腎透明細(xì)胞癌中Rac1和WAVE2的表達(dá)及其相關(guān)性

關(guān)有良 臧東鈺 王 丹

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科，遼寧 錦州 121001)

腎透明細(xì)胞癌中Rac1和WAVE2的表達(dá)及其相關(guān)性

關(guān)有良 臧東鈺1王 丹2

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科，遼寧 錦州 121001)

目的 研究Rac1和WAVE2蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法對腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本Rac1和WAVE2的表達(dá)進(jìn)行檢測。結(jié)果 腎癌組Rac1和WAVE2表達(dá)陽性率明顯高于癌旁組。且Rac1和WAVE2的表達(dá)水平與患者年齡、性別無明顯關(guān)聯(lián)，而與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。Rac1和WAVE2在腎癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論 腎癌中Rac1和WAVE2蛋白陽性表達(dá)率高于正常腎組織，并呈正相關(guān)性，可能在腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用。

腎透明細(xì)胞癌；Rac1；WAVE2

腎癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其中60%～85%為腎透明細(xì)胞癌。目前認(rèn)為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是造成肺癌治療失敗的主要原因〔1〕。Rac1作為Rho家族成員之一，參與包括細(xì)胞骨架重構(gòu)、基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞生存等過程〔2〕。在腫瘤組織中的研究表明Rac1通過參與腫瘤細(xì)胞的增殖分化與凋亡、細(xì)胞運(yùn)動、侵襲與轉(zhuǎn)移及腫瘤血管生成，影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性，并且已陸續(xù)有研究報道表明Rac1在鼻咽癌、肝癌組織中過表達(dá)〔3,4〕。WAVE2作為一種新的肌動蛋白調(diào)節(jié)蛋白，參與細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)節(jié)肌動蛋白的聚合及細(xì)胞骨架的重排，在片狀偽足的形成和細(xì)胞遷移中的作用備受人們關(guān)注。而片狀偽足的形成則主要是由Rac來介導(dǎo)的，WAVE2作為Rac的下游效應(yīng)物〔5〕。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測合Rac1與WAVE2在腎癌組織中的表達(dá)水平，分析Rac1和WAVE2在腎癌組織中的表達(dá)及其與腎癌的臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 26例腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本均來自遼寧醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2013年10月至2014年10月腎癌手術(shù)的患者，男17例，女9例，年齡50～75(平均62歲)。并隨機(jī)選取10例組織標(biāo)本的癌旁組織標(biāo)本作對照。所有病例均于術(shù)后病理證實為腎透明細(xì)胞癌。

1.2 實驗試劑和儀器 小鼠抗人Rac1兔多克隆抗體(Abaom公司)，WAVE2兔多克隆抗體(Santa Cruz公司)，兔超敏二步法檢測試劑盒、DAB顯色系統(tǒng)均購于中杉金橋生物技術(shù)有限公司，光學(xué)顯微鏡(Olympus BX51)。

1.3 免疫組織化學(xué)方法 采用免疫組織化學(xué)PV二步法檢測Rac1、WAVE2蛋白在石蠟包埋病理標(biāo)本的表達(dá)情況。實驗操作步驟按試劑盒說明，以PBS代替一抗為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 兩種蛋白的免疫組化陽性染色細(xì)胞中均呈現(xiàn)粗大棕黃色顆粒，參考相關(guān)文獻(xiàn)〔6〕隨機(jī)取5個高倍視野，計算每個高倍視野中陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比，最后計算5個高倍視野的平均百分比，(1)陽性染色細(xì)胞數(shù):≤10%為1分；11%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分(2)陽性染色強(qiáng)度分級:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以上兩項積分乘積為最終評定結(jié)果，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性()，5分為強(qiáng)陽性()，另規(guī)定:0～2分視為低表達(dá)，3～4分視為中度表達(dá)，5分為高表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗及Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 Rac1和WAVE2在腎癌組織與癌旁組織中的表達(dá) 腎癌組織中Rac1陽性表達(dá)為19例(73.1%)，陽性染色呈現(xiàn)粗大棕黃色顆粒；WAVE2陽性表達(dá)17例(65.4%)，陽性著色在胞質(zhì)、細(xì)胞核可表達(dá)。而在癌旁組織Rac1及WAVE2均無表達(dá)。見圖1、圖2。

2.2 Rac1和WAVE2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 Rac1、WAVE2的表達(dá)水平與年齡、性別無明顯關(guān)聯(lián)，而與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見表1。

圖1 Rac1在腎細(xì)胞癌與癌旁組織中的表達(dá)(DAB，×200)

圖2 WAVE2在腎細(xì)胞癌與癌旁組織中的表達(dá)(DAB，×200)

臨床病理參數(shù)nRac1P值WAVE2P值性別 男1712(706)069411(647)0920 女97(778)6(667)年齡(歲) <601511(733)097310(667)0873 ≥60118(727)7(636)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無94(444)00173(333)0012 有1715(882)14(824)

2.3 腎癌組織中Rac1、WAVE2蛋白表達(dá)的相關(guān)性 腎癌組織中Rac1與WAVE2呈正相關(guān)(r=0.47，P=0.015)。

3 討 論

Rac1蛋白屬于Rac1超家族中的Rho亞家族，Rac1的表達(dá)和激活對腫瘤細(xì)胞的滲出起重要作用。Rac1在人類的正常組織中呈現(xiàn)低水平表達(dá)或不表達(dá)，但在胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤組織或細(xì)胞中表達(dá)增高，而且Rac1的高表達(dá)同腫瘤細(xì)胞的分化程度、病理分型、TNM分期等表型密切相關(guān)，腎癌組織的研究也表明激活Rac1可導(dǎo)致腎臟癌癥浸潤〔6～9〕。本文顯示腎癌組織中Rac1陽性表達(dá)明顯升高，與年齡、性別無明顯關(guān)聯(lián)，與腫瘤有無轉(zhuǎn)移相關(guān)。與上述文獻(xiàn)報道一致。

WAVE2涉及細(xì)胞骨架的重組，可以引發(fā)細(xì)胞偽足形成和細(xì)胞運(yùn)動，表明WAVE2可能與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。文獻(xiàn)研究顯示喉癌組織中WAVE2蛋白的表達(dá)顯著高于癌旁黏膜組織；WAVE2蛋白表達(dá)與臨床分期、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征顯著相關(guān)；在喉癌組織中的表達(dá)水平與性別、年齡、腫瘤原發(fā)部位、病理學(xué)分級等無關(guān)〔10〕。WAVE2的過量表達(dá)與肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可以作為評價肝癌預(yù)后的指標(biāo)之一〔11〕。本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)報道一致，但與黃琰菁等〔12〕的研究結(jié)果有所不同。我們考慮，原因可能與腫瘤組織不同有關(guān)，WAVE2在胃癌組織的研究顯示下調(diào)WAVE2是抑制胃癌腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制之一〔13〕，但也有文獻(xiàn)報道顯示在胃癌組織中WAVE2下調(diào)意味著淋巴轉(zhuǎn)移〔14〕。因此WAVE2與腫瘤的確切關(guān)系仍需進(jìn)一步研究。

Eden等〔15〕研究發(fā)現(xiàn):細(xì)胞信號從Rac傳遞至肌動蛋白的過程與活化的WAVE復(fù)合物密切相關(guān)。研究表明Rac1基因上調(diào)時，WAVE2表達(dá)增加〔16〕。Rac1引發(fā)特定的細(xì)胞突起通過WAVE2板狀偽足。本研究顯示Rac1與WAVE2呈顯著正相關(guān)，針對Rac1和WAVE2的表達(dá)及作用機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。

1 Makale M.Cellular mechanobiology and cancer metastasis〔J〕.Birth Defects Res C Embryo Today,2007;81(4):329-43.

2 Bosco EE,Mulloy JC，Zheng Y.Rac1 GTPase:a"Rac"of all trades〔J〕.Cell Mol Life Sci,2009;66(3):370-4.

3 齊 巖，黃 波，司晉源，等.Rac1和Cdc42在鼻咽癌組織中的表達(dá)及預(yù)后相關(guān)性研究〔J〕.中國實驗診斷學(xué),2013;17(9):1594-8.

4 肖 冰.肝細(xì)胞性肝癌組織中GST-π和Rac-1的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國普通外科雜志,2013;22(7):944-8.

5 彭慧娟，張 瑜，高一萌，等.Rac1蛋白在卵巢癌組織中的表達(dá)及其對卵巢癌細(xì)胞株SKOV3增殖及遷移的作用〔J〕.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2013;35(13):1402-5.

6 魏世平，王克猛.結(jié)直腸癌中Rac1的表達(dá)研究〔J〕.河北醫(yī)藥，2011;33(24):3701-2.

7 Kato T,Kawai K,Egami Y,etal.Rac1-dependent lamellipodial motility in prostate cancer PC-3 cells revealed by optogenetic control of Rac1 activity〔J〕.PLoS One，2014;9(5):e97749.

8 何雄斌，方 力，胡雄強(qiáng)，等.Tiam1和Rac1在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2014;54(10):56-8.

9 Wacker I,Behrens J.Activin B antagonizes RhoA signaling to stimulate mesenchymal morphology and invasiveness of clear cell renal cell carcinomas〔J〕.PLoS One，2014;9(10):e111276.

10 高水超.WAVE2在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義〔D〕.長沙：中南大學(xué)，2013.

11 陶一明.WAVE2在肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵作用〔D〕.長沙：中南大學(xué)，2005.

12 黃琰菁，于世英，王江玲，等.乳腺癌中Abi1和c-Abl及WAVE2的表達(dá)及其相互關(guān)系〔J〕.中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2010;19(3):216-20.

13 Xu XY,Zhang LJ,Yu YQ,etal.Down-regulated MAC30 expression inhibits proliferation and mobility of human gastric cancer cells〔J〕.Cell Physiol Biochem,2014;33(5):1359-68.

14 Jia S,Jia Y,Weeks HP,etal.Down-regulation of WAVE2,WASP family verprolin-homologous protein 2,in gastric cancer indicates lymph node metastasis and cell migration〔J〕.Anticancer Res，2014;34(5):2185-94.

15 Eden S,Rohatgi R,Podtelejnikov AV,etal.Mechanism of regulation of WAVE1-induced actin nucleation by Rac1 and Nck〔J〕.Nature，2002;418(6899):790-3.

16 Takahashi K.WAVE2 protein complex coupled to membrane and microtubules〔J〕.J Oncol，2012;2012:590531.

〔2016-02-13修回〕

(編輯 曹夢園)

遼寧省自然科學(xué)基金項目(No.2013022009)；遼寧省高等學(xué)校優(yōu)秀人才支持項目(LJQ2013092)；遼寧醫(yī)學(xué)院校長基金項目(No.XZJJ20130243)

王 丹(1974-)，女，講師，博士，主要從事肥胖、神經(jīng)退行性相關(guān)疾病研究。

關(guān)有良(1973-)，男，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事腎癌發(fā)病機(jī)制研究。

R737.11

A

1005-9202(2017)09-2121-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.09.017

1 錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院胸外科

2 錦州醫(yī)科大學(xué)組織胚胎學(xué)教研室