李建霞
摘要:通過對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和沙門氏菌的MIC值檢測和MBC值檢測,比較戊癸消,戊二醛癸甲溴銨溶液,復方戊二醛溶液,安立消,百毒殺,月芐三甲氯銨溶液等六種常用消毒劑的抑菌效果,綜合評價以安立消和百毒殺效果最好,安立消對沙門氏菌的消滅作用最強。
關鍵詞:病原菌、MIC值檢測、MBC值檢測
中圖分類號:S 文獻標識碼:B 文章編號:2096-3637(2017)07-0034-02
1試驗材料
1.1病原菌
山東省安丘市官莊鎮(zhèn)某雞場糞便培養(yǎng)的雜菌,主要包括大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌,大腸桿菌及沙門氏菌標準株(安丘市畜牧檢測中心保存)。
1.2消毒劑
戊癸消,戊二醛癸甲溴銨溶液,復方戊二醛溶液,安立消,百毒殺,月芐三甲氯銨溶液等六種常用消毒劑。
1.3其它材料
無菌平皿、營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂、TSB(胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基)、胎牛血清、微量移液器。
2試驗方法
2.1消毒劑對細菌的MIC值檢測
(1) 將雜菌接種到盛有10ml肉湯的試管中,置于37℃溫箱過夜培養(yǎng),將培養(yǎng)好的菌液稀釋100倍。(2)將制備好的菌液進行活菌計數(shù)并測定菌液OD600值,然后用液體培養(yǎng)基稀釋,使試驗菌液的含菌量為5×105~5×106cfu/ml;(3)取96孔微量反應板,每孔加入100μL滅菌純化水;(4)于第一孔加稀釋l00倍的消毒劑,混勻后,倍比稀釋直至第10孔,混勻后取出100μL棄去,第11孔不加消毒劑作為陰性對照,第12孔作為陽性對照;(5)將稀釋到106cfu/mL的100μL菌液加入到1~11孔,混勻;(6)置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h,若發(fā)生混濁即表示有細菌生長。
2.2消毒劑對細菌的MBC值檢測
(1)將制備的菌懸液進行活菌計數(shù),然后用無菌水稀釋成106 ~107cfu/mL;
(2)于第一孔加稀釋250倍的消毒劑100μL,混勻后,倍比稀釋至第五孔,消毒劑稀釋倍數(shù)分別為500倍、1000倍、2000倍、4000倍、8000倍,設置陽性對照;(3)將稀釋好的菌液加入到消毒劑中,室溫作用30min后進行涂板檢驗;
(4)置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h;(5)進行活菌計數(shù),計算殺菌率。
3試驗結果與分析
由表1可以看出,安立消、百毒殺對金黃色葡萄球菌抑菌作用最好(1:25600)
3.1金黃色葡萄球菌MIC值檢測結果
3.2大腸桿菌分離株MIC值檢測結果
由表2可以看出,戊二醛癸甲溴銨溶液,安立消,百毒殺,月芐三甲氯銨溶液4種產(chǎn)品對大腸桿菌抑菌作用都較好(1:51200)
3.3沙門氏菌MIC值檢測
3.4殺菌效果分析
由表3可以看出,復方戊二醛,安立消,百毒殺三種產(chǎn)品對沙門氏菌的抑菌作用最強(1:51200)
從表4中得出在1:2000倍稀釋時這4種消毒劑都能將金黃色葡萄球菌分離株100%殺死。
從表5中得出在1:2000倍稀釋時這4種消毒劑都能將大腸桿菌分離株100%殺死。
從表6中得出在1:2000倍稀釋時這4種消毒劑都能將沙門氏菌100%殺死,產(chǎn)品1,產(chǎn)品4,產(chǎn)品6在1:4000開始有細菌生長,在1:8000時安立消作用最強。產(chǎn)品6殺滅作用最差。
4討論
試驗結果表明,6種消毒劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌均有不同程度的抑制和殺滅作用,其中安立消和百毒殺對3種細菌的抑制作用都很好;將消毒劑1:2000倍稀釋和1:4000倍稀釋時都能將3種細菌100%殺死,在對沙門氏菌的殺滅試驗中,安立消作用最強。