利用GeneXpert檢測結核分支桿菌及其利福平耐藥性的研究

楊丹丹

（江蘇省海門市人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 海門 226100）

利用GeneXpert檢測結核分支桿菌及其利福平耐藥性的研究

楊丹丹

（江蘇省海門市人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 海門 226100）

目的研究GeneXpert檢測在結核分支桿菌及其利福平耐藥性檢測中的應用。方法選取2014年7月至2015年11月我院所收治的116例涂片陽性的肺結核患者的痰液標本。對痰液標本中的結核分枝桿菌及福平耐藥性行GeneXpert檢測，均與傳統(tǒng)的羅氏培養(yǎng)結果和藥敏試驗結果比較。結果GeneXpert檢測對結核分支桿菌的診斷符合率為93.1%，對利福平耐藥性的診斷符合率為97.2%。結論GeneXpert檢測結核分枝桿菌及其利福平耐藥性，具有快速而準確的特點，為結核病的診斷和治療提供可靠的依據(jù)。

結核分支桿菌；利福平；耐藥；基因芯片

結核病是一種世界性的慢性傳染疾病，它由結核分支桿菌感染而引起。結核分枝桿菌的耐藥性會嚴重影響結核病的治療效果，因此結核分枝桿菌的耐藥性檢測顯得尤為重要[1]。傳統(tǒng)的結核分枝桿菌耐藥性檢測方法主要采用以培養(yǎng)為基礎的絕對濃度法，需要花費較長時間得到實驗結果，導致諸多不便，不能滿足臨床的需要[2]。隨著科學技術的發(fā)展，基因芯片被應用于結核分枝桿菌耐藥性檢測中，可以快速、準確的檢測耐藥性，得到臨床醫(yī)學的驗證和支持。本文利用基因芯片檢測結核分支桿菌及其利福平耐藥性，以期為臨床應用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本與菌株：選取2014年7月至2015年11月我院所收治的116例涂片陽性的肺結核患者的痰液標本。

1.2 試劑與儀器：天津儀美科技有限公司Cepheid檢測儀，結核分枝桿菌rpoB基因和突變檢測試劑盒（實時熒光PCR法），商品名稱：Xpert MTB/RIF。珠海貝索生物技術有限公司羅氏培養(yǎng)管，自行配置4%氫氧化鈉溶液，孵箱，安全柜，振蕩器。

1.3 GeneXpert檢測試驗：①標本處理：準備所需試劑耗材，在前處理管和Cartridge反應盒上標記患者姓名及病例序號。取1 mL痰標本置有螺旋蓋的前處理管中，接著加入相當于痰標本2倍體積的痰標本處理液，將前處理管在震蕩器上渦旋震蕩30 s左右，直至無可見塊狀痰標本存在。②加樣：將前處理管在室溫靜置15 min后，打開Cartridge反應盒，用一次性無菌移樣管取出2 mL處理后樣品由加樣孔緩慢加入反應盒內。③測試：打開電腦和Gene-Xpert檢測儀的電源開關，運行Gene-Xpert操作軟件開始測試。④在電腦上閱讀結核分枝桿菌及耐藥結果。

1.4 結核分枝桿菌羅氏培養(yǎng)實驗：①實驗準備及標本處理：將培養(yǎng)管室溫放置5～10 min，拭去管外壁的凝集水，在培養(yǎng)基斜面背面標記序號，患者姓名，日期。取無菌的前處理管標記患者姓名。用無菌吸管吸取痰標本1～3 mL至前處理管中，視標本性狀加1～2倍體積4%氫氧化鈉溶液，渦旋震蕩30～60 s后開始計時15 min，室溫靜置。②接種：棄掉凝固水，用無菌管吸取前處理的痰標本，接種0.1 mL至培養(yǎng)基斜面，擰緊管蓋，放在斜面架上，保持斜面水平向上，37 ℃孵箱，24 h后，將培養(yǎng)管直立，繼續(xù)培養(yǎng)。③定期觀察生長情況。

2 結 果

2.1 GeneXpert檢測實驗與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)結果的比較：116份痰液標本，結果有108份結果相符，符合率為93.1%?；蛐酒瑢嶒炍礄z出的標本跟傳統(tǒng)培養(yǎng)的快速生長菌株相吻合（后經(jīng)南通疾控確診為非結核分枝桿菌）?？梢姕蚀_率很高。見表1。

表1 GeneXpert檢測實驗與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)結果的比較

2.2 GeneXpert檢測與藥敏試驗對利福平耐藥檢測結果（數(shù)據(jù)來自南通疾控中心）的比較：108株結核分枝桿菌分離株，采用GeneXpert檢測和藥敏試驗檢測結核分枝桿菌對利福平的耐藥性，其中前者有8例耐藥例，后者有7例耐藥，其他都為敏感，符合率為97.2%。見表2。

表2 GeneXpert檢測與藥敏試驗對利福平耐藥檢測結果

3 討 論

結核病傳統(tǒng)的檢測方式是藥敏試驗，通過細菌培養(yǎng)試驗的方式對結核分枝桿菌進行檢測[3]。藥敏試驗檢測結核分枝桿菌的最大問題在于，需要過長的時間導致在臨床實踐中的應用價值較低[4]?；蛐酒夹g被用于檢測基因的突變，可以快速檢測多個基因的突變位點及其類型，是檢測結核分枝桿菌的有效檢測方[5]。

隨著科學技術的發(fā)展和分子生物學技術的進步，基金芯片被越來越多的應用于結核分枝桿菌的檢測中。吳國蘭[6]等探討基因芯片對結核分枝桿菌的診斷價值和耐藥性分析，結果顯示基因芯片對結核分枝桿菌的診斷結果與藥敏試驗結果完全相符，對利福平耐藥性的診斷符合率為93.7%，表明基因芯片技術對結核分枝桿菌及其利福平耐藥性的檢測具有極高的準確性。耿紅[7]等探討基因芯片檢測結核分支桿菌對利福平耐藥性的診斷效果，結果顯示基因芯片與藥敏試驗相比，對利福平的總靈敏度為91%，特異度為96%，表明基因芯片技術檢測利福平耐藥性具有良好的診斷效果。李曉非[8]等評價基因芯片對結核分枝桿菌的診斷價值，結果顯示基因芯片技術與培養(yǎng)法比較，對結核分枝桿菌的診斷符合率為100%，對利福平耐藥性的診斷符合率為94.5%，表明基因芯片可以準確診斷結核分枝桿菌，并能快速檢測利福平的耐藥性，具有巨大的發(fā)展空間。本研究顯示，基因芯片技術與藥敏試驗比較，對結核分枝桿菌的診斷符合率為91.8%，對利福平耐藥性的診斷符合率為90.5%，與以上研究結果相符。

基因芯片是通過將探針固定在基片上，將樣本核酸進行雜交，通過探針分子的雜交信號強度來獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。這一檢測方法可以對樣品進行大量序列的檢測分析，與傳統(tǒng)的低效率檢測方式相比，大大提高了檢測的效率。尤其是在檢測結核分枝桿菌的耐藥性方面，耗費的時間不超過3 d，卻可以進行大量樣本的試驗，且準確率較高，具有廣闊的應用前景。但基因芯片技術也存在一定的缺陷，不能檢測所有的基因突變位點，可能對耐藥檢出率造成一定的影響，因此在目前尚不能完全取代藥敏試驗，但隨著科學的發(fā)展和技術的改進，基因芯片技術將更加完善，檢出結果將更為可靠。

綜上，GeneXpert檢測可以快速準確的鑒定結核分枝桿菌，同時對利福平耐藥性檢測具有良好的敏感性和特異性，值得臨床應用和推廣。

[1] 王勝芬,趙冰,宋媛媛,等.我國耐藥結核病的危險因素——2007年全國結核病耐藥基線調查資料分析[J].中國防癆雜志,2013, 35(4):221-226.

[2] 張偉.基因芯片與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)檢測結核分支桿菌藥敏結果分析[J].安徽醫(yī)學,2015,36(12):1527-1529.

[3] 黃自坤,熊國亮,姜碧霞,等.顯微鏡觀察藥敏檢測技術檢測結核分枝桿菌耐藥性研究[J].重慶醫(yī)學,2013,42(19):2194-2197.

[4] 王浩,趙青,陳妹紅,等.Sensititre(R)結核藥敏板檢測結核分枝桿菌藥敏的方法學研究[J].河北醫(yī)科大學學報,2016,37(2):187-190.

[5] 孫炳奇,張娟,孫嬌,等.基因芯片技術檢測結核桿菌耐藥的臨床研究[J].中國實驗診斷學,2014,18(3):434-436.

[6] 吳國蘭,陳曉紅,翁麗珍,等.基因芯片技術在鑒定分枝桿菌屬及早期診斷耐藥結核中的價值分析[J].中國醫(yī)刊,2016,51(5):44-47.

[7] 耿紅,李永文,李新旭,等.中國開展基因芯片檢測結核分枝桿菌對異煙肼和利福平耐藥性的Meta分析[J].中華傳染病雜志,2014, 32(6):357-363.

[8] 李曉非,梁桂亮,普冬,等.基因芯片技術在分枝桿菌菌種鑒定和結核耐藥性檢測中的應用及評價[J].中國實驗診斷學,2015,19(2): 204-207.

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1671-8194（2017）12-0175-02