舒暢飲丸中二苯乙烯苷的含量測(cè)定研究

甘向輝王 正童學(xué)飛＊

（1 湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北 十堰 442012；2 湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院神農(nóng)武當(dāng)中醫(yī)藥研究所，湖北 十堰 442012）

舒暢飲丸中二苯乙烯苷的含量測(cè)定研究

甘向輝1王 正2童學(xué)飛2＊

（1 湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北 十堰 442012；2 湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院神農(nóng)武當(dāng)中醫(yī)藥研究所，湖北 十堰 442012）

目的建立舒暢飲丸中二苯乙烯苷的含量測(cè)定方法。方法采用島津LC-20A HPLC系統(tǒng)測(cè)定，色譜柱：symmetryC18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈：水溶液=19∶81；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm。結(jié)果二苯乙烯苷在其檢測(cè)的線性范圍內(nèi)線性良好，平均回收率為100.23%，RSD為1.49%。結(jié)論所建立的方法快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可以控制舒暢飲丸的質(zhì)量。

舒暢飲丸；二苯乙烯苷；含量測(cè)定；高效液相色譜法

舒暢飲丸是我院院內(nèi)制劑由何首烏、白芍、甘草等14味藥制成的濃縮丸，具有柔肝緩急，生津通絡(luò)，寧心安神的功效。用于重癥神經(jīng)衰弱及心腦功能失調(diào)等癥。其中何首烏為本方的君藥，具有補(bǔ)肝腎、益精血、強(qiáng)筋骨之功效，而二苯乙烯苷為其主要有效成分[1]。本文以二苯乙烯苷為對(duì)照品，采用高效液相色譜法對(duì)其在舒暢飲丸中的含量進(jìn)行了考察，以期能更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥療效。

1 材 料

島津LC-20A HPLC：紫外檢測(cè)器、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度泵、真空脫氣機(jī)、島津工作站；萬(wàn)分之一分析天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）；超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；超純水機(jī)（上海精密儀器儀表有限公司）；高速離心機(jī)（鹽城市凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

二苯乙烯苷（供含量測(cè)定用，批號(hào)110844-201004，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院），舒暢飲丸由十堰市中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，所用乙腈為色譜純（德國(guó)默克），水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件。色譜柱：symmetry C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。柱溫：30 ℃。流速：1.0 mL/min。流動(dòng)相為乙腈：水溶液=19∶81。檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm。

2.2 供試品溶液的制備：選擇30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、無(wú)水乙醇作為溶劑對(duì)要藥材進(jìn)行超聲提取和回流提取的考察，發(fā)現(xiàn)60%乙醇超聲提取效果最好，然后考察了10 min、20 min、30 min、40 min內(nèi)提取效率，發(fā)現(xiàn)超聲提取30 min所測(cè)定的二苯乙烯苷含量最高。

精密稱取粉碎（過(guò)40目篩）的舒暢飲丸1 g，精密加入60%乙醇25 mL超聲提取30 min，冷卻，補(bǔ)重，過(guò)濾，取取續(xù)濾液，離心（10 min），取上清液即得供試品。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備：取二苯乙烯苷對(duì)照品適量，加乙醇制成1 mg/mL的溶液，精密吸取此溶液2 mL加入10 mL的容量瓶中，即得0.2 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.2 專屬性考察：按擬定色譜條件，精密吸取陰性對(duì)照溶液（缺何首烏）、對(duì)照品溶液、供試品溶液各20 μL，注入HPLC，觀察色譜圖，記錄見圖1。發(fā)現(xiàn)陰性對(duì)照無(wú)干擾，且對(duì)照品分離度良好，專屬性較好。

圖1 A為陰性對(duì)照溶液；B為對(duì)照品溶液；C為供試品溶液

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液2 μL、4 μL、5 μL、10 μL、20 μL，按擬定色譜條件，注入HPLC中測(cè)定峰面積。進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，計(jì)算得回歸方程y=9×108x-23108，r=0.9996。表明二苯乙烯苷在線性范圍內(nèi)線性良好。

2.4.2 精密度試驗(yàn)：取舒暢飲丸（批號(hào)140120），按照“供試品溶液的制備”項(xiàng)制成供試品，按色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得二苯乙烯苷峰面積的RSD為1.72%，表明試驗(yàn)精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn)：取舒暢飲丸（批號(hào)140120）5份，按照“供試品溶液的制備”項(xiàng)制成供試品，按色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)得二苯乙烯苷峰面積的RSD為1.37%，表明試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取舒暢飲丸（批號(hào)140815），按照“供試品溶液的制備”項(xiàng)制成供試品，按色譜條件，分別于0、1、2、4、6、8、12、24 h分別進(jìn)樣，測(cè)得二苯乙烯苷峰面積的RSD為1.86%，表明樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知含量的同一批舒暢飲丸0.5 g（批號(hào)140524），平行操作6份，分別精密加入一定量的對(duì)照品溶液，按照“供試品溶液的制備”項(xiàng)制成供試品，按色譜條件分別進(jìn)樣，計(jì)算回收率，平均回收率為100.23%，RSD值為1.49%。

2.5 含量測(cè)定：分別取不同批號(hào)的舒暢飲丸，按照“供試品溶液的制備”項(xiàng)制成供試品，分別精密吸取20 μL，按色譜條件注入HPLC中，測(cè)定二苯乙烯苷的含量，結(jié)果見表1。

表1 五批舒暢飲丸中二苯乙烯苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)在考察供試品溶液制備方法時(shí)，綜合考察了提取溶劑、提取方式、提取時(shí)間，發(fā)現(xiàn)60%乙醇溶液超聲提取30 min所得二苯乙烯苷含量最高。超聲提取法具有省時(shí)、節(jié)能、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)，且提取中無(wú)加熱過(guò)程，可避免加熱因素引起的藥物成分結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，能用于熱敏性成分的提取，在中藥質(zhì)量檢測(cè)的樣品處理中已廣泛使用[2]。采用HPLC法測(cè)定舒暢飲丸中二苯乙烯苷的含量，進(jìn)一步提升了該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 方紅玫,朱延焱.何首烏有效成分、毒性作用和相關(guān)研究進(jìn)展[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志,2010,37(4):283-286.

[2] 鐘玲,尹蓉莉,張仲林.超聲提取技術(shù)在中藥提取中的研究進(jìn)展[J].西南軍醫(yī),2007,9(6):84-87.

Determination of Stilbene Glucoside in Shuchangyinwan by HPLC

GAN Xiang-hui1, WANG Zheng2, TONG Xue-fei2
(1 Department of Pharmacy, Shiyan TCM Hospital, Shiyan 442012, China; 2 Shen Nong Wudang Institute of Chinese Medicine, Shiyan TCM Hospital, Shiyan 442012, China)

ObjectiveTo establish a method for the determination of stilbene glucoside in shuchangyinwan.MethodsThe chromatographic separation was performed on the symmetryC18(4.6 mm×150 mm, 5 μm) with isocratic elution of acetonitrile and water(19∶81) at a flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃. The detection wavelength was set as 320 nm.ResultsThe method for determining stilbene glucoside showed good linearity in the test ranges.The average recoveries were 100.23% and the RSD was 1.49%.ConclusionsThe methods developed are rapid, accurate and reproducible, which is applicable to the quality control of shuchangyinwan.

Shuchangyinwan; Stilbene glucoside; Content determination; HPLC

R282.710.5

B

1671-8194（2017）12-0021-02

*通訊作者:E-mail: 13797822055@163.com