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    長鏈非編碼RNA在乳腺癌的診斷和治療中的最新進展

    2017-06-05 14:15:01梁端林魏楊輝黃耀張衛(wèi)星李明
    浙江臨床醫(yī)學 2017年4期
    關(guān)鍵詞:靶點靶向特異性

    梁端林 魏楊輝 黃耀* 張衛(wèi)星 李明

    長鏈非編碼RNA在乳腺癌的診斷和治療中的最新進展

    梁端林 魏楊輝 黃耀* 張衛(wèi)星 李明

    隨著微陣列和深度測序等技術(shù)的進展,對非編碼RNA(ncRNA)有了更深入的理解。研究發(fā)現(xiàn)只有<2%的總基因組序列是蛋白質(zhì)編碼基因,>98%的基因組轉(zhuǎn)錄ncRNA。在過去,ncRNA被視作“轉(zhuǎn)錄噪聲”。但近來發(fā)現(xiàn),ncRNA在細胞分化和機體生長和代謝中發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[1]。NcRNA由一些眾所周知的RNA組成,如tRNA、snRNA、rRNA和snoRNA[2]。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是ncRNA中最大的家族,具有重要的生理功能。最近在多種癌癥中檢測到lncRNA,包括乳腺癌,其參與乳腺癌的多個生物學過程,可能成為癌癥診斷,預后評估的潛在生物標志物和治療的靶點,在不遠的將來,其可能成為戰(zhàn)勝乳腺癌關(guān)鍵[3]。

    1 lncRNA的生物學特征

    LncRNA是一類不編碼蛋白質(zhì)的RNA分子,長度200 nt至100 kb[4]。以前對lncRNA的研究中,對lncRNA及其生物學作用的描述較少,無足夠的關(guān)于其功能的信息。近年來研究發(fā)現(xiàn),大多數(shù)的lncRNA由RNA聚合酶Ⅱ(RNA pol Ⅱ)轉(zhuǎn)錄,具有mRNA的部分特征,如5'端加帽,3'端多聚腺苷酸尾以及相似的剪切模式等[2,5]。lncRNA雖然序列保守性低,但多具有保守的二級結(jié)構(gòu)、剪切方式及亞細胞定位。序列特異性和結(jié)構(gòu)的保守性,表明lncRNA生物學功能的復雜多樣性。根據(jù)轉(zhuǎn)錄本來源,將lncRNA分為5類:基因間lncRNA,基因內(nèi)lncRNA,雙向lncRNA,正義lncRNA,反義lncRNA。

    2 lncRNA在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用

    LncRNA的許多生物學功能是未知的,最近的研究表明lncRNA和乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展有密切聯(lián)系。一些lncRNA在乳腺癌中異常表達,包括HOX轉(zhuǎn)錄反義基因間RNA(HOTAIR),肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄子-1(MALAT-1),,生長阻滯特異性轉(zhuǎn)錄子-5(GAS-5),長應激誘導非編碼轉(zhuǎn)錄子-5(LSINCT-5),類固醇受體RNA激活劑-1(SRA1),X非活性特異性轉(zhuǎn)錄子(XIST),H19和BC200[2,6]。一些lncRNA在某些細胞中特異性表達,可能成為其潛在的生物標志物或治療靶點[7]。在本文中,作者簡略的介紹一些lncRNA在乳腺癌中的表達及在乳腺癌進展中的作用,也討論lncRNA的臨床應用以及作為治療人類乳腺癌新方法的潛力。見表1。

    表1 一些參與乳腺癌進展的lncRNA

    除了上述lncRNA分子外,越來越多的lncRNA,包括MEG3、LOC554202、CCAT2和linRNA-ROR等,也相繼被發(fā)現(xiàn)在乳腺癌組織和癌細胞中異常表達,進而影響乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。

    3 lncRNA作為乳腺癌診斷的生物標志物

    可以用多種方法檢測lncRNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,包括微陣列技術(shù)[8],RNA測序,RT-PCR[9-11],northern印跡雜交,原位雜交(FISH),RNA干擾(RNAi)和RNA免疫共沉淀測序(RIP),RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀芯片(RIP-CHIP)[12-14]。

    在多種癌癥中均發(fā)現(xiàn)lncRNA的表達水平失調(diào)[15]。例如,DD3或PCA3,一種前列腺特異性lncRNA,被確定為早期檢測前列腺癌的可靠腫瘤標志物[16]。此外,在前列腺癌早期篩查中,尿沉渣測DD3比血液更敏感[17]。BC200在浸潤性乳腺癌[18]和其他腫瘤如卵巢癌、宮頸癌和肺癌中的表達高度上調(diào)。其在侵襲性乳腺癌中的高表達使其有望成為診斷標志物。HOTAIR的表達水平在原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌中均升高[19]。在乳腺癌組織中,同樣觀察到MALAT1 的中等或高水平表達[20]。有越來越多的證據(jù)表明乳腺癌細胞存在X染色體失活的改變[21]。在最近的一項研究中,研究了六種lncRNA:HOTAIR,H19,KCNQ1OT1,MEG3,MALAT1和ZFAS1,在45例乳腺癌患者正常乳腺上皮、導管原位癌(DCIS)和浸潤性癌(IC)中的表達,結(jié)果表明H19和HOTAIR,尤其是KCNQ1OT1是潛在的乳腺癌診斷的生物標志物[22]。

    lncRNA存在于體液中,是惡性腫瘤診斷和預后潛在的非侵入性生物標志物。例如,在最近的研究中,在乳腺癌患者和健康個體的血清中測量循環(huán)HOTAIR衍生的片段,結(jié)果顯示HOTAIR循環(huán)DNA是乳腺腫瘤的潛在生物標志物[23]。研究人員研究了乳腺癌患者的循環(huán)血清中l(wèi)ncRNA RP11-445H22.4,數(shù)據(jù)表示lncRNA RP11-445H22.4可作為潛在的乳腺癌腫瘤標志物[24]。

    4 lncRNA作為乳腺癌預后的生物標志物

    在最近的研究中,BC040587在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中顯著下調(diào),因此,BC040587可能成為評估乳腺癌預后新的生物標志物[25]。HOTAIR和BC200在乳腺癌中上調(diào),可用于預測乳腺癌患者的結(jié)果和腫瘤侵襲性[18]。最近,一項研究發(fā)現(xiàn),與正常組織比較,在48個乳腺癌組織中SPRY4-IT1(PRY4內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄物1)的表達顯著增加。此外,SPRY4-IT1的高表達水平與腫瘤大小和病理分期有關(guān)。因此,其可成為乳腺癌預后評估的生物標志物和乳腺癌治療的靶點[26]。在另一項研究中,研究人員發(fā)現(xiàn)嗜酸性粒細胞個體發(fā)育轉(zhuǎn)錄物(EGOT)在乳腺癌組織中下調(diào),并與腫瘤分期及乳腺癌患者的不良預后密切相關(guān)[27]。LINC 00472是一種新的lncRNA,研究結(jié)果表明,LINC 00472的表達上調(diào)預示乳腺腫瘤侵襲性小和更好的預后[28]。U79277是一種新的lncRNA,研究表明,U79277上調(diào)預示乳腺癌預后不良。

    5 lncRNA在乳腺癌治療中的臨床應用

    與蛋白質(zhì)編碼RNA比較,lncRNA更具有組織特異性,這種lncRNA的組織特異性使個體化用藥和對局部腫瘤的早期檢測成為可能,臨床也可又來預測治療效果和作為基因治療的靶點[29]。隨著時間流逝,發(fā)現(xiàn)更多的lncRNA參與乳腺腫瘤發(fā)生和發(fā)展。例如,Gupta等[19]的一項研究顯示HOTAIR在轉(zhuǎn)移性乳腺癌表達量是正常乳腺組織的上千倍,并且還顯示高水平的HOTAIR表達是轉(zhuǎn)移和死亡的重要預測物,獨立于其他風險因素如腫瘤體積,激素受體狀態(tài)和腫瘤分期。結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物-2(CCAT-2),一種乳腺癌中的新型lncRNA,在三個原發(fā)性乳腺癌患者組中,兩個組中顯示過表達,可用于無轉(zhuǎn)移患者生存預測,也可用于預測局部有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且接受輔助化療的患者的總生存[30]。

    Meng等[31]發(fā)現(xiàn)一組4-lncRNA標簽可預測總體生存。4-lncRNA標簽(AK024118,U79277,AK000974,BC040204)可以作為分子診斷標志物和治療靶點,包括篩選出高風險患者進行輔助治療。在最近的研究中發(fā)現(xiàn)GAS-5水平降低減少了乳腺癌細胞對誘導凋亡常規(guī)化療藥的應答,恢復GAS-5的表達可能對乳腺癌化療有意義[32]。

    IncRNA臨床應用之一是應用RNAi介導的基因沉默來選擇性沉默致癌性lncRNA?;蛑委熓橇硪环N治療方法,通過向乳腺癌細胞遞送抑癌lncRNA。然而,應當注意,在實施治療性RNAi和基因治療中仍存在許多技術(shù)挑戰(zhàn)[14]。另一種策略是通過反義寡核苷酸(ASO)靶向作用于lncRNA,單鏈DNA或RNA分子可以高序列特異性結(jié)合其靶l(wèi)ncRNA,并通過RNAseH1激發(fā)其螯合[33]。該研究發(fā)現(xiàn)ASO阻斷MALAT-1后,可預防肺癌細胞的轉(zhuǎn)移。ASO可靶向作用于其它致癌性lncRNA,以限制其表達[34]。

    6 結(jié)論

    IncRNA作為基因表達的重要調(diào)節(jié)劑已經(jīng)表現(xiàn)出多種功能,它們能夠通過多種途徑改變?nèi)橄侔┻M展。大多數(shù)乳腺惡性腫瘤具有侵襲性,迫切需要找到具有高靈敏度和特異性的非侵入性生物標志物,以在早期檢測出乳腺癌并監(jiān)測其對治療的應答。

    雖然一些lncRNA已經(jīng)顯示出作為診斷標志物的潛力,可預測乳腺癌患者的分期、轉(zhuǎn)移和評估患者預后,但是將lncRNA應用到臨床中仍然存在著許多障礙。理想的lncRNA生物標志物需要在生物流體,如血漿和尿液中穩(wěn)定的檢出,但是循環(huán)lncRNA的穩(wěn)定性仍是未知,此外,循環(huán)lncRNA的來源不易檢出。lncRNA轉(zhuǎn)錄物及其轉(zhuǎn)錄后水平在疾病不同時期是波動的或難以確定的。最后,lncRNA作為生物標志物的可行性仍然需要進一步的臨床實踐和驗證[35]。

    基于RNA治療學的新進展,引入lncRNA作為治療的新靶點,可能為乳腺癌的安全和有效的治療提供新的希望。檢測循環(huán)腫瘤細胞的新技術(shù)可研究腫瘤的轉(zhuǎn)移階段。新的基因組編輯工具,如CRISPR / Cas9系統(tǒng)的應用可能為lncRNA研究鋪平了道路。使用對某些lncRNA具有高親和力和特異性的合成寡核苷酸,例如鎖定核酸修飾的寡核苷(LNA),可以用于靶向修飾lncRNA的表達。高通量篩選lncRNA-蛋白質(zhì)相互作用的小分子調(diào)節(jié)劑可以引入潛在的候選物以中斷l(xiāng)ncRNA-蛋白質(zhì)相互作用或加載區(qū)域靶基因組改變lncRNA,靶向調(diào)節(jié)lncRNA-蛋白的相互作用,增加化合物特異性并減少脫靶效應,實現(xiàn)更有選擇性的治療效果。然而,在RNA治療的發(fā)展中仍然存在許多共同的挑戰(zhàn),包括缺乏安全、特異、有效的遞送方法,無確定的最佳劑量方案及防止脫靶效應。此外,使用RNAi技術(shù)難以靶向作用于lncRNA轉(zhuǎn)錄物,這可能是由于它們的分子量過大和粗放的二級結(jié)構(gòu)。

    目前,對lncRNA的了解越來越多,他們?yōu)榘┌Y治療和生物標志物提供了一個新的研究領(lǐng)域。仍需要更深入的研究,以了解lncRNA作為乳腺癌早期診斷生物標志物、評估患者預后標志物和治療新靶點的潛力。本篇綜述介紹了一些研究熱門的lncRNA,在不久的將來,它們可能用于乳腺癌的臨床篩查、診斷、治療,在此之前仍需要做許多進一步的研究和臨床實踐。

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    518033 廣東醫(yī)學院附屬福田醫(yī)院(梁端林)

    518033 中山大學附屬第八醫(yī)院(魏楊輝 黃耀 張衛(wèi)星 李明)

    *通信作者

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