

    汪庚明,周 燕,孫 謙,徐洪波,查從亮,江 浩,項(xiàng) 平,陳振東

    內(nèi)皮祖細(xì)胞攜帶KAI1/CD82基因?qū)θ吮茄拾┘?xì)胞裸鼠模型肺轉(zhuǎn)移的影響

    汪庚明1,周 燕1,孫 謙1,徐洪波1,查從亮2,江 浩1,項(xiàng) 平3,陳振東4

    目的 探討KAI1/CD82基因在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用,分析轉(zhuǎn)染KAI1/CD82基因的內(nèi)皮祖細(xì)胞在鼻咽癌防治中的應(yīng)用價(jià)值。方法 應(yīng)用過表達(dá)KAI1/CD82基因的慢病毒轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮祖細(xì)胞,獲得高表達(dá)KAI1/CD82基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞(KAI1/CD82-EPCs);構(gòu)建荷人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,通過裸鼠尾靜脈注入KAI1/CD82-EPCs;觀察KAI1/CD82-EPCs對(duì)裸鼠腋下移植瘤及其轉(zhuǎn)移灶的影響。結(jié)果 EPCs組、空白組和KAI1/CD82-EPCs組成瘤時(shí)間(天)分別為14.70±3.81、15.05±3.85、14.20±3.55,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.771);EPCs組、空白組和KAI1/CD82-EPCs組移植瘤的重量(g)分別為1.388±0.204、1.487±0.223、1.485±0.234,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.274);EPCs組、空白組和KAI1/CD82-EPCs組肺轉(zhuǎn)移灶生成率分別為55%、45%和10%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005),三組肺臟的轉(zhuǎn)移灶數(shù)目分別為34.27±5.35、38.44±9.63、17.50±3.54,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007);注射KAI1/CD82-EPCs的實(shí)驗(yàn)組肺轉(zhuǎn)移灶KAI1/CD82呈陽性,EPCs組和空白組肺轉(zhuǎn)移灶KAI1/CD82呈陰性。結(jié)論 轉(zhuǎn)染KAI1/CD82基因的EPCs對(duì)鼻咽癌裸鼠模型的肺轉(zhuǎn)移具有抑制作用。

    鼻咽腫瘤;轉(zhuǎn)移抑制基因;KAI1/CD82;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞

    轉(zhuǎn)移是鼻咽癌治療失敗主要原因之一,在精確放療時(shí)代尤為突出。腫瘤細(xì)胞基因組是決定鼻咽癌轉(zhuǎn)移習(xí)性的根本因素,故探討轉(zhuǎn)移相關(guān)基因在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用顯得極為重要。內(nèi)皮祖細(xì)胞是一類能夠分化為成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞。臨床研究顯示內(nèi)皮祖細(xì)胞能夠定向歸巢于腫瘤組織[1],利用此特性可將內(nèi)皮祖細(xì)胞作為靶向運(yùn)輸至腫瘤組織的基因載體[2]。本實(shí)驗(yàn)擬建立荷人鼻咽癌細(xì)胞株裸鼠模型,構(gòu)建高表達(dá)KAI1/CD82基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞(KAI1/CD82-EPCs),鼻咽癌荷瘤小鼠尾靜脈注射KAI1/CD82-EPCs,分析KAI1/CD82基因?qū)υ撃P娃D(zhuǎn)移能力的影響;從而推斷KAI1/CD82基因在鼻咽癌轉(zhuǎn)移過程中的作用和價(jià)值,為臨床預(yù)測(cè)鼻咽癌患者是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、個(gè)體化治療以及應(yīng)用腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因進(jìn)行早期干預(yù)治療提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料 CNE-2Z人鼻咽癌細(xì)胞株購自上海優(yōu)選公司;內(nèi)皮祖細(xì)胞在本課題組前期研究中獲得,經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞儀表型鑒定及雙熒光染色鑒定;BALB/c-nu雌性裸鼠60只,限齡4~6周,購自南京斯科瑞公司;過表達(dá)KAI1/CD82基因的慢病毒,購自上海吉滿基因公司。

    1.2 主要試劑 RPMI 1640培養(yǎng)基購自上海生工公司,凝聚胺(Polybrene)購自上海博普公司,四甲基乙二胺(TEMED)購自美國Sigma公司,KAI1/CD82抗體購自美國BD公司。

    1.3 方法

    1.3.1 過表達(dá)KAI1/CD82基因的慢病毒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細(xì)胞 在進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染前18~24 h,將貼壁的內(nèi)皮祖細(xì)胞以每孔1×105鋪到24孔板中,使細(xì)胞在慢病毒轉(zhuǎn)染時(shí)的數(shù)量每孔約2×105。第2天用2 mL含6 μg/mL的Polybrene新鮮培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基,并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)得到最適MOI值(50)作為標(biāo)準(zhǔn),加入對(duì)應(yīng)的病毒懸液,37 ℃孵育。4 h后加入2 mL新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h,使用新鮮培養(yǎng)基替換原含病毒的培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率,可見熒光表達(dá)明顯,72 h后顯示熒光表達(dá)率更高。在轉(zhuǎn)染3天后,使用嘌呤霉素(2.5 μg/μL)進(jìn)行篩選,在篩選6天后細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率可達(dá)90%以上。

    1.3.2 過表達(dá)KAI1/CD82基因的慢病毒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細(xì)胞后行Western blot檢測(cè) 根據(jù)KAI1/CD82基因的分子量配制5%濃縮膠和10%分離膠;將1×電泳緩沖液加入電泳池,取10 μL已煮過的蛋白,向泳道加入。將濃縮膠電壓設(shè)置為70 V,分離膠電壓設(shè)置為100 V,電泳,至溴酚藍(lán)達(dá)凝膠底邊緣處時(shí)停止,于凝膠下緣切角處做標(biāo)記,使用超純水沖洗,再在常溫下用考馬斯亮藍(lán)緩慢振蕩染色,2 h后用超純水清洗,再用脫色液浸泡凝膠,更換3~5次脫色液后蛋白條帶變清晰。轉(zhuǎn)膜:電泳結(jié)束后根據(jù)預(yù)染Marker的位置,裁取目的蛋白及內(nèi)參,并放轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡。使用轉(zhuǎn)膜緩沖液浸泡剪好的硝酸纖維素膜(NC膜),約10 min,再由陰極到陽極的順序放纖維墊-濾紙-凝膠-NC膜-濾紙-纖維墊,將電泳槽放在冰浴中,開始電泳,設(shè)置80 mA的恒流,時(shí)間110 min。封閉:取膜,并用5%脫脂牛奶浸潤NC膜,并置搖床上緩慢搖晃約1 h。孵育一抗:用TBST稀釋KAI1/CD82一抗后將NC膜封閉于塑料袋中,并于37 ℃水浴箱1 h后4 ℃冰箱過夜,次日再置于37 ℃水浴箱中,經(jīng)40 min孵育,再置搖床搖晃20 min。經(jīng)4次TBST液洗膜后孵育二抗:按1 ∶3 000的比例用TBST液稀釋辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗,P膜封閉于塑料袋中,置于水浴箱孵育,37 ℃ 30 min,搖晃30 min。將底物顯色劑滴與P膜上,在經(jīng)曝光、顯影、掃描后得所需蛋白質(zhì)條帶。用同樣的方法孵育內(nèi)參抗體并得到所需的蛋白質(zhì)條帶。

    1.3.3 構(gòu)建荷人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型 將裸鼠用隨機(jī)數(shù)字法分成3組(A、B、C),每組20只,使用0.2 mL的CNE-2Z細(xì)胞株腋下注射預(yù)養(yǎng)的60只裸鼠。接種后,密切觀察裸鼠變化,記錄成瘤時(shí)間。在裸鼠接種腫瘤后一周,采用裸鼠尾靜脈直接注射法給予干預(yù)。具體分組如下:A組為EPCs組;B組為空白組;C組為KAI1/CD82-EPCs組。

    當(dāng)裸鼠出現(xiàn)反應(yīng)遲緩、進(jìn)食量下降、消瘦等情況后,以頸椎脫臼方式處死。處死裸鼠后,應(yīng)立即解剖,完整取其腋下移植瘤、肝臟及肺組織,并將移植瘤稱重記錄。同時(shí)將肺及肝組織取出后先放置Bouin液中固定,待2天后觀察肺部轉(zhuǎn)移灶已顯示為白色,而肝組織未見明顯轉(zhuǎn)移灶。顯微鏡下觀察肺組織轉(zhuǎn)移灶的大小,并同時(shí)記錄數(shù)目。將浸泡于Bouin液中的肺組織制成石蠟切片后,經(jīng)HE染色,顯微鏡下觀察,并對(duì)各組裸鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

    1.3.4 免疫組化 取KAI1/CD82-EPCs組裸鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移灶,行免疫組化SP法染色。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋,常規(guī)4 μm厚連續(xù)切片,分別行HE及免疫組化染色。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。陽性染色為細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜被染成棕黃色。采取二次計(jì)分法,具體如下:每張切片選擇5個(gè)高倍視野,首先陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度由強(qiáng)至弱分別計(jì)分,深棕黃色或棕褐色計(jì)為3分、棕黃色計(jì)為2分、淡黃色計(jì)為1分、無著色計(jì)為0分;再將陽性細(xì)胞百分比計(jì)分,采用高倍視野隨機(jī)計(jì)數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞所占比例,無陽性細(xì)胞為0分,≤10%陽性細(xì)胞為1分,11%~50%陽性細(xì)胞為2分,51%~75%陽性細(xì)胞為3分,>75%陽性細(xì)胞為4分。以陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)得分的乘積作為結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),其中≤1分為陰性,>1分則為陽性。

    2 結(jié)果

    2.1 轉(zhuǎn)染KAI1/CD82基因的人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞及行Western blot檢測(cè)

    2.1.1 慢病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞后形態(tài)學(xué)觀察 將過表達(dá)KAI1/CD82基因的慢病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞后,在熒光顯微鏡下可見其攜帶的綠色熒光蛋白的內(nèi)皮祖細(xì)胞(圖1)。

    圖1 轉(zhuǎn)染KAI1/CD82基因的內(nèi)皮祖細(xì)胞

    2.1.2 過表達(dá)KAI1/CD82基因的慢病毒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細(xì)胞后Western blot檢測(cè)結(jié)果 應(yīng)用Western blot檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞內(nèi)KAI1/CD82蛋白含量,同時(shí)以β-actin作為內(nèi)參,經(jīng)凝膠圖象處理系統(tǒng)分析后進(jìn)行比較,可見KAI1/CD82蛋白在KAI1/CD82-EPCs組中表達(dá)最高(圖2)。

    圖2 Western blot法檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞內(nèi)KAI1/CD82的表達(dá)

    2.2 人鼻咽癌裸鼠移植瘤腋下成瘤時(shí)間及成瘤重量 裸鼠腋下接種人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞株后均成瘤,成瘤率為100%。A、B、C組成瘤時(shí)間(天)分別為14.70±3.81、15.05±3.85、14.20±3.55,三組數(shù)據(jù)行方差分析,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.261,P=0.771);A、B、C組移植瘤的重量(g)分別為1.388±0.204、1.487±0.223、1.485±0.234,三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.325,P=0.274,圖3)。

    2.4 鏡下觀察

    2.4.1 裸鼠腋下移植瘤HE染色 裸鼠腋下移植瘤HE染色切片在鏡下顯示為腫瘤細(xì)胞核大而深染,排列紊亂,核仁清晰,可見病理核分裂象(圖4)。

    2.4.2 裸鼠肺轉(zhuǎn)移灶HE染色 裸鼠肺轉(zhuǎn)移灶經(jīng)HE染色,在鏡下可見腫瘤細(xì)胞核大深染,且排列紊亂,核仁清晰,見病理核分裂象(圖5)。

    2.4.3 KAI1/CD82-EPCs組、EPCs組和空白組肺轉(zhuǎn)移灶免疫表型 取KAI1/CD82-EPCs組裸鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移灶,行免疫組化染色,結(jié)果顯示KAI1/CD82呈陽性(圖6)。EPCs組和空白組肺轉(zhuǎn)移灶行免疫組化染色,結(jié)果顯示KAI1/CD82呈陰性。

    ③④⑤⑥

    圖3 裸鼠腋下移植瘤 圖4 裸鼠腋下移植瘤HE染色 圖5 裸鼠肺轉(zhuǎn)移灶HE染色 圖6 KAI1/CD82-EPCs組肺轉(zhuǎn)移灶KAI1/CD82呈陽性,SP法

    3 討論

    腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是臨床治療中的較大阻礙,鼻咽癌治療失敗的患者中絕大多數(shù)伴轉(zhuǎn)移,然而目前臨床應(yīng)對(duì)鼻咽癌轉(zhuǎn)移的有效方法仍十分匱乏。因此,分析如何降低進(jìn)而控制轉(zhuǎn)移的發(fā)生率是當(dāng)今探求鼻咽癌療效提升的關(guān)鍵。

    KAI1基因是1995年由Dong等[3]克隆的特異性腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。由于KAI1編碼的產(chǎn)物與CD82完全相同,故將其并稱為KAI1/CD82基因。人類KAI1/CD82基因位于染色體11p11.2上,該基因全長(zhǎng)約80 kb,KAI1/CD82基因編碼蛋白由267氨基酸殘基組成[3],屬于跨膜四超蛋白家族成員之一。研究表明,KAI1/CD8基因表達(dá)下調(diào)或缺失與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)[4-6]。

    內(nèi)皮祖細(xì)胞又稱為成血管細(xì)胞,參與絕大多數(shù)的血管新生。最近也有不少臨床研究證實(shí)內(nèi)皮祖細(xì)胞在人類惡性腫瘤血管形成中的作用。內(nèi)皮祖細(xì)胞在細(xì)胞因子及相關(guān)受體的刺激下,向腫瘤組織特異性錨定、進(jìn)入腫瘤組織并參與腫瘤血管形成,這一特性為定位腫瘤病灶及發(fā)現(xiàn)治療物質(zhì)的新載體提供了一定的方向。

    基于腫瘤的歸巢性,作為靶向載體的內(nèi)皮祖細(xì)胞可為腫瘤治療提供藥物。內(nèi)皮祖細(xì)胞能促進(jìn)血管生成,其作為載體治療腫瘤,很多質(zhì)疑也就隨之而來:注入內(nèi)皮祖細(xì)胞,它是否會(huì)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)?該作用是否會(huì)超越它的治療作用?Muta等[7]在空白組注射Walker256腫瘤的小鼠,由于內(nèi)皮祖細(xì)胞促進(jìn)腫瘤血管生產(chǎn),腫瘤血液供應(yīng)增加導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。隨后轉(zhuǎn)染IL-12-EPCs注射同樣的小鼠模型,由于其分泌的IL-12強(qiáng)烈地激活NK細(xì)胞和TC細(xì)胞,扼制腫瘤的發(fā)展,抵消內(nèi)皮祖細(xì)胞的促進(jìn)腫瘤作用。因此,研究者認(rèn)為轉(zhuǎn)染基因的內(nèi)皮祖細(xì)胞可作為一種腫瘤特異性藥物傳遞系統(tǒng)。使用血管內(nèi)皮祖細(xì)胞作為基因治療的載體將成為腫瘤一種新的療法。

    很多文獻(xiàn)報(bào)道內(nèi)皮祖細(xì)胞可作為腫瘤的靶向治療中的生物基因載體[8-11],并且選用靜脈注入的方式,藥物可以準(zhǔn)確快速地到達(dá)腫瘤區(qū)。由于血液循環(huán)過程損耗量少,局部藥物濃度高,從而達(dá)到較好地控制腫瘤的效果。

    本實(shí)驗(yàn)中構(gòu)建高表達(dá)KAI1/CD82-EPCs組,注入鼻咽癌裸鼠尾靜脈,觀察KAI1/CD82-EPCs組顯著影響人鼻咽癌裸鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移灶的生成率,其肺轉(zhuǎn)移率僅為10%,顯著低于EPCs組和空白組;KAI1/CD82-EPCs組裸鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移灶免疫組化標(biāo)記KAI1/CD82呈陽性;在EPCs和空白組中,KAI1/CD82呈陰性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示內(nèi)皮祖細(xì)胞可作為基因的有效載體趨向腫瘤區(qū),并發(fā)揮抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的重要作用,攜帶KAI1/CD82基因的EPCs有望成為鼻咽癌治療的新方法。

    [1] Su Y, Zheng L, Wang Q,etal. Quantity and clinical relevance of circulating endothelial progenitor cells in human ovarian cancer[J]. J Exp Clin Cancer Res, 2010,29(1):27-34.

    [2] Janic B, Arbab A S. The role and therapeutic potential of endothelial progenitor cells in tumor neovascularization[J]. Scientific World Journal, 2010,10(1100):1088-1099.

    [3] Dong J T, Lamb P W, Rinker-Schaeffer C W,etal. KAI1, a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome 11p11.2[J]. Science, 1995,268(5212):884-886.

    [4] Liu X, Guo X, Li H,etal. Src/STAT3 signaling pathways are involved in KAI1-induced downregulation of VEGF-C expression in pancreatic cancer[J]. Mol Med Rep, 2016,13(6):4774-4778.

    [5] Singh R, Bhatt M L, Singh S P,etal. Expression levels of tetraspanin KAI1/CD82 in breast cancers in North Indian females[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2016,17(7):3431-3436.

    [6] Gong X, Tao Y, Zhou L,etal. Expressions of Snail, Slug and KAI1 proteins in cervical carcinoma and their clinicopathological significance[J]. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2015,35(12):1733-1738.

    [7] Muta M, Matsumoto G, Hiruma K,etal. Study of cancer gene therapy using IL-12-secreting endothelial progenitor cells in a rat solid tumor model[J]. Oncol Rep, 2003,10(6):1765-1769.

    [8] Wang X Y, Ju S, Li C,etal. Non-invasive imaging of endothelial progenitor cells in tumor neovascularization using a novel dual-modality paramagnetic/near-infrared fluorescence probe[J]. PLoS One, 2012,7(11):e50575-e50587.

    [9] 王 鈜,王春平,畢京峰,等. 攜帶干擾素基因的內(nèi)皮祖細(xì)胞靶向抑制腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2013,21(3):495-498.

    [10] Varma N R, Janic B, Iskander A S,etal. Endothelial progenitor cells (EPCs) as gene carrier system for rat model of human glioma[J]. PLoS One, 2012,7(1):e30310-e30321.

    [11] Ammendola M, Leporini C, Luposella M,etal. Targeting endothelial progenitor cells in cancer as a novel biomarker and anti-angiogenic therapy[J]. Curr Stem Cell Res Ther, 2015,10(2):181-187.

    Effect of KAI1/CD82-expressing EPCs on lung metastasis of a xenograft mouse model of human nasopharyngeal carcinoma

    WANG Geng-ming1, ZHOU Yan1, SUN Qian1, XU Hong-bo1, ZHA Cong-liang2, JIANG Hao1, XIANG Ping3, CHEN Zhen-dong4

    (1DepartmentofRadiotherapy,3CentralLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,Bengbu233000,China;2DepartmentofRadiotherapy,TonglingPeople’sHospital,Tongling244000,China;4DepartmentofOncology,theSecondAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230601,China)

    Purpose To clarify the role of KAI1/CD82 in metastasis of nasopharyngeal carcinom and to evaluate the clinical efficacy of KAI1/CD82-expressing EPCs in the prevention of nasopharyngeal carcinoma. Method Umbilical vein-derived EPCs were infected with KAI1/CD82-expressing lenti-virus to get a KAI1/CD82-overexpressing EPC cell line (KAI1/CD82-EPCs). A xenograft mouse model of human nasopharyngeal carcinoma was established, and KAI1/CD82-EPCs were injected through the tail vein. The effect of the KAI1/CD82-EPCs on growth and metastasis of the xenograft was observed. Results Time required for tumor formation was 14.70±3.81, 15.05±3.85, 14.20±3.55 days respectively for the EPCs, EPCs-NC, and KAI1/CD82-EPCs groups, with no significant difference among the three groups (P=0.771). Weight of the xenograft was (1.388±0.204) g, (1.487±0.223) g, (1.485±0.234) g respectively for the EPCs, EPCs-NC, and KAI1/CD82-EPCs groups, with no significant difference (P=0.274). Rate of lung metastasis was 55%, 45% and 10% for the EPCs, EPCs-NC, and KAI1/CD82-EPC groups, and the difference was significant (P=0.005). Number of metastatic lesions was 34.27 ± 5.35, 38.44 ± 9.63, 17.50 ± 3.54 for the three groups, and the difference was also significant (P=0.007). Immunohistochemistry indicated positive KAI1/CD82 expression in metastatic lesion of the KAI1/CD82-EPCs group, but no KAI1/CD82 expression in the EPCs group or EPCs-NC group. Conclusion KAI1/CD82-expressing EPCs inhibits lung metastasis of the xenograft mouse model of human nasopharyngeal carcinoma.

    nasopharyngeal neoplasm;metastasis suppressor gene; KAI1/CD82; endothelial progenitor cell

    時(shí)間:2017-3-16 14:23

    http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170316.1423.012.html

    安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)研究(KJ2015B091by)、蚌埠醫(yī)學(xué)院院級(jí)科研課題(BY0925)

    1蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤放療科、3中心試驗(yàn)室,蚌埠 233000

    2銅陵市人民醫(yī)院放療科,銅陵 244000

    汪庚明,女,博士,主治醫(yī)師。E-mail: lansefeidian777@163.com

    R 739.62

    A

    1001-7399(2017)03-0287-05

    10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.012

    接受日期:2017-01-18

    4安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科,合肥 230601

    午夜影院日韩av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 老女人水多毛片| 成人国产综合亚洲| eeuss影院久久| 国产精品三级大全| 亚洲人成伊人成综合网2020| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 麻豆成人av在线观看| www日本黄色视频网| 丰满乱子伦码专区| 午夜精品久久久久久毛片777| 级片在线观看| 欧美区成人在线视频| 久久国产乱子免费精品| 综合色av麻豆| 麻豆成人午夜福利视频| 看免费av毛片| 免费av不卡在线播放| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产私拍福利视频在线观看| 99riav亚洲国产免费| 精品久久久久久成人av| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久这里只有精品中国| 欧美成人一区二区免费高清观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 亚洲熟妇熟女久久| 国产成人aa在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 在线a可以看的网站| 亚洲片人在线观看| 久久久久国内视频| 成人美女网站在线观看视频| 午夜福利高清视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产人妻一区二区三区在| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品久久久久久久电影| 精品午夜福利在线看| 久久久久九九精品影院| 国产探花在线观看一区二区| 国产高潮美女av| 欧美黄色片欧美黄色片| 最后的刺客免费高清国语| 国产v大片淫在线免费观看| 国产在线男女| 久久久久亚洲av毛片大全| 波多野结衣高清作品| 中亚洲国语对白在线视频| 国产单亲对白刺激| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲综合色惰| 午夜老司机福利剧场| 精品日产1卡2卡| 搞女人的毛片| 亚洲精品成人久久久久久| 中文字幕熟女人妻在线| 最新在线观看一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 精品人妻1区二区| 波多野结衣高清作品| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 天堂√8在线中文| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产精品电影一区二区三区| av在线观看视频网站免费| 舔av片在线| 在线看三级毛片| 久久久久免费精品人妻一区二区| www日本黄色视频网| 久久久久久久精品吃奶| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 在线观看av片永久免费下载| 久久久久久久午夜电影| xxxwww97欧美| 国产探花极品一区二区| 亚洲激情在线av| 男人的好看免费观看在线视频| 如何舔出高潮| 99精品在免费线老司机午夜| 真实男女啪啪啪动态图| 最近最新中文字幕大全电影3| netflix在线观看网站| 免费av不卡在线播放| 精品人妻1区二区| 久久中文看片网| 天美传媒精品一区二区| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲avbb在线观看| 91在线观看av| 国产一区二区三区视频了| 美女免费视频网站| 亚洲内射少妇av| 欧美黑人巨大hd| 成年免费大片在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品av视频在线免费观看| 97热精品久久久久久| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美zozozo另类| 日韩欧美在线二视频| 国产精品1区2区在线观看.| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 天天一区二区日本电影三级| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产精品野战在线观看| 日韩中字成人| 亚洲精品久久国产高清桃花| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 此物有八面人人有两片| 99久久无色码亚洲精品果冻| 夜夜躁狠狠躁天天躁| ponron亚洲| 99国产综合亚洲精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产黄片美女视频| 国产黄a三级三级三级人| x7x7x7水蜜桃| 亚洲欧美日韩东京热| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲成av人片在线播放无| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲精品在线美女| 久久久成人免费电影| 俺也久久电影网| 99精品在免费线老司机午夜| 在线观看一区二区三区| a在线观看视频网站| 免费观看精品视频网站| 国产精品影院久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 午夜日韩欧美国产| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜精品在线福利| 亚洲国产精品合色在线| 久久精品影院6| 99热6这里只有精品| 国内精品一区二区在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 久久久国产成人精品二区| 伦理电影大哥的女人| 久久中文看片网| 午夜激情欧美在线| 在线观看66精品国产| 精品午夜福利在线看| 99久久精品国产亚洲精品| 国产黄片美女视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 高清在线国产一区| 成人毛片a级毛片在线播放| 深爱激情五月婷婷| 亚洲在线观看片| 午夜免费成人在线视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日韩大尺度精品在线看网址| 3wmmmm亚洲av在线观看| 一级作爱视频免费观看| 国产精品亚洲美女久久久| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 欧美乱妇无乱码| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 国产亚洲欧美98| 国产精品98久久久久久宅男小说| a级毛片a级免费在线| 成熟少妇高潮喷水视频| av在线蜜桃| 18禁在线播放成人免费| 成人美女网站在线观看视频| 丁香欧美五月| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久精品国产亚洲av天美| 三级国产精品欧美在线观看| 99国产综合亚洲精品| 午夜久久久久精精品| 日本免费一区二区三区高清不卡| 日韩欧美精品免费久久 | 俄罗斯特黄特色一大片| 怎么达到女性高潮| 精品久久久久久久久亚洲 | 国产真实乱freesex| 欧美日本视频| 一a级毛片在线观看| 免费大片18禁| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 欧美日本亚洲视频在线播放| 成人性生交大片免费视频hd| 欧美日韩综合久久久久久 | 精品久久久久久久末码| 国产午夜精品论理片| 丰满人妻一区二区三区视频av| 三级毛片av免费| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲av电影在线进入| 亚洲国产精品久久男人天堂| 最好的美女福利视频网| 1024手机看黄色片| 婷婷精品国产亚洲av| 色哟哟·www| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 国模一区二区三区四区视频| 搞女人的毛片| a级毛片a级免费在线| 国产av一区在线观看免费| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲最大成人手机在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| АⅤ资源中文在线天堂| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美bdsm另类| 亚洲五月婷婷丁香| 伦理电影大哥的女人| 成人特级av手机在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 不卡一级毛片| 十八禁网站免费在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久草成人影院| 欧美乱色亚洲激情| 国产野战对白在线观看| 99国产综合亚洲精品| 又爽又黄无遮挡网站| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文字幕免费在线视频6| 国产乱人伦免费视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日本一本二区三区精品| 国产一区二区三区视频了| 少妇的逼好多水| 一进一出抽搐动态| 9191精品国产免费久久| 精品久久久久久久久av| 国产精品一区二区免费欧美| 国产主播在线观看一区二区| 午夜激情欧美在线| 一进一出抽搐gif免费好疼| 最近最新免费中文字幕在线| 黄色配什么色好看| 九九热线精品视视频播放| 亚洲天堂国产精品一区在线| 热99在线观看视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 神马国产精品三级电影在线观看| 能在线免费观看的黄片| 全区人妻精品视频| 男女视频在线观看网站免费| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久精品综合一区二区三区| 久久久精品大字幕| 亚洲,欧美精品.| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲 国产 在线| 日本一二三区视频观看| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 看片在线看免费视频| 亚洲激情在线av| 亚洲一区高清亚洲精品| 此物有八面人人有两片| 国产麻豆成人av免费视频| 在线观看免费视频日本深夜| 51午夜福利影视在线观看| 丁香六月欧美| 天堂动漫精品| 99热这里只有是精品50| 免费av毛片视频| 久久久国产成人精品二区| 日韩免费av在线播放| 午夜免费激情av| 白带黄色成豆腐渣| 69人妻影院| 亚洲午夜理论影院| 国产av不卡久久| 国产av一区在线观看免费| 久久国产乱子免费精品| 欧美3d第一页| 久久人人精品亚洲av| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲成人久久性| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 免费av观看视频| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 国产探花在线观看一区二区| 长腿黑丝高跟| 亚洲在线自拍视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品永久免费网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 如何舔出高潮| www日本黄色视频网| 国产视频内射| 久久人人精品亚洲av| 国产成人av教育| 国产极品精品免费视频能看的| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久国产精品影院| www.www免费av| 激情在线观看视频在线高清| 两个人视频免费观看高清| 色5月婷婷丁香| 九九热线精品视视频播放| 脱女人内裤的视频| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲精品色激情综合| 日本三级黄在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 日韩中字成人| 亚洲久久久久久中文字幕| 97人妻精品一区二区三区麻豆| aaaaa片日本免费| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲人与动物交配视频| 好男人电影高清在线观看| 久久久国产成人免费| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲色图av天堂| 18禁在线播放成人免费| 亚洲,欧美,日韩| 深爱激情五月婷婷| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩av在线大香蕉| 亚洲专区国产一区二区| 午夜免费激情av| 女同久久另类99精品国产91| 午夜福利视频1000在线观看| 我的老师免费观看完整版| 日本一二三区视频观看| 国产精品一区二区性色av| 午夜福利视频1000在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 禁无遮挡网站| 日本黄大片高清| 亚洲五月婷婷丁香| 免费在线观看影片大全网站| 国产淫片久久久久久久久 | 午夜老司机福利剧场| 一级黄色大片毛片| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 精品久久久久久,| 欧美3d第一页| 欧美bdsm另类| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 国产精品电影一区二区三区| 综合色av麻豆| 搞女人的毛片| 老鸭窝网址在线观看| 黄色日韩在线| 免费观看的影片在线观看| 亚洲电影在线观看av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 能在线免费观看的黄片| 国产男靠女视频免费网站| 很黄的视频免费| 免费看a级黄色片| 99久久精品国产亚洲精品| 国产三级在线视频| 色av中文字幕| 99久久精品热视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产av麻豆久久久久久久| 丰满乱子伦码专区| 国产熟女xx| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产精品国产高清国产av| 亚洲黑人精品在线| 全区人妻精品视频| 国产人妻一区二区三区在| 日韩人妻高清精品专区| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久久久精品国产欧美久久久| 免费av毛片视频| 国产高清三级在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产在线男女| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美日韩黄片免| 能在线免费观看的黄片| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产中年淑女户外野战色| 一区二区三区激情视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 99在线人妻在线中文字幕| 国产亚洲欧美98| 日韩欧美 国产精品| 久久午夜福利片| 特级一级黄色大片| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品久久久久久久久久久久久| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一区二区三区激情视频| 色播亚洲综合网| 一本综合久久免费| 天堂√8在线中文| 天堂影院成人在线观看| 日韩中字成人| 久久99热6这里只有精品| 91久久精品电影网| 亚洲欧美清纯卡通| 婷婷亚洲欧美| 国产成人影院久久av| av在线蜜桃| 一进一出抽搐动态| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 日本三级黄在线观看| 黄片小视频在线播放| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美性感艳星| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩欧美国产一区二区入口| 午夜福利成人在线免费观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 9191精品国产免费久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲国产精品999在线| 欧美国产日韩亚洲一区| 精品午夜福利在线看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 岛国在线免费视频观看| 精品国产亚洲在线| 99热6这里只有精品| 婷婷色综合大香蕉| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 欧美在线黄色| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久亚洲精品不卡| 99热精品在线国产| 国产精品女同一区二区软件 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 成人欧美大片| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美区成人在线视频| 久99久视频精品免费| 国产真实伦视频高清在线观看 | 中文亚洲av片在线观看爽| 麻豆国产av国片精品| av在线观看视频网站免费| 色av中文字幕| 亚洲av成人av| 亚洲,欧美,日韩| 国模一区二区三区四区视频| 大型黄色视频在线免费观看| 99久国产av精品| 在线免费观看的www视频| 看片在线看免费视频| а√天堂www在线а√下载| 中文亚洲av片在线观看爽| 三级毛片av免费| 一a级毛片在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 白带黄色成豆腐渣| 成人性生交大片免费视频hd| eeuss影院久久| 亚洲在线自拍视频| 亚洲av一区综合| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 美女 人体艺术 gogo| 一区福利在线观看| 免费在线观看日本一区| 51午夜福利影视在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 桃色一区二区三区在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 国产亚洲精品av在线| 中亚洲国语对白在线视频| 日韩免费av在线播放| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 一个人看视频在线观看www免费| 性插视频无遮挡在线免费观看| 91久久精品电影网| 中文字幕免费在线视频6| 久久人人爽人人爽人人片va | 久久精品影院6| 内射极品少妇av片p| 日韩高清综合在线| 久久久久亚洲av毛片大全| 日本在线视频免费播放| 综合色av麻豆| 一级黄色大片毛片| 国产日本99.免费观看| 国产精品久久久久久精品电影| 中文字幕高清在线视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日本免费一区二区三区高清不卡| 免费黄网站久久成人精品 | 又黄又爽又免费观看的视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 精品久久久久久久久亚洲 | 亚洲专区中文字幕在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品久久久久久久久av| 成年版毛片免费区| 三级毛片av免费| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| 97热精品久久久久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 天堂影院成人在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲中文字幕日韩| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久中文看片网| 国产伦一二天堂av在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 51午夜福利影视在线观看| 1000部很黄的大片| 欧美成人免费av一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 能在线免费观看的黄片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99久久精品一区二区三区| 日本 欧美在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产综合懂色| 国产伦人伦偷精品视频| 国产一区二区三区视频了| 老司机福利观看| 亚洲国产欧美人成| h日本视频在线播放| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久99热这里只有精品18| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 免费观看的影片在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 丁香六月欧美| 午夜老司机福利剧场| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲国产精品成人综合色| 久久热精品热| 国产精品永久免费网站| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美日韩黄片免| 校园春色视频在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 久久精品91蜜桃| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产成人福利小说| 欧美日韩综合久久久久久 | 日本一本二区三区精品| 岛国在线免费视频观看| 此物有八面人人有两片| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美激情在线99| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 一个人免费在线观看电影| 免费在线观看影片大全网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 中文字幕熟女人妻在线| 国产一区二区三区视频了| 内地一区二区视频在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 国产精品伦人一区二区| 亚洲国产欧美人成| 在线天堂最新版资源| 老司机福利观看| 中文字幕熟女人妻在线| 精品一区二区三区人妻视频| 别揉我奶头 嗯啊视频| 免费观看人在逋| 国产乱人视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 91久久精品国产一区二区成人| 精品人妻1区二区| 午夜激情福利司机影院| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美色欧美亚洲另类二区| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲国产精品合色在线| 在线看三级毛片| 亚洲内射少妇av|