不同季節(jié)翠玉品種3大茶類生化成分及抗氧化活性研究

潘順順，賴幸菲，孫伶俐，黎秋華，向麗敏，孫世利

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/廣東省茶樹資源創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510640）

不同季節(jié)翠玉品種3大茶類生化成分及抗氧化活性研究

潘順順，賴幸菲，孫伶俐，黎秋華，向麗敏，孫世利*

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/廣東省茶樹資源創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510640）

對不同季節(jié)（春、夏、秋）翠玉品種3大茶類（綠茶、烏龍茶和紅茶）的生化成分含量及抗氧化能力進(jìn)行分析研究。結(jié)果表明：不同季節(jié)翠玉綠茶中，夏茶的抗氧化能力最強(qiáng)，其茶多酚、兒茶素總量較春茶低，但酯型兒茶素的含量為最高；不同季節(jié)翠玉烏龍茶中，夏茶的抗氧化能力最強(qiáng)，其茶多酚、兒茶素和酯型兒茶素的含量均為最高，其茶多糖的含量也較綠茶和紅茶夏茶高；不同季節(jié)翠玉紅茶的抗氧化能力差異不大。從不同茶類來看，翠玉品種的茶葉的抗氧化能力表現(xiàn)為綠茶＞烏龍茶＞紅茶。

翠玉；綠茶；烏龍茶；紅茶；季節(jié)；抗氧化

茶葉按照采摘季節(jié)的不同，大致可分為春茶、夏茶和秋茶，一般春茶的品質(zhì)最優(yōu)，秋茶次之，夏茶最次。夏茶由于夏季光照時間強(qiáng)、時間長，溫度較高，茶樹新梢生長迅速且容易老化，茶葉中的氨基酸、維生素的含量明顯減少，咖啡堿、茶多酚的含量明顯增加，成茶的苦澀味重、香氣低、色澤差[2]，因此品質(zhì)低下。夏暑茶品質(zhì)低下是世界難題，尤其在廣東省，夏暑茶生長周期最快，產(chǎn)量最高，據(jù)預(yù)測，夏暑茶年產(chǎn)量占1/3以上[1]。夏暑茶價格低廉，很多地方甚至不采摘，造成了大量茶葉資源的浪費(fèi)，同時也降低了農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收入，影響了茶農(nóng)種茶的積極性。但夏暑茶中活性成分的含量豐富，特別是茶多酚、兒茶素等活性成分含量較高，具有潛在的開發(fā)利用價值。

翠玉茶樹品種從我國臺灣引入廣東省并大量推廣和種植的優(yōu)良茶樹品種，也稱臺茶13號，適制烏龍茶，同時也可制綠茶和紅茶，其加工制作而成的茶葉風(fēng)格獨(dú)特，具有玉蘭花香兼蔗糖香[3]，香氣清高持久。本研究以翠玉茶樹品種加工而成的綠茶、紅茶和烏龍茶，以春茶為對照，分析夏暑茶中的主要活性成分的含量，檢測各茶樣的總抗氧化能力，以期為利用夏暑低值茶研發(fā)具有保健功效的茶葉新產(chǎn)品提供理論依據(jù)，為夏暑茶的出路和低值茶資源的創(chuàng)新利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料

春、夏、秋3季翠玉綠茶、紅茶和烏龍茶采制于廣東茗皇茶業(yè)有限公司茶葉生產(chǎn)基地，綠茶和紅茶按一芽二葉的標(biāo)準(zhǔn)采摘，烏龍茶按一芽三、四葉的標(biāo)準(zhǔn)采摘。各干茶樣經(jīng)過粉碎后過40目篩，置于干燥器中保存。

1.1.2 主要試劑

兒茶素單體EGCG、EC、EGC、ECG、C、GC、CG、GCG：Sigma公司；咖啡堿和4種茶黃素單體TF、TF-3-G、TF-3’-G、TFDG：上海源葉生物技術(shù)有限公司；甲醇、乙腈：色譜純；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器設(shè)備

1200高效液相色譜儀：安捷倫科技有限公司；ZMQS5001型Millipore純水儀：密理博（Millipore）公司；HHS型恒溫水浴鍋：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；OHAUS準(zhǔn)微量電子天平：奧豪斯儀器（常州）有限公司；752N紫外分光光度計(jì)：上海菁華科技儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 常規(guī)生化成分含量的測定

水分測定：103℃恒重法；茶多酚含量：GB/T 8313-2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》；水浸出物測定：GB/T 8305-2013《茶水浸出物測定》；氨基酸含量：GB/T 8314-2013《茶游離氨基酸總量的測定》；可溶性糖含量：蒽酮-硫酸比色法；茶紅素、茶褐素測定：系統(tǒng)比色法[4]。

1.3.2 茶湯浸提液的制備

準(zhǔn)確稱取茶葉粉碎樣1.500 g，置于三角燒瓶中，加入沸蒸餾水225 mL，置于沸水浴中浸提45 min，中間攪拌2次～3次，浸提完畢后趁熱抽濾，濾液轉(zhuǎn)入250 mL容量瓶中，冷卻后加蒸餾水定容。

1.3.3 HPLC法檢測茶湯浸提液中兒茶素類單體和咖啡堿的含量

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，150 mm×4.6 mm；檢測溫度28℃；檢測波長280 nm；流動相A：含2%甲醇、1%乙腈和0.5%乙酸的水溶液，流動相B：含20%甲醇、10%乙腈和0.5%乙酸的水溶液；洗脫步驟：在0～30 min內(nèi)，A相由72.5%到20%，B相由27.5%到80%，30 min～35 min內(nèi)，A相由20%恢復(fù)到72.5%，B相由80%恢復(fù)到27.5%；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL，采用外標(biāo)法按峰面積進(jìn)行定量[5-6]。

1.3.4 HPLC法檢測茶湯中茶黃素單體的含量

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，150 mm×4.6 mm；檢測溫度35℃；檢測波長280 nm；流動相A：乙腈與乙酸乙酯（體積比）為7∶1，流動相B：2%乙酸溶液；洗脫步驟：在0～30 min內(nèi)，A相由18%到26%，B相由82%到74%；流速0.8 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL，以外標(biāo)法按峰面積進(jìn)行定量[7]。

1.3.5 茶葉的總抗氧化能力測定

1.3.5.1 FRAP工作液配制

分別配制300 mmol/L pH3.6的醋酸鹽緩沖液、10 mmol/L2，4，6-三吡啶基三嗪（TPTZ）溶液和20mmol/L FeCl3溶液按照（體積比）10∶1∶1的比例混合而成，現(xiàn)配現(xiàn)用[8-9]。

1.3.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

分別吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L的FeSO4標(biāo)準(zhǔn)液，加入3 mL FRAP工作液，再加入0.3 mL超純水，快速混勻后準(zhǔn)確反應(yīng)20 min，于593 nm處測定其吸光度，用超純水調(diào)零，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y（吸光度）= 1.358 2x（濃度）+0.007 2，R2=0.999 7。樣品的抗氧化活性（FRAP值）以達(dá)到相同吸光度所需FeSO4的毫摩爾數(shù)表示。

1.3.5.3 茶葉總抗氧化能力的測定

吸取上述1.3.1浸提的茶湯，分別配制梯度濃度為100、200、300、400、500、600 μg/mL的茶湯溶液。吸取0.1 mL的樣品溶液，加入3 mL FRAP工作液，再加入0.3 mL超純水，快速混勻后準(zhǔn)確反應(yīng)20 min，于593 nm處測定其吸光度，并計(jì)算FRAP值。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

運(yùn)用Spss19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，以春茶為對照，進(jìn)行單因素的方差分析（LSD法），分析夏茶、秋茶與春茶之間的顯著性，當(dāng)p＜0.05時代表差異顯著，當(dāng)p＜0.01時代表差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同季節(jié)翠玉品種各茶樣中主要生化成分含量

2.2.1 不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的茶多酚含量比較

不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的茶多酚含量比較結(jié)果見圖1。

圖1 不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶茶多酚的含量Fig.1Contents of tea polyphenols of Cuiyu green tea，black tea and oolong tea in different seasons

從圖1的結(jié)果可知：不同季節(jié)的翠玉綠茶中，春茶的茶多酚含量最高，夏茶次之，秋茶最低，且夏茶和秋茶的與春茶的茶多酚含量達(dá)到極顯著差異；不同季節(jié)的翠玉烏龍茶中，夏茶的茶多酚含量最高（p＜0.01），秋茶次之（p＜0.01），春茶最低；不同季節(jié)翠玉紅茶中，茶多酚含量為秋茶（p＜0.01）＞春茶＞夏茶（p＜0.01），夏茶的茶多酚含量最低可能原因是由于夏季茶葉中多酚氧化酶和過氧化物酶的活性較高，多酚類被氧化分解較多而最終導(dǎo)致茶多酚的含量較低。

2.2.2 不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的氨基酸含量比較

不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的氨基酸含量比較結(jié)果見圖2。

從圖2的結(jié)果可知：不同季節(jié)翠玉綠茶中，氨基酸的含量表現(xiàn)為秋茶最低（p＜0.01），春茶和夏茶的含量相差不大；不同季節(jié)的翠玉烏龍茶中，氨基酸的含量則是夏茶最高（p＜0.01），春茶次之，秋茶最低（p＜0.01）；不同季節(jié)翠玉紅茶中，氨基酸含量為夏茶（p＜0.01）＞春茶＞秋茶（p＜0.01）。

2.2.3 不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的可溶性糖含量比較

不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的可溶性糖含量比較結(jié)果見圖3。

圖3 不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶可溶性糖的含量Fig.3Contents of soluble sugar of Cuiyu green tea，black tea and oolong tea in different seasons

從圖3的結(jié)果可知：不同季節(jié)翠玉綠茶中，可溶性糖的含量秋茶最高（p＜0.01），春茶次之，夏茶最低（p＜0.05）；不同季節(jié)的翠玉烏龍茶中，可溶性糖的含量為秋茶最高（p＜0.01），春茶次之，夏茶最低（p＜0.01）；不同季節(jié)翠玉紅茶中，可溶性糖的含量為秋茶（p＜0.01）＞夏茶（p＜0.05）＞春茶。

2.2.4 不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的水浸出物含量比較

不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的水浸出物含量比較結(jié)果見圖4。

圖4 不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶水浸出物的含量Fig.4Contents of water extract of Cuiyu green tea，black tea and oolong tea in different seasons

從圖4的結(jié)果可知：不同季節(jié)翠玉綠茶中，水浸出物含量為春茶＞夏茶（p＜0.01）＞秋茶（p＜0.01）；不同季節(jié)的翠玉烏龍茶中，水浸出物的含量表現(xiàn)為秋茶含量最高（p＜0.05），夏茶次之（p＜0.05），春茶最低；不同季節(jié)翠玉紅茶中，水浸出物含量為秋茶（p＜0.01）＞春茶＞夏茶（p＜0.01）。

2.2.5 不同季節(jié)翠玉品種烏龍茶和紅茶的茶三素含量比較

不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的茶三素含量比較結(jié)果見圖5～圖7。

圖5 不同季節(jié)翠玉品種烏龍茶和紅茶茶黃素的含量Fig.5Contents of theaflavins of Cuiyu black tea and oolong tea in different seasons

圖6 不同季節(jié)翠玉品種烏龍茶和紅茶茶紅素的含量Fig.6Contents of thearubigins of Cuiyu black tea and oolong tea in different seasons

圖7 不同季節(jié)翠玉品種烏龍茶和紅茶茶褐素的含量Fig.7Contents of theabrownins of Cuiyu black tea and oolong tea in different seasons

從圖5～圖7的結(jié)果可知：不同季節(jié)翠玉烏龍茶中，茶色素的含量表現(xiàn)為秋茶的茶黃素、茶紅素和茶褐素的含量均為最高，夏茶次之，春茶最低，并且均達(dá)到顯著差異或極顯著差異；不同季節(jié)翠玉紅茶中，茶色素的含量表現(xiàn)為秋茶的茶黃素和茶紅素含量最高，均達(dá)到顯著差異，夏茶的茶褐素的含量最高（p＜0.01）。

2.2 不同季節(jié)翠玉品種各茶樣的兒茶素和咖啡堿的含量

不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的兒茶素和咖啡堿含量結(jié)果見表1。

表1 不同季節(jié)的翠玉品種各茶樣中8種兒茶素單體和咖啡堿含量Table 1Contents of eight kinds of catechin monomers and caffeine of Cuiyu green tea，black tea and oolong tea in different seasons mg/g

從表1的結(jié)果可知，翠玉綠茶春茶的兒茶素單體含量為EGCG＞EGC＞GC＞EC＞ECG＞GCG＞C＞CG，夏茶的兒茶素單體含量為EGCG＞EGC＞EC＞GC＞ECG＞GCG＞C＞CG，秋茶的兒茶素含量為EGCG＞EGC＞GC＞EC＞GCG＞ECG＞C＞CG。不同季節(jié)的翠玉綠茶中，兒茶素總量表現(xiàn)為春茶＞夏茶（p＜0.05）＞秋茶（p＜0.01），酯型兒茶素的含量則表現(xiàn)為夏茶（p＜0.01）＞春茶＞秋茶（p＜0.01）。雖然在兒茶素總量上夏茶含量較春茶低，但夏茶的酯型兒茶素的含量明顯高于春茶，可見，翠玉綠茶的兒茶素含量符合季節(jié)的變化規(guī)律。

翠玉烏龍茶春茶和夏茶的兒茶素單體含量均表現(xiàn)為EGCG＞EGC＞GC＞EC＞GCG＞ECG＞C＞CG，秋茶的兒茶素含量為EGCG＞EGC＞GC＞GCG＞ECG＞C＞EC＞CG。不同季節(jié)的翠玉烏龍茶中，兒茶素總量表現(xiàn)為夏茶（p＜0.01）＞秋茶（p＜0.01）＞春茶，酯型兒茶素的含量表現(xiàn)出同樣的規(guī)律，夏茶（p＜0.01）＞秋茶（p＜0.01）＞春茶。可見，翠玉烏龍茶的兒茶素總量和酯型兒茶素的含量均符合季節(jié)的變化規(guī)律。

翠玉紅茶春茶的兒茶素單體含量為EGCG＞EGC＞GC＞GCG＞ECG＞EC＞C＞CG，夏茶的兒茶素單體含量為GC＞EGCG＞EGC＞GCG＞CG＞EC＞C＞ECG，秋茶的兒茶素含量為GC＞EGCG＞EGC＞GCG＞EC＞CG=ECG＞C。不同季節(jié)的翠玉紅茶中，兒茶素總量表現(xiàn)為秋茶（p＜0.01）＞夏茶（p＜0.05）＞春茶，酯型兒茶素的含量則表現(xiàn)為春茶＞秋茶（p＜0.01）＞夏茶（p＜0.01）。翠玉紅茶夏茶和秋茶的兒茶素總量高于春茶，符合季節(jié)變化規(guī)律，而酯型兒茶素則表現(xiàn)為夏茶最低。

2.3 不同季節(jié)翠玉品種各茶樣的茶黃素單體含量

不同季節(jié)翠玉紅茶的4種茶黃素單體的含量結(jié)果見表2。

表2 不同季節(jié)翠玉紅茶中4種茶黃素單體的含量Table 2Contents of four kinds of theaflavins monomers in Cuiyu black tea in different seasonsmg/g

由表2的結(jié)果可知，不同季節(jié)的翠玉紅茶中，春茶和夏茶的TF含量較高，春茶的TF-3-G含量最高，其他茶黃素單體含量相差不大，從4種茶黃素的總量來看，不同季節(jié)翠玉紅茶的茶黃素總量也差異不大。

2.4 不同季節(jié)翠玉品種各茶樣的總抗氧化能力的比較

不同季節(jié)翠玉品種綠茶、烏龍茶和紅茶的總抗氧化能力比較結(jié)果見圖8。

圖8 不同季節(jié)翠玉各茶樣的總抗氧化能力的比較Fig.8The FRAP value of total antioxidant activity of Cuiyu green tea，black tea and oolong tea in different seasons

由圖8可知，隨著茶湯濃度的增大，F(xiàn)RAP值也隨之增大，茶葉提取液的抗氧化活性也逐漸增大，呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。從不同季節(jié)來看，翠玉綠茶抗氧化能力強(qiáng)弱表現(xiàn)為夏茶＞春茶＞秋茶；不同季節(jié)的翠玉烏龍茶的抗氧化能力強(qiáng)弱表現(xiàn)為夏茶＞秋茶＞春茶；不同季節(jié)翠玉紅茶的抗氧化能力則表現(xiàn)為秋茶最強(qiáng)，春茶和夏茶相差不大。

3 討論與結(jié)論

不同季節(jié)的翠玉綠茶中，夏茶的總抗氧化能力最強(qiáng)，春茶次之，秋茶最弱。茶多酚是茶葉中主要的活性成分（占茶葉干重20%～30%），其主要化學(xué)成分為兒茶素（占茶多酚含量的65%～80%）[10]，大量研究證明，茶多酚和兒茶素具有很強(qiáng)的抗氧化和清除自由基的能力，其中以酯型兒茶素的抗氧化能力最強(qiáng)[11-13]。通過比較不同季節(jié)翠玉綠茶的生化成分含量可發(fā)現(xiàn)，夏茶的茶多酚、兒茶素總量比春茶低，但其酯型兒茶素的含量顯著高于春茶?？梢?，翠玉綠茶夏茶的抗氧化活性強(qiáng)與其酯型兒茶素含量較高有關(guān)。

不同季節(jié)的翠玉烏龍茶中，夏茶的總抗氧化能力最強(qiáng)，秋茶次之，春茶最低。從生化成分含量可發(fā)現(xiàn)，翠玉烏龍茶的夏茶的茶多酚、兒茶素及酯型兒茶素的含量均為最高，春茶次之，秋茶最低，與其抗氧化能力呈現(xiàn)相關(guān)性。可見，翠玉烏龍茶夏茶的抗氧化活性強(qiáng)與其茶多酚和兒茶素含量較高有關(guān)。此外，翠玉烏龍茶的春茶、夏茶和秋茶的茶多糖含量均較高，許多研究表明[14-17]茶多糖具有增強(qiáng)免疫力、降血脂、降血糖、抗輻射、抗氧化、抗血凝、抗血栓等功效。

不同季節(jié)翠玉紅茶的抗氧化能力強(qiáng)弱趨勢表現(xiàn)為秋茶＞春茶＞夏茶，但相互之間的抗氧化能力相差不大。與其他茶類相比，翠玉紅茶的抗氧化能力明顯要低，這與其茶多酚和兒茶素含量較低有關(guān)（見表1和表2），其中翠玉紅茶夏茶的茶多酚含量最低，這可能是由于夏茶的酶活性較高，酯型兒茶素在酶的作用下較非酯型兒茶素更容易發(fā)生氧化聚合或異構(gòu)化而導(dǎo)致其含量下降。紅茶中的茶黃素單體也具有較強(qiáng)的抗氧化能力，有研究還表明[18-19]茶黃素單體的抗氧化能力比兒茶素單體還要強(qiáng)，但由于其在紅茶中的含量不高，對紅茶的抗氧化能力影響不大。

綜上所述，翠玉綠茶具有多酚類含量高，抗氧化能力強(qiáng)等特點(diǎn)，其中夏茶的酯型兒茶素含量最高，因此可利用翠玉綠茶夏茶為原料提取酯型兒茶素等活性成分進(jìn)行茶葉深加工產(chǎn)品的研發(fā)；翠玉烏龍茶夏茶具有抗氧化能力較強(qiáng)、茶多糖含量較高的優(yōu)勢，因此可以提取其茶多糖等功能成分，研發(fā)具有抗氧化、降血糖等功效的產(chǎn)品；采用翠玉品種夏茶加工成紅茶，茶多酚含量較低，較之其他茶類更有利于減少多酚類等苦澀物質(zhì)的含量，酚氨比更為協(xié)調(diào)，有利于提高茶葉品質(zhì)。

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Research on the Chemical Components and the Antioxidant Activities of Cuiyu Green Tea，Oolong Tea and Black Tea in Spring，Summer and Autumn

PAN Shun-shun，LAI Xing-fei，SUN Ling-li，LI Qiu-hua，XIANG Li-min，SUN Shi-li*
（Tea Research Institute of Guangdong Academy of Agricultural Sciences/Guangdong Key Laboratory of Tea Plant Resources Innovation&Utilization，Guangzhou 510640，Guangdong，China）

The chemical components and the antioxidant activities of Cuiyu green tea，oolong tea and black tea in summer，spring and autumn were determined.The results showed that Cuiyu green tea in summer showed the strongest antioxidant ability.The content of tea polyphenols and catechins of Cuiyu green tea in summer were lower than that in spring，however，its esters-catechin was the highest among all the green tea in different seasons.The antioxidant ability of Cuiyu oolong tea in summer was strongest in different seasons.The content of tea polyphenols，catechins and esters-catechin of Cuiyu oolong tea in summer were also the highest among all the oolong tea in different seasons.Moreover，it contained the highest concentration of tea polysaccharide among all the teas in summer.There was no significant difference in the antioxidant activities of Cuiyu black tea in different seasons.For the different types of teas，Cuiyu green tea had the strongest antioxidant ability，followed by oolong tea and black tea.

Cuiyu；green tea；oolong tea；black tea；season；antioxidant

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.09.006

2016-08-06

廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長基金（NO201534）；廣東省科技廳項(xiàng)目（2012B091100165；2015B090906027；2016B090918118）；廣東省大葉種紅茶產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新平臺建設(shè)（粵科規(guī)財(cái)字[2014]208號）

潘順順（1982—），女（漢），助理研究員，碩士，研究方向：茶葉資源綜合利用。

*通信作者