不同果汁飲料對(duì)離體乳牙釉質(zhì)表面超微結(jié)構(gòu)及鈣磷溶出量的影響

黃翔　鄭燕丹　陳凱

【摘要】 目的 探討不同果汁飲料對(duì)離體乳牙釉質(zhì)形態(tài)學(xué)的改變及對(duì)乳牙釉質(zhì)脫礦程度的影響。方法 60顆無(wú)齲壞離體乳牙， 分三組浸泡于3種不同的果汁飲料中（橙汁組、蘋(píng)果汁組、葡萄汁組）， 每組20顆；另取10顆無(wú)齲壞離體乳牙浸泡于礦泉水中作為對(duì)照組， 四組均置于36.5 ℃恒溫箱中， 浸泡25 h， 每5小時(shí)換1次浸泡液。采用pH計(jì)測(cè)量不同果汁飲料的pH值；掃描電鏡（SEM）觀察各組離體乳牙處理前后牙釉質(zhì)表面超微結(jié)構(gòu)的改變；并應(yīng)用化學(xué)分析法測(cè)量各組處理乳牙后飲料中的鈣、磷溶出含量。結(jié)果 橙汁組、蘋(píng)果汁組和葡萄汁組經(jīng)處理后乳牙表面均有不同程度的改變， 牙齒表面均有色素沉著， 顏色發(fā)生一定的改變， 且隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)， 牙齒變色加重。其中橙汁組變?yōu)槌赛S色， 蘋(píng)果汁組變?yōu)闇\綠色， 葡萄汁組變?yōu)樯钭仙?。?duì)照組乳牙牙釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)光滑， 結(jié)構(gòu)致密， 未見(jiàn)凹陷缺損。橙汁組處理后， 牙齒表層釉柱不均勻斷裂， 局部區(qū)域斷裂消失， 牙齒表面有零星的小凹陷；蘋(píng)果汁組處理后， 牙釉質(zhì)呈蜂窩狀結(jié)構(gòu)， 釉中心遭到嚴(yán)重破壞， 表面有比較深的小凹陷， 甚至加大連接成片；葡萄汁組處理后， 表面形態(tài)不規(guī)則， 組織結(jié)構(gòu)疏松， 可見(jiàn)軟質(zhì)懸浮。對(duì)照組、橙汁組、蘋(píng)果汁組、葡萄汁組初始pH值分別為（6.32±0.09）、（3.75±1.01）、（2.94±1.05）、（4.01±1.02）。對(duì)照組、葡萄汁組、橙汁組、蘋(píng)果汁組的pH值依次降低（P<0.05）。果汁飲料處理乳牙25 h后， 橙汁組、蘋(píng)果汁組、葡萄汁組的鈣總?cè)艹隽浚?2.73±1.44）、（15.65±1.47）、（6.73±1.45）mmol/L， 磷總?cè)艹隽浚?0.41±1.43）、（13.19±1.45）、（7.15±

1.39）mmol/L較對(duì)照組的鈣總?cè)艹隽浚?.63±1.37）、磷總?cè)艹隽浚?.46±1.39）mmol/L均顯著升高（P<0.01）， 且蘋(píng)果汁組的鈣、磷溶出量最高。結(jié)論 橙汁、蘋(píng)果汁、葡萄汁飲料均會(huì)對(duì)乳牙釉質(zhì)酸蝕脫礦， 對(duì)牙釉質(zhì)表面造成一定程度的損害， 以蘋(píng)果汁的損害作用最為明顯。

【關(guān)鍵詞】 果汁飲料； 乳牙； 牙釉質(zhì)； 脫礦； 超微結(jié)構(gòu)； 鈣； 磷； 溶出量

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.35.020

【Abstract】 Objective To investigate influence by different fruit drink on in vitro deciduous tooth enamel morphological changes and demineralization degree. Methods A total of 60 in vitro deciduous teeth without carious lesion were divided into three groups with different fruit drink （orange juice group， apple juice group and grape juice group）， with 20 teeth in each group. Another 10 teeth without carious lesion were taken into mineral water as control group. All the four groups were placed in calorstat 36.5℃ for 25 h， with soak solution changed each 5 hours. pH values of differenct fruit drinks were detected by pH paper. Tooth enamel ultrastructure change before and after processing of in vitro deciduous teeth in three groups was observed by scanning electron microscope（SEM）， and dissolving-out quantity of calcium and phosphorus after processing of deciduous teeth in three groups was measured by chemical analysis. Results After processing， orange juice group， apple juice group and grape juice group had different degrees of change in deciduous teeth surface， with hyperpigmentation and changed color in tooth surface， and tooth discoloration is aggravated as the extension of immersion time. The orange juice group changed for orange-yellow， apple juice group changed for reseda， and grape juice group changed for modena. The control group had smooth and dense structured enamel surface without fovea and defect. After processing， tooth surface enamel fiber had uneven fracture in orange juice group， with local fracture disappeared and sporadic small fovea could be seen； enamel fiber had honeycomb structure in apple juice group， and enamel center was heavily damaged with deep fovea and even connected into piece； irregular surface morphology， loose organization structure and soft suspension could be seen in grape juice group. The control group， orange juice group， apple juice group and grape juice group had pH value respectively as （6.32±0.09）， （3.75±1.01）， （2.94±1.05） and （4.01±1.02）. The control group， grape juice group， orange juice group and apple juice group had decreased pH value one after another （P<0.05）. After deciduous teeth processed with fruit drink for 25 h， orange juice group， apple juice group and grape juice group had total dissolving-out quantity of calcium as （12.73±1.44），

（15.65±1.47） and （6.73±1.45） mmol/L， and total dissolving-out quantity of phosphorus as （10.41±1.43）， （13.19±1.45） and （7.15±1.39） mmol/L， which were all higher than total dissolving-out quantity of calcium as （3.63±1.37） mmol/L and total dissolving-out quantity of phosphorus as （5.46±1.39） mmol/L in the control group （P<0.01）， and apple juice group had highest dissolving-out quantity of calcium and phosphorus. Conclusion Orange juice， apple juice and grape juice all can acid etching and demineralize deciduous tooth enamel and induce certain degree of damage to the enamel surface， and apple juice is the worst one.

【Key words】 Fruit drink； Deciduous teeth； Tooth enamel； Demineralization； Ultrastructure； Calcium； Phosphorus； Dissolving-out quantity

齲病是兒童常見(jiàn)的多發(fā)病， 會(huì)引發(fā)口腔炎癥、胃腸消化不良等。隨著經(jīng)濟(jì)水平的提高， 人們對(duì)于果汁飲料的消耗量越來(lái)越大， 大多飲料均呈酸性， 當(dāng)酸直接作用于牙釉質(zhì)時(shí)， 使釉質(zhì)中的羥磷灰石結(jié)晶溶解， 破壞牙釉質(zhì)超微結(jié)構(gòu)， 造成牙釉質(zhì)酸蝕脫礦[1]。飲料的pH越低， 浸泡時(shí)間越長(zhǎng)， 對(duì)牙釉質(zhì)的損傷就越大， 脫礦效果越顯著[2]。本研究主要探討橙汁、蘋(píng)果汁、葡萄汁3種不同果汁飲料對(duì)兒童離體乳牙釉質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的改變及對(duì)乳牙釉質(zhì)脫礦的影響， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選取2015年7月～2016年6月本院口腔科拔除的無(wú)齲壞離體乳牙60顆， 分三組浸泡于3種不同的果汁飲料中（橙汁組、蘋(píng)果汁組、葡萄汁組）， 每組20顆；另取10顆無(wú)齲壞離體乳牙浸泡于礦泉水中作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒年齡5～7歲， 全身健康狀況良好；口腔衛(wèi)生良好；均因替牙期乳牙松動(dòng)或乳牙滯留就診；肉眼觀察牙冠完整、無(wú)齲壞、無(wú)齲壞脫礦；釉質(zhì)發(fā)育良好；均截去牙根， 僅保留牙冠部分。選取市售橙汁、蘋(píng)果汁、葡萄汁飲料以及礦泉水作為實(shí)驗(yàn)飲料， 均于本地超市購(gòu)買(mǎi)。

1. 2 方法

1. 2. 1 牙齒標(biāo)本的制備 用牙科手機(jī)去除牙根部， 牙冠進(jìn)行超聲清洗， 磨去釉質(zhì)表面菌斑及色素。然后將牙齒標(biāo)本在無(wú)水乙醇中浸泡48 h脫水， 超聲清洗3 min， 去除標(biāo)本表面的油脂和食物殘?jiān)?用清水浸泡沖洗， 置于密閉干燥的無(wú)菌容器內(nèi)烘干， 4 ℃保存?zhèn)溆茫ㄋ袠?biāo)本均在拔后1周內(nèi)使用）。

1. 2. 2 實(shí)驗(yàn)分組及處理 將60顆無(wú)齲壞離體乳牙隨機(jī)分為三組， 各20顆， 各組牙齒標(biāo)本均用蒸餾水清洗， 每顆牙的冠根斷面采用抗酸透明指甲油覆蓋。分別浸泡于3種不同的果汁飲料中（橙汁、蘋(píng)果汁、葡萄汁）；另取10顆無(wú)齲壞離體乳牙浸泡于礦泉水中作為對(duì)照組， 均放置于（37.0±0.5 ）℃恒溫箱內(nèi)， 浸泡25 h， 每5小時(shí)換1次浸泡液。

1. 3 觀察指標(biāo)

1. 3. 1 不同飲料pH值的測(cè)定 所有果汁飲料均在常溫下開(kāi)瓶15 min內(nèi)取50 ml， 采用HANNA pH計(jì)測(cè)量各浸泡液的pH值， 重復(fù)測(cè)量3次， 取平均值。

1. 3. 2 不同飲料處理后乳牙釉質(zhì)SEM鏡下超微結(jié)構(gòu)觀察 將牙齒標(biāo)本清洗、梯度酒精脫水、干燥等處理后， 采用SEM觀察不同種類(lèi)果汁飲料處理后的牙釉質(zhì)表面超微結(jié)構(gòu)變化， 并保存影像資料。

1. 3. 3 不同飲料處理后鈣磷溶出量的檢測(cè) 收集各組不同時(shí)間段處理后的飲料各1 ml， 采用化學(xué)分析法測(cè)量不同果汁飲料浸泡乳牙不同時(shí)間后的鈣、磷溶出量， 應(yīng)用全自動(dòng)生化測(cè)量?jī)x檢測(cè)。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 肉眼觀察 橙汁組、蘋(píng)果汁組和葡萄汁組經(jīng)處理后乳牙表面均有不同程度的改變， 牙齒表面均有色素沉著， 顏色發(fā)生一定的改變， 且隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)， 牙齒變色加重。其中橙汁組變?yōu)槌赛S色， 蘋(píng)果汁組變?yōu)闇\綠色， 葡萄汁組變?yōu)樯钭仙?/p>

2. 2 SEM觀察 對(duì)照組乳牙牙釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)光滑， 結(jié)構(gòu)致密， 未見(jiàn)凹陷缺損。橙汁組處理后， 牙齒表層釉柱不均勻斷裂， 局部區(qū)域斷裂消失， 牙齒表面有零星的小凹陷；蘋(píng)果汁組處理后， 牙釉質(zhì)呈蜂窩狀結(jié)構(gòu)， 釉中心遭到嚴(yán)重破壞， 表面有比較深的小凹陷， 甚至加大連接成片；葡萄汁組處理后， 表面形態(tài)不規(guī)則， 組織結(jié)構(gòu)疏松， 可見(jiàn)軟質(zhì)懸浮。

2. 3 四組飲料pH值情況 對(duì)照組、橙汁組、蘋(píng)果汁組、葡萄汁組初始pH值分別為：（6.32±0.09）、（3.75±1.01）、（2.94±

1.05）、（4.01±1.02）。對(duì)照組、葡萄汁組、橙汁組、蘋(píng)果汁組的pH值依次降低（P<0.05）。

2. 4 四組飲料處理乳牙25 h后鈣、磷總?cè)艹隽壳闆r 果汁飲料處理乳牙25 h后， 橙汁組、蘋(píng)果汁組、葡萄汁組的鈣總?cè)艹隽考傲卓側(cè)艹隽枯^對(duì)照組均顯著升高（P<0.01）， 且蘋(píng)果汁組的鈣、磷溶出量最高。見(jiàn)表1。

3 討論

隨著人們生活水平的提升， 飲料種類(lèi)不斷增多， 市售飲料大多均呈酸性， 且pH值比較低， 大部分果汁飲料的pH值約為2.2～4.9。飲料中的糖分、含量不同， 脫礦能力也不同[3， 4]。本研究結(jié)果顯示， 3種不同飲料pH值均低于釉質(zhì)脫礦的臨界值5.0～5.5， 且蘋(píng)果汁飲料的pH值最低， 葡萄汁飲料的pH最高；飲料pH值低直接造成牙齒表面酸蝕、破壞， 乳牙釉質(zhì)中含有較多不穩(wěn)定型的磷酸鈣鹽， 在酸性環(huán)境下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)， 損害牙釉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)[5-9]。本研究中SEM結(jié)果顯示， 橙汁、蘋(píng)果汁、葡萄汁飲料對(duì)兒童乳牙釉質(zhì)均有不同程度的損害：對(duì)照組牙釉質(zhì)表面光滑， 結(jié)構(gòu)致密；而橙汁組、蘋(píng)果汁組及葡萄汁組處理后的乳牙釉質(zhì)表面形態(tài)不規(guī)則， 呈松解狀， 釉柱溶解， 組織結(jié)構(gòu)疏松， 表面出現(xiàn)明顯的小凹陷， 與彭杰等[7]研究結(jié)果相似， 其中蘋(píng)果汁飲料對(duì)牙釉質(zhì)的損傷最明顯， 小凹陷較深且多， 甚至呈現(xiàn)片狀， 可能是由于蘋(píng)果汁飲料的pH最低， 對(duì)牙釉質(zhì)的酸蝕作用最明顯。

不同果汁飲料均可導(dǎo)致乳牙釉質(zhì)不同程度的脫礦， 使牙釉質(zhì)鈣、磷溶出。飲料與牙釉質(zhì)接觸后， 酸可直接進(jìn)入釉質(zhì)裂隙， 引起釉質(zhì)中的羥基磷灰石晶體溶解， 造成牙釉質(zhì)脫礦， 但鈣磷溶出量因果汁飲料種類(lèi)的不同而有差異[10， 11]。本研究結(jié)果中， 3種不同果汁飲料處理牙釉質(zhì)塊后飲料中鈣、磷離子濃度均有升高， 提示牙釉質(zhì)中的鈣、磷均有一定程度的溶出。蘋(píng)果汁組鈣、磷總?cè)艹隽孔罡撸?且顯著高于對(duì)照組， 提示蘋(píng)果汁飲料所導(dǎo)致的牙釉質(zhì)脫礦最為嚴(yán)重， 可能由于其pH最低， 直接導(dǎo)致牙釉質(zhì)脫礦， 與上述SEM觀察結(jié)果對(duì)應(yīng)， 且與鈕曉勇等[9]研究結(jié)果相似。對(duì)照組中礦泉水pH值接近中性， 鈣、磷溶出不明顯。

綜上所述， 橙汁、蘋(píng)果汁及葡萄汁3種果汁飲料對(duì)乳牙釉質(zhì)均存在不同程度的影響， 其中蘋(píng)果汁飲料的pH值最低， 對(duì)乳牙釉質(zhì)的酸蝕作用最明顯， 對(duì)應(yīng)其處理后的乳牙釉質(zhì)表面的超微結(jié)構(gòu)破壞及脫礦程度最嚴(yán)重， 其次依次是橙汁飲料和葡萄汁飲料。生活中應(yīng)加強(qiáng)宣傳教育工作， 指導(dǎo)兒童合理飲用果汁飲料， 保持良好的口腔衛(wèi)生， 減輕兒童齲病及酸蝕癥的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊湘暉， 王維鵬， 宋光泰， 等. 不同飲料對(duì)離體乳牙釉質(zhì)的脫礦作用. 臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志， 2006， 22（5）：291-293.

[2] 常蘭， 王月月， 朱亞琴. 不同種類(lèi)飲料對(duì)牙釉質(zhì)脫礦作用的研究. 口腔材料器械雜志， 2014， 23（1）：35-38.

[3] 于寧. 不同種類(lèi)的飲料對(duì)齲敏感兒童及無(wú)齲兒童牙菌斑PH值的影響. 全科口腔醫(yī)學(xué)電子雜志， 2015， 2（8）：106-107.

[4] Bahrololoomi Z， Musavi SA， Kabudan M. In vitro evaluation of the efficacy of laser fluorescence （DIAGNOdent） to detect demineralization and remineralization of smooth enamel lesions. Progress in Neurobiology， 1997， 51（6）：607-636.

[5] 王玨， 蔡晨星. 12種飲料對(duì)年輕恒牙釉質(zhì)酸蝕脫礦作用比較研究. 口腔生物醫(yī)學(xué)， 2014， 5（1）：27-29.

[6] 岳松齡. 現(xiàn)代齲病學(xué). 北京：北京醫(yī)科大學(xué)、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社， 1993：178-182.

[7] 彭杰， 張敏， 柳洪周， 等. 不同碳酸飲料對(duì)青少年牙釉質(zhì)脫礦作用的比較. 臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志， 2013， 29（5）：284-286.

[8] 周娟， 李陽(yáng)揚(yáng)， 杜陽(yáng)， 等. 不同種類(lèi)飲料致離體乳牙釉質(zhì)脫礦的實(shí)驗(yàn)研究. 安徽醫(yī)學(xué)， 2013， 34（12）：1781-1783.

[9] 鈕曉勇， 王曉麗， 楊長(zhǎng)怡. 不同種類(lèi)飲料導(dǎo)致年輕恒牙牙釉質(zhì)脫礦的實(shí)驗(yàn)研究. 上海口腔醫(yī)學(xué)， 2008， 17（1）：15-19.

[10] 孫曉玲， 王鵬， 曹玉梅， 等. 不同乳制（飲）品對(duì)離體乳牙牙釉質(zhì)脫礦作用的比較研究. 廣東牙病防治， 2016， 24（10）：574-577.

[11] 張曉芳， 董培， 康洪英， 等. 不同年齡離體牙牙釉質(zhì)酸蝕后超微結(jié)構(gòu)研究. 中國(guó)實(shí)用口腔科雜志， 2014， 7（7）：423-425.

[收稿日期：2016-12-09]