靈芝孢子粉抗宮頸人乳頭瘤病毒感染作用研究

周永麗　徐成康　尹秋梅　趙云荷

[摘要]目的 探討靈芝孢子粉在宮頸人乳頭瘤病毒（HPV）感染治療中的價值。方法 采取HPV DNA第二代雜交捕獲實驗（HC-Ⅱ）與陰道鏡及宮頸活組織病理檢查相結合方法檢測出HPV感染患者，將2014年3月～2015年3月的100例HPV感染患者隨機平均分為4組，第一組為靈芝孢子粉組，服用粵微牌靈芝孢子粉3個月；第二組為干擾素組，用安達芬栓（重組人干擾素a2b栓）3個療程；第三組為靈芝孢子粉+干擾素組，同時服用靈芝孢子粉和外用安達芬3個療程；第四組為空白對照組，不采取任何治療措施，3個月后觀察HPV感染自然轉歸。隨訪3個月，3個月用藥不中斷，3個月后采用同樣方法檢測這些患者HPV感染情況，并對4組患者的治療效果進行統(tǒng)計學分析。結果 所有用藥組在用藥3個月后HPV的DNA拷貝量下降。靈芝孢子粉加干擾素組下降最明顯，其次是單純用靈芝孢子粉組。用藥組在用藥后3個月細胞病理學有改善傾向，炎癥消退明顯。其中也是靈芝孢子粉加干擾素組下降最明顯，其次是單純用靈芝孢子粉組。結論 靈芝孢子粉對宮頸人乳頭瘤病毒感染具有治療作用。

[關鍵詞]靈芝孢子粉；宮頸人乳頭瘤病毒感染；治療；炎癥

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是引起宮頸癌及其癌前病變的主要原因，在99%的宮頸癌中可以檢測到HPV的感染，其中涉及到大約15種致癌型HPV。而流行病學和基礎研究亦證實高危型人乳頭瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPv）持續(xù)感染是宮頸上皮內瘤樣病變（cervicalintraepithelial neoplasia，CIN）和宮頸癌的主要病因。靈芝孢子粉作為目前較佳免疫調節(jié)劑，可顯著提高人體免疫功能。鑒于目前在臨床上還沒有有效的抗病毒藥和疫苗，清除病毒束手無策，只有靠人體自身清除。本研究組在臨床上觀察到因其他疾病使用靈芝孢子粉的患者HPV轉陰率較高，故認為靈芝孢子粉對HPV感染具有治療作用。該研究旨在探討靈芝孢子粉治療宮頸HPV感染的臨床療效及價值。

1.資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年3月～2015年3月于中山大學附屬第一醫(yī)院婦科門診檢測出HPV高危型感染的100例患者為研究對象。年齡23～56歲，平均35.4歲。所有患者均有月經周期，大致正常；86例已婚，14例未婚，均有性生活史。納入標準：（1）陰道分泌物檢查正常，TCT顯示鱗狀上皮內低度病變以下，宮頸高危型HPV感染，陰道鏡檢查及組織病理診斷明確為CIN I級以下；（2）既往月經周期規(guī)律，無其他影響臨床治療因素；（3）無藥物過敏史，無肝腎功能異常、心肺功能不全、免疫系統(tǒng)疾病。所有研究對象均對本研究內容知曉并同意，同時經過醫(yī)院倫理委員會通過。

1.2HPV檢測方法

HPV DNA第二代雜交捕獲實驗（hvbrid capture-2，HC-Ⅱ）與陰道鏡檢查及宮頸活組織病理檢查相結合方法，首先對慢性宮頸炎級宮頸糜爛患者進行HC-Ⅱ篩查，對結果示HPV感染陽性患者進行陰道鏡檢查，對碘試驗陰性區(qū)或可疑病變部位取活檢送病理檢查，病理檢查結果是宮頸癌前病變（CIN）者則納出本研究，建議手術治療，結果僅為HPV病毒感染患者納入研究。檢測所需試劑盒：digene hybrid capture 2（HC2）high-risk HPV DNAtest（96測試/盒）。臨床判定標準：≥1.0pg/mL（相當于5000拷貝/反應）。

1.3藥物選擇

靈芝孢子粉選用由中國科學院微生物研究所研制的粵微牌靈芝孢子粉（廣東省粵微食用菌技術有限公司，G20050249），每天6包沖服，一個月為一療程，持續(xù)用3個療程；干擾素選擇安徽安科生物工程（集團）股份有限公司生產的安達芬栓（重組人干擾素a2b栓），每次一枚塞陰道后穹窿，隔日一次，10次為一療程，持續(xù)用3個療程。

1.4研究分組及方法

采取HPV DNA第二代雜交捕獲實驗（hybrid capture-2，HC-Ⅱ）與陰道鏡及宮頸活組織病理檢查相結合方法檢測出HPV感染患者，將100例HPV感染患者隨機平均分為4組，第一組為靈芝孢子粉組，服用粵微牌靈芝孢子粉3個月；第二組為干擾素組，用安達芬栓（重組人干擾素a2b栓）3個療程；第三組為靈芝孢子粉+干擾素組，同時服用靈芝孢子粉和外用安達芬3個療程；第四組為空白對照組，不采取任何治療措施，3個月后觀察HPV感染自然轉歸。隨訪3個月，3個月中用藥不中斷，3個月后采用同樣方法檢測這些患者HPV感染情況，并作統(tǒng)計學分析4組患者治療效果有無顯著統(tǒng)計學差異。治療效果判定標準參照《臨床疾病診斷依據治愈好轉標準》。在HPV DNA載量層面：痊愈，HC2<1pg/mL；顯效，HC2下降>60%；有效，HC2下降>30%；無效，HC2下降<30%或上升。在宮頸細胞學層面：痊愈，未發(fā)現非典型增生；顯效，異型增生細胞或挖空細胞減少2/3以上；有效，異型增生細胞或挖空細胞減少1/3到2/3；無效，無明顯改變。

1.5統(tǒng)計學處理

所有數據統(tǒng)計采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行，組間比較采用t檢驗及LSD和SNK分析。計數資料以百分比表示，采用x2檢驗，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2.結果

2.1用藥前各組HC2比較

考察用藥前各組HC2，與空白對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.2用藥后各組HC2比較

考察用藥后各組HC2，與空白對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01），見表2。同時可以看出，在總有效率方面，靈芝孢子粉+干擾素組顯著高于常規(guī)療法干擾素組（x2=1.47，P<0.05）為最高，靈芝孢子粉組次之，其次是干擾素組。

3.討論

人乳頭瘤病毒感染是引起宮頸癌及其癌前病變的主要原因，在約99%的宮頸癌中可以檢測到HPV的感染，其中涉及到致癌型HPV大約15種。而流行病學和基礎研究亦充分證實高危型人乳頭瘤病毒持續(xù)感染是宮頸上皮內瘤樣病變和宮頸癌的主要病因。以往對于宮頸癌的預防主要是靠細胞學普查及治療癌前病變，后來隨著HPV與宮頸癌關系的確定，HPV篩查在臨床被采用。HPV篩查的目的主要是確定重點預防對象，在預防宮頸癌過程中，預防及治療HPV感染極其重要，對早期HPV感染者進行干預，在提高遠期防治HPV的致瘤性和腫瘤形成方面具有積極的意義。目前已經有預防HPV感染的疫苗，然而效果如何尚難確定。患者被檢查出HPV感染后非常擔憂，急切希望清除此病毒，然而對HPV感染的治療尚無良策，臨床醫(yī)生也只能表現出無奈。尋找有效控制HPV感染的方法是目前預防宮頸癌的重要任務?，F在對HPV感染的治療尚無特效方法，HPV治療性疫苗還在研究。75%女性在一生中都有可能感染HPV，但是大多數可以自身清除，一般情況平均感染時間8個月。除了部分高危型HPV可導致宮頸持續(xù)感染，多數HPV病毒可逐漸通過機體自身免疫系統(tǒng)被清除，不發(fā)展為浸潤癌。研究表明，CIN的發(fā)生與高危型HPV載量有關，CIN發(fā)生危險度與病毒承載量成正比，因此早期診斷和治療宮頸高危型HPV持續(xù)感染對預防宮頸浸潤癌的發(fā)生至關重要。

以往多采用物理方法，如冷凍、激光、微波、電灼、聚焦超聲及LEEP刀等。也有采用干擾素及中藥局部使用。應用較多的是局部使用保婦康栓，保婦康是純中藥制劑，主要成份有莪術油、冰片等，具有活血、清熱、化瘀、止痛的作用。干擾素作為一種廣譜抗病毒藥物能抑制病毒RNA的復制，調節(jié)機體免疫功能，同時還能誘導內源性干擾素的產生，提高機體免疫能力。還有學者局部使用苦參軟膏、雄黃及聚甲酚磺醛也有一定效果。全身使用的藥主要是中藥，也有一定效果。但以上這些治療遠未達到滿意效果，治療后復發(fā)率高。如何控制宮頸高危型HPV持續(xù)感染成為當前需要迫切解決的難題。尋找其它更有效及長效的方法是本課題組的研究方向。

受皰疹治療的啟發(fā)，本研究組發(fā)現靈芝孢子粉除了可以治療腫瘤外，對病毒感染性疾病也有很好效果，實踐中發(fā)現應用靈芝孢子粉的患者感冒發(fā)生率很低。由此可以認為靈芝孢子粉應該可以治療HPV的感染，試用后發(fā)現結果與預想的一致。

靈芝孢子粉是靈芝散發(fā)出來的孢子體，藥理研究已發(fā)現，靈芝孢子粉對脾細胞分泌IL-2具有促進作用，并能明顯促進脾細胞的轉化與增殖，增強巨噬細胞的吞噬作用。提示靈芝孢子粉可以通過增強機體免疫力來抵御或清除病毒感染。

在研究靈芝孢子粉治療皰疹的機制時發(fā)現靈芝孢子中含有至少兩類抗病毒物質，一類是水溶性物質，另一類是甲醇溶性物質。已經有研究發(fā)現水溶性物質具有特別的抑制單純皰疹病毒HSV-1和HSV-2的活性，進一步研究發(fā)現，從靈芝孢子中得到的4種抗皰疹病毒物質是蛋白結合多糖，其中酸I生蛋白結合多糖（APBP）顯示了最強的抗皰疹病毒的活性。

在本研究中發(fā)現口服靈芝孢子粉加局部使用干擾素效果最明顯，也許是兩種藥物通過不同的機理起到協(xié)同治療作用。在本研究還發(fā)現單純的靈芝孢子粉口服治療效果優(yōu)于單純的外用干擾素。因此在治療HPV感染中，口服靈芝孢子粉可作為治療措施之一，最好與干擾素聯合使用。由于本研究時間為3個月，遠期效應還有待進一步研究。