兩種多糖對小白鼠機(jī)體免疫力效果的影響

薛梅

摘 要：天然活性多糖對機(jī)體沒有明顯的毒副作用，不但具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等生物功能，還具有抗炎癥、抗氧化等多種生物功能。而在畜禽保健中，植物多糖具有毒副作用小、無殘留等優(yōu)點，屬于一種天然的產(chǎn)品。為了比較2種多糖對提高小白鼠機(jī)體免疫力效果的影響，本文以枸杞多糖和黃芪多糖為例，對小白鼠進(jìn)行灌胃，并測試了外周血IgG、IgM含量，同時對其免疫器官指數(shù)等也進(jìn)行了測量，從而以期能夠以這種多糖作為功效成分的動物保健品的開發(fā)，提供一些質(zhì)量控制、合理配方和制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：枸杞多糖；黃芪多糖；小白鼠；機(jī)體免疫力

中圖分類號：Q629.12 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20170532004

進(jìn)入21世紀(jì)以來，畜牧養(yǎng)殖業(yè)進(jìn)入了工業(yè)化生產(chǎn)中，畜牧養(yǎng)殖業(yè)得到了快速的發(fā)展。但同時在畜禽中往往無法建立充分的免疫環(huán)境，受許多因素的影響，畜禽免疫力下降，預(yù)防免疫效果不佳。大量研究認(rèn)為，多糖及多糖復(fù)合物能夠參與免疫功能的調(diào)節(jié)，參與和介導(dǎo)了細(xì)胞各種生命現(xiàn)象的調(diào)節(jié)。而機(jī)體的免疫力系統(tǒng)及其免疫應(yīng)答不但對各種正常生理功能的提高具有重要作用，還對機(jī)體的健康成長具有重要作用。根據(jù)相關(guān)研究表明，枸杞多糖能明顯提高小白鼠足跖腫脹度、脾臟生成抗體細(xì)胞數(shù)等，對小白鼠淋巴細(xì)胞增殖能力無顯著影響，并且對正常小白鼠的細(xì)胞免疫、體液免疫力及巨噬細(xì)胞功能都有明顯的增強(qiáng)作用。而黃芪含有氨基酸多糖、黃茂皂貳、黃酮類、微量元素等多種生物活性物質(zhì)，是臨床上用于扶正固本的一種常用中藥。其中黃芪多糖具有較強(qiáng)的免疫活性，是黃芪的主要藥用活性成分。根據(jù)相關(guān)研究表明，黃芪多糖能顯著增大小白鼠脾臟指數(shù)、腹腔巨噬細(xì)胞指數(shù)、胸腺指數(shù)，能夠顯著提高小白鼠的免疫功能，同時還能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖。為了比較2種多糖對提高小白鼠機(jī)體免疫力效果的影響，本文以枸杞多糖和黃芪多糖為例，對小白鼠進(jìn)行灌胃，并測試了外周血IgG、IgM含量，同時對其免疫器官指數(shù)等也進(jìn)行了測量，從而以期能夠以這種多糖作為功效成分的動物保健品的開發(fā)，提供一些質(zhì)量控制、合理配方和制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和試驗動物

選用了北京生態(tài)爾生物科技有限公司生產(chǎn)的黃芪多糖，選用了百瑞元枸杞產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司生產(chǎn)的枸杞多糖，黃芪多糖的含量為70%，枸杞多糖的含量為30%。試驗動物購自某醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，4～6周齡、雄性的ICR小白鼠，小白鼠屬于SPT級，共90只，飼養(yǎng)于SPF級屏障環(huán)境中，符合國建實驗動物飼養(yǎng)及管理條例，并且飼養(yǎng)的時候選用了進(jìn)口獨立通風(fēng)籠具。

1.2 主要試劑和主要儀器

主要試劑購自R&D公司，包括小白鼠免疫球蛋白G（IgG），批號為2014-5cx-2014-11AZ免疫球蛋白M（IgG）定量檢測卡。主要儀器選自上海安亭科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的離心機(jī)；上海科華儀器有限公司生產(chǎn)的酶標(biāo)儀、自動洗板機(jī)；天津泰斯特有限公司生產(chǎn)的電熱恒溫器；圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的血常規(guī)分析儀。

1.3 實驗動物分組與給藥

隨機(jī)將90只小白鼠分為3組，每組30只，按照體重140mg/kg將小白鼠分為試驗組，并進(jìn)行多糖灌胃，其中，將枸杞多糖灌于A組小白鼠的胃中，將黃芪多糖灌于B組小白鼠胃中；將枸杞多糖和黃芪多樣等量復(fù)配后灌于C組小白鼠胃中，連續(xù)灌胃30d，小白鼠自由采食。

1.4 檢測指標(biāo)

1.4.1 檢測生長狀況及增重率

試驗開始前及試驗開始后，每隔10d對小白鼠的體重進(jìn)行測量1次。不但要觀察小白鼠毛色、飲食等情況，還要觀察小白鼠的精神狀況如何和活動情況。

1.4.2 血常規(guī)檢測

在試驗開始后，在各組取10只小白鼠，每隔10d對這些小白鼠進(jìn)行稱量體重。屠宰前在小白鼠的尾部，靜脈采血20μL，并放置到稀釋液中進(jìn)行分析，分析的時候選用血常規(guī)分析儀，不但對白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行測定，還要對紅細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行測定。

1.4.3 外周血IgG、IgM含量的檢測

屠宰前，各組小白鼠要摘眼球采血0.5mL，并且要在室溫條件下放置1h。同時為了使血清充分析出，要將凝固血與管壁剝離。收集血清要在2000r/min離心10min，檢測的時候選用小白鼠IgG/IgM酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒。

1.4.4 免疫器官指數(shù)的測定

小白鼠處死的方法采用脫頸椎方法，為了計算出胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，解剖后取出胸腺和脾臟，并分別對小白鼠的尸體進(jìn)行稱重。計算公式為：胸腺或脾臟指數(shù)=胸腺重或脾臟重（mg）/體重（g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 血液IgG、IgM含量受枸杞多糖、黃芪多糖及其組合的影響

根據(jù)上述試驗得出枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對血液IgG、IgM含量的影響結(jié)果（表1）。

由此可見：在灌服10d的時候，在IgG 含量方面，A組與C組進(jìn)行比較P<0.05，差異顯著。灌服20d的時候，在IgG 含量方面，A組與C組比較p<0.01，差異極其顯著；在灌服30d的時候，在IgG 含量方面，A組與B組進(jìn)行比較P<0.05，差異顯著。在灌服10d的時候，在IgM含量方面，A組、B組與C組進(jìn)行比較P<0.05，差異顯著；在灌服30d的時候，在IgM含量方面，A組與B組進(jìn)行比較P<0.05，差異顯著。充分說明，枸杞多糖效果優(yōu)于其他多糖，在枸杞多糖灌服的10d、20d、30d的時候，IgM含量最終達(dá)到了一個較高的水平，但是逐漸增加的狀態(tài)，而IgG 含量始終維持在一個較高的水平上。

2.2 枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對血細(xì)胞的影響

根據(jù)上述試驗，得出了枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對血液白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞的影響（109·L-1），灌服枸杞多糖、黃芪多糖及其組合10d的時候，A組、B組、C組分別為8.04±1.73、6.24±1.46、7.93±3.61；灌服20d的時候，A組、B組、C組分別 為：4.95±0.92、7.37±2.27、7.75±3.91；灌服30d的時候，A組、B組、C組分別為： 4.85±0.49、3.63±0.81、4.93±1.53。由此可見，在灌服10d的時候，白細(xì)胞數(shù)量方面：B組和C組略低于A組；而在灌服20d的時候，白細(xì)胞數(shù)量方面：A組明顯低于B組和C組；在灌服30d的時候，白細(xì)胞數(shù)量方面：各組都比前期降低。

2.3 枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對血液淋巴細(xì)胞的影響

根據(jù)上述試驗，得出了枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對血液淋巴細(xì)胞的影響（109·L-1），灌服10d的時候，A組、B組、C組分別為：6.38±1.45、 5.12±1.39、6.13±2.22；灌服20d的時候，A組、B組、C組分別為：3.62±1.20、3.57±0.90、3.52±1.40；灌服30d的時候，A組、B組、C組分別為： 2.65a±0.35、2.76a±0.50、3.93b±1.27。（注：沒有肩標(biāo)或字母相同表示差異不顯著P>0.05，同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母不同表示差異顯著P<0.05）。由此可見，淋巴細(xì)胞數(shù)量在灌服10d、20d的時候，A組略高于B組和C組，但各組差異不顯著（P>0.05），在灌服30d的時候，C組數(shù)量高于A組和B組，并且A組和B組細(xì)胞數(shù)量與C組比較差異顯著（P<0.05）。

2.4 枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對血液紅細(xì)胞數(shù)量的影響

根據(jù)上述試驗，得出了枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對血液紅細(xì)胞數(shù)量的影響（1012·L-1），灌服10d的時候，A組、B組、C組分別為9.36a±0.40、 7.80b±1.54、9.39a±0.23；灌輸20d的時候，A組、B組、C組分別為8.62±0.47、9.85±0.32、9.30±0.88 ；灌輸30d的時候，A組、B組、C組分別為 8.43±0.99、9.03±0.11、9.54±0.17。（注：沒有肩標(biāo)或字母相同表示差異不顯著P>0.05，同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母不同表示差異顯著P<0.05）由此可見，在灌服枸杞多糖、黃芪多糖及其組合10d的時候，A組和C組的紅細(xì)胞數(shù)量與B組比較差異顯著（P<0.05）；在灌服枸杞多糖、黃芪多糖及其組合20d的時候，各組間的紅細(xì)胞數(shù)量差異不顯著（P>0.05）。

2.5 枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對小白鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響

根據(jù)上述試驗，得出枸杞多糖、黃芪多糖及其組合對小白鼠免胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響（ mg·L-1）。灌服10d的時候，A組、B組、C組胸腺指數(shù)分別為： 2.44a±0.02、2.22a±0.02、2.44a±0.02，脾臟指數(shù)分別為： 4.01a±0.15、4.15a±0.06、 4.01a±0.14；灌服20d的時候，灌服10d的時候，A組、B組、C組胸腺指數(shù)分別為2.45a±0.01、 2.37a±0.03、2.47a±0.01，脾臟指數(shù)分別為： 4.39a±0.07、4.60a±0.07、4.39a±0.07；灌服30d的時候，灌服10d的時候，A組、B組、C組 胸腺指數(shù)分別為：2.59a±0.10、 2.59a±0.04、2.59a±0.09，脾臟指數(shù)分別為：4.84a±0.11 、4.67a±0.05、 4.83a±0.10。（注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母相同表示差異顯著P>0.05）。由此可見，在灌服枸杞多糖、黃芪多糖及其組合10d、20d、30d的時候，各組間的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

3.1 枸杞多糖和黃芪多糖及混合多糖對小白鼠血細(xì)胞數(shù)量的影響

通過吞噬和產(chǎn)生抗體等方式，包細(xì)胞具有抵御和消滅入侵病原微生物的作用。本試驗結(jié)果表明：在灌服枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖的第10天的時候，具有較好效果的是枸杞多糖；在灌服枸杞多糖和黃芪多糖及其組合的第20天的時候，具有較好效果的是混合多糖；在灌服枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖的第30天的時候，具有較好效果的也是混合多糖。根據(jù)殷海成的研究證實：將免疫多糖添加到飼料中，能夠使中華倒刺鲃血液中的白細(xì)胞數(shù)量得到增加；并且血液白細(xì)胞通過廣泛的動員之后，能夠具有吞噬作用，能夠提升非特異性免疫功能，同時也大大增強(qiáng)了吞噬的能力。而淋巴細(xì)胞是由淋巴器官而產(chǎn)生的，屬于白細(xì)胞中的一種，是機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成份。本試驗中，在灌服枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖的第10天的時候，A組淋巴細(xì)胞數(shù)量最多，并且在灌服枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖的第20天的時候，A組淋巴細(xì)胞數(shù)量也是最多，由此可見，對于淋巴細(xì)胞的增值來說，枸杞多糖具有很好的效果。

3.2 枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖對小白鼠血清中IgG、IgM含量的影響

IgG能夠促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用，能夠調(diào)理巨噬細(xì)胞，是初級免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體。根據(jù)本試驗統(tǒng)計結(jié)果顯示，在對提高小白鼠血清中IgG水平的作用上，黃芪多糖和混合多糖明顯低于枸杞多糖。肖征忠等研究發(fā)現(xiàn)，小白鼠血清中的IgG水平在飼喂低劑量灰樹花多糖后，得到了顯著地提升，由此可見，對于小白鼠體液免疫來說，灰樹花多糖具有增強(qiáng)的作用。與IgG相比，在殺菌、溶菌等方面，IgM高出500～1000倍，并且在促吞噬和凝集方面也高出很多，是高效能的抗生物抗體，是抗原刺激誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的免疫球蛋白。張志軍等研究證實，在IgM水平方面，茯苓多糖處理組高于生理鹽水對照組。本試驗中，在灌服枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖第10天、20天、30天的時候A組的IgG水平始終維持在一個較高的水平，而IgM水平也會最終達(dá)到一個較高的水平，但是呈現(xiàn)逐漸升高的態(tài)勢，充分說明，與黃芪多糖和混合多糖相比，枸杞多糖效果最優(yōu)。

3.3 枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖對小白鼠生長狀況、體重及其免疫器官指數(shù)的影響

一定程度上，免疫器官指數(shù)能夠反應(yīng)出動物機(jī)體的免疫能力。本試驗說明，枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖都可以提高小白鼠的體重，并且與黃芪多糖和混合多糖相比，枸杞多樣明顯具有最優(yōu)的作用；但是由于本次試驗采用灌服方式，與黃芪多樣和緩和多樣相比，枸杞多糖比較差異不顯著（P>0.05），具有提高免疫器官指數(shù)最明顯的效果。從藥物代謝動力學(xué)角度考慮，采用灌服或注射等方式，會影響到枸杞多糖和黃芪多糖及其混合多糖的吸收。

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