市售大豆油中維生素K1的含量

徐 超，周 波，王曉紅

(沈陽醫(yī)學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學教研室，沈陽 110034)

市售大豆油中維生素K1的含量

徐 超，周 波，王曉紅

(沈陽醫(yī)學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學教研室，沈陽 110034)

目的：測定29種市售大豆油中維生素K1含量，分析比較不同原料、工藝及等級大豆油之間維生素K1含量的異同。方法：采用SPE硅膠柱萃取油脂中維生素K1，用高效液相色譜-紫外檢測法測定每種樣品中維生素K1含量。結果：大豆油中維生素K1含量范圍由未檢出至215μg/100g，其中三級大豆油維生素K1平均含量為145.94±36.05μg/100g、一級大豆油維生素K1平均含量為126.69±24.44μg/100g，三級顯著高于一級(P=0.019)。原料為轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆、生產(chǎn)工藝為浸出法和壓榨法間大豆油中維生素K1含量差異無統(tǒng)計學意義。結論：深色的三級大豆油中維生素K1含量豐富。

大豆油；維生素K1；HPLC

維生素K為人體必需的脂溶性維生素，具有促進凝血、參與骨骼代謝、維持心血管健康等諸多功能。人體維生素K1主要來源于綠葉蔬菜(如菠菜、甘藍、萵苣等)與大豆及其制品。我國已制定蔬菜和乳制品中維生素K1含量的測定方法[1-2]，由于缺乏良好的提取和分析方法，國內(nèi)尚無測定大豆油中維生素K1的標準方法。目前，測定食品中維生素K1的方法中高效液相色譜法(HPLC)以高效、高靈敏度、應用范圍廣和分析速度快等特點而受到廣泛應用，而測定大豆油中維生素K1含量的關鍵是如何進行分離提取，去除各種干擾物質(zhì)并避免維生素K1破壞。近年來，色譜分析前用前處理簡單、萃取時間短、提取效率高、重現(xiàn)性好的固相萃取法對樣品進行前處理被越來越多的國內(nèi)學者研究和應用[3-6]。

迄今為止，我國食物成分數(shù)據(jù)庫中尚沒有全面的食物維生素K1含量數(shù)據(jù)，已有研究報道蔬菜類維生素K1含量[7]，但缺少大豆及大豆制品的有關數(shù)據(jù)。我國市場上大豆油種類繁多，有研究測定了大豆油中維生素K1含量[8]，但未見大豆油制取原料及工藝等對維生素K1含量影響的相關報道，故本試驗在前人研究的基礎上，優(yōu)化了大豆油中維生素K1提取方法，對不同種類的市售29種大豆油中維生素K1含量進行了同時測定并分析結果，所取得的結果對分析大豆油營養(yǎng)成分和研究人群維生素K1膳食攝入量具有很好的參考價值。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

UV1201紫外-可見檢測器、AS1201自動進樣器、RO1201溶劑管理器、P1201高壓恒流泵、EC2006色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，大連依利特公司；SPE硅膠柱(6mL，1g)，美國Agilent；Laborota 4001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國Heidolph；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵，予華儀器廠；Eppendorf AG5305隔膜真空泵，New Brunswick；SC-2546型低速離心機，安徽中科中佳科學儀器有限公司；G-560E漩渦振蕩器，美國Bohemia。

正己烷(色譜純)、甲醇(色譜純)、維生素K1標準品(純度>99%)，美國Sigma公司；乙醚(分析純)、正己烷(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：安捷倫C18柱(4.6mm×250mm，5μL)；柱溫：30℃；流動相：甲醇：正己烷(98：2，v/v)；檢測波長248nm；進樣量：20μL；流速：1.5mL/min。

1.3 方法

1.3.1 樣品 在市場上選購成品大豆油29種。采用的原料是轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆；加工工藝有浸出法和壓榨法；等級有一級和三級兩種。所有樣品均在保質(zhì)期內(nèi)，購回后置于陰涼避光處存放。

1.3.2 樣品處理 所有操作在避光室內(nèi)微弱黃光燈下進行。每個樣品同時做3個平行樣，變異系數(shù)大于15%時重復測定。取0.1g油樣(精確至0.001g)溶于5mL正己烷，劇烈震蕩5min，離心5min(3 000r/min)，取4.5mL上清液。將SPE硅膠柱(6mL，1g，Agilent)，分別用8mL正己烷-乙醚(97：3，v/v)和8mL正己烷將SPE柱活化后，提取液以1.0mL/min流速過柱，用8mL正己烷以1.0mL/min流速淋洗小柱，最后分5次加入20mL正己烷-乙醚(97：3，v/v)溶液洗脫，收集洗脫液濃縮吹干，用5mL正己烷溶解殘渣，轉(zhuǎn)移至試管低溫濃縮30min，加1mL正己烷定容離心5min，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后上機分析。

1.3.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。

2 結果與分析

2.1 方法驗證

按中華人民共和國國家標準《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》(GB/T 27404-2008)[9]驗證實驗方法，結果顯示，本方法的重復性好，測定結果標準差(STD%)和相對標準差(RSD%)分別為17.87%和2.91%；標準曲線的線性相關系數(shù)達到99.9%以上；最低檢出限為0.0625μg/mL；絕對回收率為103.58%，加標回收率為79.00%，由此可見本研究所采用的方法準確可靠。

2.2 大豆油維生素K1含量

29種大豆油樣品中維生素K1含量測定結果見附表，含量范圍由未檢出至215μg/100g不等，平均含量為140.92±33.99μg/100g。大豆油中維生素K1含量在數(shù)值上可以看出，轉(zhuǎn)基因浸出法的三級大豆油含量最高，不同原料間轉(zhuǎn)基因高于非轉(zhuǎn)基因；相同原料相同工藝條件下三級高于一級。

附表 不同種類大豆油中維生素K1含量 單位：μg/100g

注：用t檢驗對均值進行兩兩比較，一級與三級大豆油中維生素K1的含量差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

2.3 不同原料大豆油中維生素K1含量

在相同生產(chǎn)工藝下，一級轉(zhuǎn)基因大豆油與一級非轉(zhuǎn)基因大豆油(P=0.742)、三級轉(zhuǎn)基因與三級非轉(zhuǎn)基因大豆油中(P=0.851)維生素K1的含量沒有顯著性差異。

2.4 不同生產(chǎn)工藝大豆油中維生素K1含量

本次研究中工藝為壓榨法的樣本均為非轉(zhuǎn)基因三級大豆油，而上述結果表明不同原料大豆油中維生素K1含量沒有差異，因此，僅比較浸出法與壓榨法制取的非轉(zhuǎn)基因三級大豆油中維生素K1含量的區(qū)別，結果表明，浸出法與壓榨法制取的大豆油中維生素K1含量差異無統(tǒng)計學意義(P=0.176)。

2.5 不同等級大豆油中維生素K1含量

由上述結果可以看出，轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因間、浸出法與壓榨法間大豆油中維生素K1含量分析比較結果顯示差異均無統(tǒng)計學意義，因此，將轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因、壓榨法與浸出法的大豆油合并后按級別分類，即比較一級與三級大豆油中維生素K1的含量，結果表明，三級大豆油維生素K1平均含量為145.94±36.05μg/100g，一級大豆油維生素K1平均含量為126.69±24.44μg/100g，三級顯著高于一級(P=0.017)，由此可見，深色的三級大豆油中維生素K1含量豐富。

3 討論

3.1 樣品預處理方法的優(yōu)化

3.2 大豆油維生素K1含量范圍

本次實驗測定了29種大豆油，其中包括不同原料(轉(zhuǎn)基因原料和非轉(zhuǎn)基因原料)、不同工藝(壓榨法和浸出法)、不同等級(一級和三級品)，基本覆蓋了市售大豆油的品種，具有較好的代表性。美國食物成分表中大豆油維生素K1含量為183.9μg/100g[10]，日本《食物成分表》(第七版，2015)中大豆油維生素K1含量為210μg/100g[11]；日本Kamao等測定的大豆油中維生素K1的平均含量為234±48μg/100g[12]，本實驗結果平均含量為140.92±33.99μg/100g，范圍為未檢出至215μg/100g，由于不同國家、地區(qū)因地理環(huán)境、植物種類等存在差異，因此測定結果不完全相同。

3.3 大豆油維生素K1含量的影響因素

3.3.1 不同生產(chǎn)原料對大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結果顯示，原料為轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因大豆的樣品間維生素K1的含量沒有顯著性差異，認為原料對大豆油中維生素K1的含量沒有影響。近年來，轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因大豆的安全性及產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀得到廣泛關注，國內(nèi)外研究者大多致力于大豆改良育種技術及安全性研究[13-15]，而關于轉(zhuǎn)基因大豆油的研究較少，未見轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因大豆油中維生素含量的相關報道。

3.3.2 不同生產(chǎn)工藝對大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結果顯示，不同生產(chǎn)工藝的大豆油中維生素K1含量沒有差異。目前，我國食用油在制作工藝上基本分為“浸出法”和“壓榨法”，壓榨油和浸出油在生產(chǎn)過程中都需通過堿煉、脫色、脫臭等化工過程進行精煉才能成為可食用的成品油，并由此提出衡量食用成品油品質(zhì)的根據(jù)不是制油工藝(是壓榨還是浸出)，而是國家為各類食用油制定的指標體系[16]，由此可見，生產(chǎn)工藝并不是大豆油中維生素K1含量的影響因素。

3.3.3 不同等級對大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結果表明，一級大豆油中維生素K1含量低于三級大豆油。我國最新制定大豆油國家標準(GB 1535-2003)對成品油按質(zhì)量要求一級油較三級油多了脫色、脫臭、脫脂等精煉工序處理[17]?；瘜W精煉工藝中要經(jīng)過堿煉環(huán)節(jié)，脫色對進一步降低脫膠油或堿煉油中的磷脂含量和皂類物質(zhì)含量是非常重要的工作，目前在植物油精煉過程中所采用的脫色工藝基本上都使用活性白土，即用白土吸附脫色，也就是說白土對皂類物質(zhì)的吸附先于色素物質(zhì)[18]，而維生素K1遇堿易分解，所以脫色可能是導致一級大豆油中維生素K1減少的原因。由此可見，顏色較深的三級大豆油維生素K1含量高于脫色處理的一級大豆油。但是本次僅為初步實驗室研究，大豆油中維生素K1含量與精煉工藝之間的關系需要進一步的研究來證實，進而豐富食物中維生素K1含量的數(shù)據(jù)。

4 結論

市售大豆油中維生素K1含量豐富，其中維生素K1含量三級大豆油高于一級大豆油?！?/p>

[1]GB/T5009.158-2003，蔬菜中維生素K1的測定[S].http：//www.spsp.gov.cn/page/CN/2003/GBT%205009.158-2003.shtml.

[2]GB 5413.10-2010.嬰幼兒食品和乳品中維生素K1的測定[S].http：//www.spsp.gov.cn/page/CN/2010/GB%205413.10-2010.shtml.

[3]朱開祥，李垚辛，董全.農(nóng)藥殘留分析檢測技術研究進展[J].中國食物與營養(yǎng)，2011，17(1)；16-19.

[4]張莉，張永濤，李曉亞，等.固相萃取-高效液相色譜法測定水中洛克沙胂[J].分析試驗室，2014，33(5)：524-527.

[5]仲伶俐，雷紹榮，郭靈安，等.固相萃取-高效液相色譜法同時測定水果中4種植物生長調(diào)節(jié)劑[J].分析試驗室，2016，35(1)：51-55.

[6]丁楊，鄧美榮，聶晶，等.固相萃取-高效液相色譜法測定乳制品中三聚氰胺的含量[J].中國衛(wèi)生工程學，2016，15(1)：41-42.

[7]王曉紅，周波，肖金.沈陽市市售蔬菜中維生素K1的含量[J].營養(yǎng)學報，2008，30(5)：528-529.

[8]趙丹霞，王力清，黃秋研，等.高效液相色譜法測定植物油中的VK1[J].食品科技，2011，36(10)：266-268.

[9]GB/T 27404-2008.實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測[S].http：//www.spsp.gov.cn/page/P596/663.shtml.

[10]United States Department Of Agriculture.National Nutrient Database for Standard Reference Release[DB/OL].http：//ndb.nal.usda.gov/ndb/foods/show?ndbno=04044&fg=4&man=&lfacet=&format=Abridged&count=&max=25&offset=100&sort=f&qlookup=&rptfrm=nl&nutrient1=430&nutrient2=&nutrient3=&subset=0&totCount=180&measureby=m.

[11]科學技術·學術政策局政策課資源室.日本食品標準成分表2015年版(七訂)[DB/OL].http：//www.mext.go.jp/a_menu/syokuhinseibun/1365297.htm.2016-05-21.

[12]Kamao M，Suhara Y，Tsugawa N，et al.Vitamin K content of foods and dietary vitamin K intake in Japanese young women[J].J Nutr Sci Vitaminol(Tokyo)，2007，53(6)：464-470.

[13]王冀寧，周雪.轉(zhuǎn)基因食品安全監(jiān)管的演化博弈分析[J].中國食物與營養(yǎng)，2014，20(1)；13-17.

[14]于殿宇，陳曉慧，宋云花，等.轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因大豆油理化性質(zhì)比較研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報，2012，43(11)：1-6.

[15]崔寧波，宋秀娟.國外轉(zhuǎn)基因大豆種植與育種研究進展[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報，2015，46(8)：103-108.

[16]丁福祺.食用油壓榨法和浸出法工藝的區(qū)別[J].中國油脂，2005，30(1)：5-6.

[17]GB 1535-2003.大豆油[S].http：//www.spsp.gov.cn/page/CN/2003/GB%201535-2003.shtml.

[18]周斌.白土吸附和脫臭工藝在精煉過程中的作用[J].中國油脂，2003，28(6)：15-16.

(責任編輯 李婷婷)

Contents of Vitamin K1in Commercially Available Soybean Oils

XU Chao，ZHOU Bo，WANG Xiao-hong

(Department of Nutrition and Food Hygiene，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China)

soybean oil；vitamin K1；HPLC

沈陽市科學技術局項目(項目編號：F13-302-1-00)。

徐超(1987— )，女，碩士研究生，研究方向：營養(yǎng)與慢性病。

周波(1963— )，女，博士，教授，研究方向：營養(yǎng)與慢性病。