布洛芬顆粒有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法研究

蘇德龍

【摘 要】目的：建立一種能用于布洛芬顆粒中有關(guān)物質(zhì)控制的HPLC方法。方法：采用YMC C18 （ 150 mm×4. 6 mm，5 μm）色譜柱；流速：2 ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm；流動(dòng)相：磷酸溶液（pH2.5）- 乙腈（66：34）；柱溫：30℃；進(jìn)樣量為5μL。結(jié)果：布洛芬與其各雜質(zhì)能達(dá)到基線分離；布洛芬顆粒中的輔料不干擾有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定；方法的線性、準(zhǔn)確性、靈敏度均能滿足要求。結(jié)論：本文所建方法為布洛芬顆粒的評(píng)價(jià)、質(zhì)量控制提供了較好的分析手段。

【關(guān)鍵詞】布洛芬顆粒 有關(guān)物質(zhì) RP-HPLC

【Abstract】 Objective：To develop an HPLC method for determination the related substances of Ibuprofen granules.Method：The separation was performed on a column of YMC C18 （ 150 mm×4. 6 mm，5 μm）， with acetonitrile：pH2.5 phosphate buffer （66 ： 34） as the mobile phase at flow rate of 2.0ml/min. The detection wavelength was 214 nm. The injection amounts of sample solutions were 5μL. Result：Ibuprofen and its related substances can be well separated from each other on the developed system. The excipients in ibuprofen granules did not affect the determination of related substances. Linearity， accuracy，sensitivity and robustness of the method could meet the specific analytical requirements. Conclusion The developed method can be successfully applied to the quality control of Ibuprofen granules.

【Keywords】 Ibuprofen granules； related substances； RP-HPLC

布洛芬（Ibuprofen） 是一種療效確切、安全的非甾體抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛藥物。臨床上用于風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎的長(zhǎng)期治療， 還廣泛用于治療各種中度疼痛及炎癥、發(fā)熱等疾病， 其治療效果明顯， 對(duì)消化道的副作用較阿司匹林、吲哚美辛小。布洛芬顆粒為布洛芬原料藥和輔料蔗糖、糊精按比例制成的顆粒劑。目前，由于布洛芬顆粒藥品標(biāo)準(zhǔn)中無有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)目，而有關(guān)物質(zhì)是目前藥品安全性評(píng)價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)。為更好的評(píng)價(jià)及控制布洛芬顆粒的質(zhì)量，本研究參考美國(guó)藥典（USP32-NF27）及相關(guān)文獻(xiàn)[1]中布洛芬有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，確定了一種專屬性好，簡(jiǎn)單可靠的布洛芬顆粒有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀，LHH-250GP型藥品強(qiáng)光穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，LHH-250HD型藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，DZF-6210型真空干燥箱。

布洛芬標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100179-201105），布洛芬顆粒（哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠，規(guī)格：0.2g），乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：YMC C18（150mm×4.6mm，5μm）；流速：2 ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm；流動(dòng)相：磷酸溶液（pH2.5）-乙腈（66：34）；柱溫：30℃。

2.2 溶液制備

取布洛芬顆粒適量（約相當(dāng)于布洛芬1 g），精密稱定，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密量取1ml，置100ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

2.3 測(cè)定方法

精密吸取供試品溶液和對(duì)照溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。

2.4 專屬性試驗(yàn)

2.4.1 空白輔料干擾試驗(yàn)

（1）布洛芬對(duì)照品溶液：精密稱取布洛芬對(duì)照品適量，用乙腈溶解并稀釋成每1ml約含布洛芬1mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

（2）空白輔料溶液：精密稱取按處方比例混合均勻的空白輔料約4g，置100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得。

（3）布洛芬顆粒供試品溶液：取布洛芬顆粒，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉約5g，置100ml量瓶中，同2）中方法制備，即得。

精密吸取上述溶液各5μl，依2.1中色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果見圖1。結(jié)果表明空白輔料不干擾布洛芬有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

2.4.2 酸降解

取布洛芬顆粒適量（約相當(dāng)于布洛芬1 g），置100ml量瓶中，加入5 mol·L-1鹽酸溶液10ml，搖勻，室溫放置16h 。用5 mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性，加乙腈稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明布洛芬顆粒在本實(shí)驗(yàn)條件下的酸溶液中較為穩(wěn)定，無明顯降解。

2.4.3 堿降解

取布洛芬顆粒適量（約相當(dāng)于布洛芬1g），精密稱定，置100ml量瓶中，加入5 mol·L-1氫氧化鈉溶液10ml，搖勻，室溫放置16h。用5 mol·L-1鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至中性，加乙腈稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明布洛芬顆粒在本實(shí)驗(yàn)條件下的堿溶液中較為穩(wěn)定，無明顯降解。

2.4.4 氧化降解

取布洛芬顆粒適量（約相當(dāng)于布洛芬1 g），精密稱定，置100ml量瓶中，加入30%過氧化氫溶液10ml，搖勻，室溫放置16h。加乙腈稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明布洛芬顆粒在本實(shí)驗(yàn)的氧化條件下較為穩(wěn)定，無明顯降解。

2.4.5 高溫降解

取布洛芬顆粒適量（約相當(dāng)于布洛芬0.25 g），精密稱定，置7ml玻璃管制注射劑瓶中，105℃放置4h 。轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明布洛芬顆粒在105℃高溫條件下與降解前相比在46min附近出現(xiàn)一雜質(zhì)峰，但降解雜質(zhì)峰能夠與主成分峰達(dá)到有效分離，符合測(cè)試要求。

2.4.6 高濕降解

取布洛芬顆粒適量（約相當(dāng)于布洛芬0.2 g），精密稱定，置7ml玻璃管制注射劑瓶中，于75%RH、40℃放置48h 。轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取25μl，依2.1中色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明布洛芬顆粒在75%RH、40℃條件下較為穩(wěn)定，無明顯降解。

2.4.7 光照降解

取布洛芬顆粒適量（約相當(dāng)于布洛芬0.2g），精密稱定，置7ml玻璃管制注射劑瓶中，于照度為4500lx±500lx、45℃放置5d 。轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取25μl，依2.1中色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明布洛芬顆粒在照度4500lx±500lx、45℃條件下較為穩(wěn)定，無明顯降解。

2.5 檢測(cè)限

精密稱取布洛芬對(duì)照品適量，用乙腈溶解并稀釋成每1ml約含布洛芬1mg的溶液，將此溶液用乙腈進(jìn)行倍數(shù)梯度稀釋后，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取5μl注人液相色譜儀，記錄色譜圖。其中，當(dāng)稀釋濃度為12.5ng·ml-1時(shí)，S/N （S：布洛芬峰高；N：最大噪音峰高）約為3，將此時(shí)的進(jìn)樣量定為檢測(cè)限，即在本色譜條件下布洛芬的檢測(cè)限為0.06ng。

2.6 耐用性

2.6.1 溶液穩(wěn)定性

取供試品溶液及對(duì)照溶液室溫放置，分別于0、3、6、9、12、15、18 小時(shí)精密吸取上述溶液各5μl，依2.1中色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果對(duì)照溶液主成分峰面積RSD值為0.32%；供試品溶液總雜質(zhì)峰面積RSD值為2.79%，且未見明顯新雜質(zhì)產(chǎn)生。表明，在室溫條件下布洛芬顆粒對(duì)照溶液及供試品溶液穩(wěn)定性均較好，18 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.2 色譜柱

分別考察了3種不同品牌的色譜柱（YMC-pack ODS-A-302、Agilent Eclipse XDB-C18、Phenomenex Luna C18（2） 100A），規(guī)格均為150 mm×4. 6 mm 5 μm。結(jié)果表明，YMC色譜柱的分離效果最好。因此，本試驗(yàn)中選擇YMC色譜柱用于布洛芬顆粒有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)。

2.6.3 柱溫

分別考察了柱溫25℃、30℃和35℃條件下的色譜圖。結(jié)果表明，在柱溫上下波動(dòng)5℃的范圍內(nèi)，各雜質(zhì)峰與主成分峰軍能得到較好的分離。

2.6.4 流動(dòng)相

分別考察了乙腈與pH為2.5的磷酸水溶液的體積比為33：67、34：66和35：65的色譜圖。結(jié)果表明，流動(dòng)相比例的微小變化并不影響各雜質(zhì)峰與主成分峰的分離。

2.6.5 流速

分別考察了流速為1.9ml·min-1、2.0 ml·min-1、2.1 ml·min-1的色譜圖。結(jié)果表明，流速的微小變化并不影響各雜質(zhì)峰與主成分峰的分離。

2.7 樣品測(cè)定及限度確定

取8批次布洛芬顆粒樣品進(jìn)行測(cè)定。除與對(duì)照溶液色譜圖中溶劑峰相近的色譜峰外，本品的有關(guān)物質(zhì)總和均不大于對(duì)照溶液主峰面積（1%），因此，確定本品的有關(guān)物質(zhì)限度不得大于1%。

3 討論

由于本品的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中無有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)目，參考美國(guó)藥典布洛芬有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法及相關(guān)文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法進(jìn)行本品的有關(guān)物質(zhì)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該色譜條件專屬性好，空白輔料及強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)中各雜質(zhì)峰與主成分峰均有良好的分離；布洛芬的檢測(cè)限為0.06ng；室溫條件下，18h內(nèi)布洛芬顆粒對(duì)照溶液及供試品溶液均較穩(wěn)定；且在此檢測(cè)條件下，色譜柱、柱溫、流動(dòng)相及流速的微小變化對(duì)各雜質(zhì)峰與主峰的分離幾乎無影響。

本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC 測(cè)定布洛芬顆粒有關(guān)物質(zhì)的方法，該色譜方法能夠使各雜質(zhì)與主峰得到良好的分離，方法專屬性好，簡(jiǎn)單可靠，分離度好，可以作為布洛芬顆粒有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]賀秀婷，翟光喜，等.HPLC法測(cè)定布洛芬緩釋膠囊有關(guān)物質(zhì)[J].藥學(xué)研究，2013Vol.32， NO.2： 85-87.