苦參降血糖活性部位分散片劑型研究

劉瑞駒++袁經(jīng)權(quán)

[摘要] 目的 對(duì)具有顯著降糖活性的苦參乙酸乙酯部位進(jìn)行分散片處方工藝研究，為工業(yè)化生產(chǎn)和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法 以分散片硬度、崩解度為考察指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)確定最佳處方工藝。采用轉(zhuǎn)籃法測(cè)定溶出度，并計(jì)算累積溶出度百分率。結(jié)果 最佳處方工藝為主藥量25%，1.0%阿斯巴甜作為矯味劑，1.4～1.6 mL/100 g濃度的蒸餾水作為潤(rùn)濕劑，0.5%硬脂酸鎂作為潤(rùn)滑劑，2.0%PVPP作為崩解劑，MCC-預(yù)膠化淀粉（3︰1）作為填充劑?？鄥⒎稚⑵睦鄯e溶出度平均值為82.65%。結(jié)論 苦參分散片處方工藝合理可行，可用于苦參分散片的制備及質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 苦參；處方工藝；抗糖尿??；分散片

[中圖分類號(hào)] R944 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）04（a）-0017-05

[Abstract] Objective To investigate the dispersible tablets of the ethylacetate extract of Sophora flavescens Ait.， which will be laying the basic foundation for its industrial production and clinical study. Methods The orthogonal experiment design was performed to determine the optimized formulation with hardness and disintegration as examine indexes. The rotation basket was applied to determine the dissolution， and the accumulative dissolution percentage was calculated. Results The optimized formulation was shown as follows： the content of extracts in tablets was 25%， 1.0% aspartame was used as sweetener， 1.4-1.6 mL/100 g of distilled water was used as wetting agent， 0.5% magnesium stearate was used as lubricant， 2.0% PVPP was used as disintegrant， and MCC-pregelatinized starch （3︰1） was used as filler. The average value of accumulative dissolution percentage was 82.65%. Conclusion The preparation is reasonable and feasible， which can be used in the preparation and the quality control of Sophora flavescens dispersible tablets.

[Key words] Sophora flavescens； Preparation； Antidiabetic； Dispersible tablets

苦參Sophora flavescens Ait.為豆科槐屬植物，味苦，性寒，具清熱解毒、祛風(fēng)殺蟲等功效，主治濕熱瀉痢，腸風(fēng)便血，黃疽，水腫等癥[1]。近年報(bào)道苦參用于治療非典和腫瘤[2]及殺蟲劑的開發(fā)[3-4]?？鄥⒅饕飰A和黃酮兩類成分，具多種活性[5-6]，其中苦參堿、氧化苦參堿為主的苦參堿制劑已經(jīng)上市，主要用來治療急、慢性病毒性肝炎，腫瘤等疾病[7-10]。但對(duì)于苦參黃酮的研究相對(duì)較少，近來發(fā)現(xiàn)富含苦參乙酸乙酯部位中黃酮具有良好的降糖活性[11]，此外Sato等從苦參乙酸乙酯部位中分離的九種黃酮化合物具有鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)（SGLT）抑制作用[12]。黃秋云等從苦參乙酸乙酯部位分離的異黃酮苷F對(duì)蔗糖酶、異麥芽糖酶、麥芽糖酶活性的IC50分別為 26.7 μmol/L、20 μmol/L、5.34 μmol/L，比兒茶素的活性強(qiáng)37～187倍，對(duì)大鼠攝入葡萄糖后血糖值上升的ED50為40 μg/kg，比兒茶素（800 μg/kg）強(qiáng)20倍，還可抑制醛糖還原酶（AR）的活性，IC50為11 μmol/L[13]。以上文獻(xiàn)數(shù)據(jù)表明苦參降血糖活性主要集中在富含黃酮成分的乙酸乙酯部位，故本文重點(diǎn)對(duì)具有降血糖作用的苦參乙酸乙酯部位進(jìn)行劑型研究，鑒于苦參中的黃酮類物質(zhì)在水中溶解度小[14-15]，不利于吸收，為增加黃酮類物質(zhì)的溶解度，提高其生物利用度，本文將苦參降糖活性部位制成分散片，并進(jìn)行了處方工藝研究，為進(jìn)一步促進(jìn)苦參新的研究和開發(fā)提供技術(shù)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

YD-1型片劑硬度測(cè)試儀（天津市新天光分析儀器技術(shù)有限公司）；LB-881B六管崩解儀（無錫科達(dá)儀器廠）；ZP-7型旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)（中國(guó)泰州市天泰制藥機(jī)械廠）；ZJP型全自動(dòng)硬膠囊充填機(jī)（中國(guó)泰州市天泰制藥機(jī)械廠）；ZRC-8C智能溶出儀（天津大學(xué)無線電廠）；Waters 2515半制備型高效液相：2998二極管陣列檢測(cè)器，2707自動(dòng)進(jìn)樣器；Sunfire C18半制備柱（Waters，250 mm × 4.6 mm，5 μm）。

1.2 試藥

苦參乙酸乙酯部位提取物（過80目篩）；微晶纖維素103型（MCC）、預(yù)膠化淀粉、交聯(lián)聚維酮（PVPP）、蒸餾水、阿斯巴甜、硬脂酸鎂（天津市恒興化學(xué)試劑制品有限公司）；薄層色譜硅膠和柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；HPLC級(jí)乙腈（Merck）。

1.3 藥材

苦參Sophora flavescens Ait.于2011年8月購(gòu)于廣西南寧市水街中草藥藥材市場(chǎng)，經(jīng)廣西藥用植物研究所袁經(jīng)權(quán)研究員鑒定，藥材標(biāo)本存放于該所開發(fā)中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦參降糖活性部位分散片的制備處方與工藝設(shè)計(jì)

2.1.1苦參降糖活性部位提取

取5 kg苦參粉碎成粉末，置于中藥提取罐中用80%乙醇浸泡1周，隔1～2天攪動(dòng)一次，將提取液從下口放出，收集。如此反復(fù)提取3次，得到總提取液約70 L。將收集得到的提取液減壓蒸餾濃縮，除去乙醇，得到濃縮液2.5 L，用等體積的石油醚萃取3次，除去油脂性成分，下層水溶液部分用10%稀硫酸調(diào)節(jié)pH至3，按等體積比為1︰1用乙酸乙酯萃取4次，減壓蒸餾濃縮，除去乙酸乙酯，收集固體物，用烘箱50℃烘干，研磨成粉末，得活性部位784 g，提取率為15.68%，指標(biāo)性成分苦參酮量約為13.8 g。

2.1.2 苦參降糖活性部位分散片的制備處方設(shè)計(jì)

苦參降糖活性部位提取物為黃色固體粉末，味苦，其為苦參中的極性較小的黃酮類成分，微溶于水，易溶于乙醇，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不揮發(fā)，常溫能穩(wěn)定存在，高溫時(shí)會(huì)分解。無毒性，可直接口服。依據(jù)其化學(xué)性質(zhì)以及相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)處方如下：主藥量為25%的苦參乙酸乙酯部位，矯味劑為1%的阿斯巴甜，黏合劑為1.4～1.6 mL/100 g的蒸餾水，潤(rùn)滑劑為1%的硬脂酸鎂，崩解劑為2%的交聯(lián)聚維酮（PVPP），填充劑約占71%。

2.2 苦參降糖活性部位分散片的制備方法

按照處方設(shè)計(jì)精密稱量各組分，主藥過80目篩，其他輔料分別過100目篩，濕法制粒，烘干添加潤(rùn)滑劑，混勻，壓片即得。

2.3 分散片劑量設(shè)計(jì)

苦參降糖活性部位在處方中為主藥，設(shè)計(jì)每片片重為200 mg，主藥量為50 mg，苦參酮含量約為0.88 mg。依據(jù)前期藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果[11]，小鼠每日給藥量為60 mg/kg可達(dá)到較好的降血糖效果，依據(jù)人與小鼠劑量換算關(guān)系[16]，成人每日服用3次，每次2片，可達(dá)到較好的降血糖效果。

2.4 分散片處方的單因素考察

分散片中崩解劑常用的有羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮等，黏合劑常用的有聚乙烯吡咯烷酮、乙醇、水等，填充劑常用的有預(yù)膠化淀粉、MCC、淀粉等，潤(rùn)滑劑常用的有硬脂酸鎂、微粉硅膠等。預(yù)試驗(yàn)比較了上述常用輔料種類和用量對(duì)分散片溶出度的影響，最終確定黏合劑為蒸餾水，潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂，崩解劑為交聯(lián)聚維酮，矯味劑為阿斯巴甜。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以片劑的可壓性、硬度、崩解時(shí)間及外觀光潔度作為評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的指標(biāo)，對(duì)片劑的填充劑種類及用量進(jìn)行篩選。

由于該藥物為降糖藥，故填充劑篩選實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案為主藥量25%，硬脂酸鎂1%，阿巴斯甜1%，PVPP2%，三組填充劑分別設(shè)為7.10 g的淀粉、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉。將實(shí)驗(yàn)組中各組分準(zhǔn)確稱量并混勻，過80目篩后，加適量蒸餾水（約1.5 mL）混合后擠壓過30目篩制粒，將顆粒置于干燥箱中烘干，將制得的顆粒用壓片機(jī)進(jìn)行壓片，片重約為200 mg/片，從3個(gè)實(shí)驗(yàn)組中各取6片，通過檢查制備的分散片的硬度和崩解度來測(cè)定其流動(dòng)性，結(jié)果見表1。

從表1可見，實(shí)驗(yàn)1制粒得到的顆粒休止角過大，表明其流動(dòng)性太差，不利于工業(yè)生產(chǎn)，且壓片得到的分散片硬度太小，輕壓即碎，不利于藥品的運(yùn)輸，故該填充劑不適合。實(shí)驗(yàn)2用MCC作填充劑得到的顆粒流動(dòng)性良好，但需在較大壓力下壓片，且得到的分散片硬度過大，崩解時(shí)間過長(zhǎng)，不合適單獨(dú)做填充劑。實(shí)驗(yàn)3用預(yù)膠化淀粉作填充劑得到的顆粒流動(dòng)性較好，崩解也快，但壓片得到的分散片硬度太小，故也不適合單獨(dú)做填充劑。綜合分散片的硬度、崩解度以及顆粒的流動(dòng)性，選用MCC和預(yù)交化淀粉混合使用做填充劑最為合適。

2.5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

由影響分散片的崩解時(shí)限和壓片操作的因素，設(shè)計(jì)一個(gè)三因素三水平的正交試驗(yàn)來優(yōu)化相關(guān)因素，試驗(yàn)方案見表2～4。

由表4結(jié)果可見，填充劑對(duì)分散片硬度的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各因素影響順序?yàn)锳>C>B，填充劑對(duì)分散片崩解時(shí)間的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各因素影響順序?yàn)锳>C>B。綜合各指標(biāo)的最佳工藝，選擇2個(gè)或2個(gè)以上指標(biāo)均較佳的工藝條件[17-19]，并結(jié)合分散片的成型性及感官評(píng)價(jià)，優(yōu)選工藝為A3B2C1，即MCC-預(yù)膠化淀粉（3︰1）作為填充劑，2.0%PVPP作為崩解劑，0.5%硬脂酸鎂作為潤(rùn)滑劑。最終確定苦參分散片最優(yōu)處方工藝設(shè)計(jì)為：主藥量為25%的苦參乙酸乙酯部位，矯味劑為1%的阿斯巴甜，黏合劑為1.4～1.6 mL/100 g的蒸餾水，潤(rùn)滑劑為1%的硬脂酸鎂，崩解劑為2%的交聯(lián)聚維酮（PVPP），MCC-預(yù)膠化淀粉（3∶1）作為填充劑（71%）。

2.6 苦參分散片的溶出度檢測(cè)

2.6.1 色譜條件

色譜柱Sunfire C18（Waters，250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水= 80︰20（0.1%甲酸）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：300 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：25℃。分別取苦參酮對(duì)照品溶液和苦參分散片供試品溶液進(jìn)樣，高效液相色譜圖見圖1。

2.6.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在105℃干燥至恒重的苦參酮對(duì)照品4.21 mg，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成每1 mL含421 μg的對(duì)照品溶液貯備液。

2.6.3 供試品溶液制備

取苦參分散片6片，粉碎，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，加塞，精密稱重，超聲（功率500 W，頻率40 kHz）處理30 min，放冷，再精密稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，震蕩搖勻，濾過（0.45 μm微孔濾膜過濾），取續(xù)濾液，即得。

2.6.4 方法學(xué)考察

2.6.4.1 線性關(guān)系 分別精密量取苦參酮對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋成一系列濃度為0.421、0.211、0.105、0.053、0.027、0.014 mg/mL，注入高效液相色譜儀，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以苦參酮濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3.92×104X-7527，R2=0.9999，表明苦參酮在0.014～0.421 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取0.421 mg/mL對(duì)照品溶液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容，精密吸取20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6針，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。計(jì)算苦參酮峰面積的RSD為1.06%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6.4.3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取苦參片分散片6片，依“2.6.3”項(xiàng)下制備供試品溶液方法處理，平行操作6份，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。計(jì)算苦參酮峰面積的RSD為1.77%，結(jié)果表明，該方法的重現(xiàn)性良好。

2.6.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取苦參分散片6片，精密稱定，依“2.6.3”項(xiàng)下制備供試品溶液方法處理，分別于0、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算苦參酮峰面積的RSD為1.03%，結(jié)果表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.4.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的苦參分散片約0.2 g，共6份，分別精密加入0.421 mg/mL苦參酮對(duì)照品溶液2 mL，依“2.6.3”項(xiàng)下制備供試品溶液方法處理，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算苦參酮回收率為99.83%，RSD為1.25%，結(jié)果見表5。

2.6.5 溶出介質(zhì)的選擇

由于苦參降糖活性部位在水中難溶，因此分別用水、4%吐溫-80、人工胃液、0.5%十二烷基硫酸鈉（SDS）作為溶出介質(zhì)。取苦參分散片6片，按照溶出度測(cè)定法（根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版二部附錄XC溶出度測(cè)定法第一法），加入溶劑500 mL[15]，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，45 min時(shí)，取溶液5 mL，濾過，測(cè)定，結(jié)果水、4%吐溫-80、人工胃液、0.5%SDS的溶出度分別為35.8%、71.3%、43.6%、81.1%。在0.5%SDS中，苦參酮的溶出度最大，故選定0.5%SDS作為溶出介質(zhì)。

2.6.6 溶出度的測(cè)定

按照《中國(guó)藥典》2010版二部附錄XC溶出度測(cè)定法（第一法）進(jìn)行測(cè)定?？鄥⒎稚⑵瑸殡y溶性藥物，為了增加藥物的溶解度，促進(jìn)藥物的釋放，往往采用在釋放介質(zhì)中加入表面活性劑的方法[20]。根據(jù)表6實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們選擇0.5% SDS溶液作為溶出介質(zhì)，溶液體積為500 mL，介質(zhì)溫度：（37±0.5）℃。采用轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)速：100 r/min，取樣時(shí)間：5、10、20、30、45、60 min，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)分別吸取溶液5 mL，并立即補(bǔ)充5 mL同溫度的介質(zhì)，溶出液用0. 45 μm的微孔濾膜過濾，精密吸取續(xù)濾液2 mL，用介質(zhì)稀釋并定容至5 mL作為樣品液。另精密稱取6份苦參分散片研細(xì)，按“2.6.3”項(xiàng)方法配制，作為對(duì)照溶液。分別取樣品液及對(duì)照液采用前述的高效液相色譜法在300 nm波長(zhǎng)處測(cè)定苦參酮的量，并以此計(jì)算累積溶出度，結(jié)果見表6。

結(jié)果表明，本品的累積溶出度在45 min內(nèi)隨溶出時(shí)間增加而上升，45 min后漸漸趨于平穩(wěn)，溶出度均可達(dá)80%以上，片劑間差異小。

3 討論

糖尿病是一種多病因的代謝性疾病，其特點(diǎn)是慢性高血糖，伴隨因胰島素分泌或作用缺陷所引起的糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂，2型糖尿病占患者群體的90%以上，目前我國(guó)糖尿病患病率達(dá)9.7%，給社會(huì)醫(yī)療保障體系帶來極大負(fù)擔(dān)。傳統(tǒng)中醫(yī)藥是我國(guó)寶貴的文化遺產(chǎn)，為人類健康事業(yè)做出了巨大貢獻(xiàn)。我國(guó)擁有豐富的中草藥資源和幾千年利用天然藥物防病治病的臨床經(jīng)驗(yàn)，因而從中草藥中尋找新穎的抗糖尿病藥物蘊(yùn)含著巨大的潛力。已有文獻(xiàn)報(bào)道苦參提取物及其化學(xué)成分有良好的抗糖尿病活性，但它們以其原型藥物應(yīng)用，不但口感差，穩(wěn)定性差，而且使用不方便。本研究將其制成現(xiàn)代劑型——中藥分散片，可以提高有效成分的溶出度， 促進(jìn)體內(nèi)吸收， 使中藥得到更有效的應(yīng)用，它結(jié)合片劑和液體制劑的優(yōu)點(diǎn)并避免了其缺點(diǎn)，不僅穩(wěn)定性好、便于攜帶、服用方便，還有生物利用度較高的優(yōu)點(diǎn)。既可直接吞服或含于口中吮服，也可投入水中迅速崩解形成均勻的混懸液。本課題在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，結(jié)合中藥化學(xué)、中藥藥劑學(xué)、中藥藥理學(xué)等學(xué)科的現(xiàn)代研究成果，根據(jù)臨床用藥的實(shí)際要求，考慮處方中與功能主治有關(guān)的藥物化學(xué)成分及其性質(zhì)，選擇分散片劑型，對(duì)其制劑工藝方面進(jìn)行研究，為臨床提供一種工藝合理、質(zhì)量可控、穩(wěn)定有效的治療糖尿病藥物提供思路。

（志謝：感謝中南民族大學(xué)藥學(xué)院楊新洲教授對(duì)本研究給予的指導(dǎo)和幫助！）

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