免疫球蛋白含量的檢測(cè)與分離技術(shù)探討

王 娟,焦小杰

免疫球蛋白含量的檢測(cè)與分離技術(shù)探討

王 娟1,焦小杰2

目的 探討免疫球蛋白含量的檢測(cè)與分離技術(shù)。方法 選取武警北京總隊(duì)醫(yī)院2013-10至2016-10收集的90份免疫球蛋白異常血清，運(yùn)用單擴(kuò)法對(duì)血清IgG含量進(jìn)行檢測(cè)，將90份血清分為3組，每組30份，分別運(yùn)用單擴(kuò)法、免疫散射比濁法、免疫透射比濁法對(duì)血清IgG、IgA、IgM含量進(jìn)行檢測(cè)，然后對(duì)3種檢測(cè)方法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常情況、免疫球蛋白含量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 單擴(kuò)法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率分別為22.6%、12.4%、7.9%；免疫散射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率分別為20.3%、14.0%、9.2%；免疫透射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率分別為8.0%、1.5%、6.2%。單擴(kuò)法、免疫透射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率均顯著高于免疫透射比濁法(P<0.05)，但單擴(kuò)法、免疫散射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；單擴(kuò)法、免疫散射比濁法測(cè)定IgA、IgM含量均顯著高于免疫透射比濁法(P<0.05)，而免疫散射比濁法測(cè)定IgA、IgM含量又均顯著高于單擴(kuò)法(P<0.05)，但3種檢測(cè)方法測(cè)定IgG含量之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 單擴(kuò)法、免疫透射比濁法測(cè)定免疫球蛋白含量效果較免疫透射比濁法好。

免疫球蛋白；含量；檢測(cè)與分離技術(shù)

免疫球蛋白(Ig)具有抗體活性，同時(shí)能夠結(jié)合相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)[1]。迄今為止，臨床共有5種免疫球蛋白，即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE[2]。免疫球蛋白檢測(cè)，指將免疫球蛋白各個(gè)成分的含量檢測(cè)出來，在此過程中將一定的技術(shù)充分利用起來；免疫球蛋白分離，指將免疫球蛋白從血液中提取出來，在此過程中嚴(yán)格依據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小、免疫學(xué)特征等因素[3]。本研究探究免疫球蛋白含量的檢測(cè)與分離技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料 選取武警北京總隊(duì)醫(yī)院2013-10至2016-10收集的90份免疫球蛋白異常血清，在-20 ℃的溫度下保存?zhèn)錂z。購買重慶醫(yī)學(xué)院試劑研究所提供的彩擴(kuò)板(批號(hào)：20050709)、意大利ARCO公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀(BT-2245型)、伊利康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的免疫透射比做法試劑(批號(hào)：20050217)。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)技術(shù) 將90份血清分為3組，每組30份，分別運(yùn)用單擴(kuò)法、免疫散射比濁法、免疫透射比濁法對(duì)血清IgG、IgA、IgM含量進(jìn)行檢測(cè)。IgG、IgA、IgM的參考范圍分別為(12.87±1.35)g/L、(2.35±0.34)g/L、(1.08±0.24)g/L[4]。

1.2.2 分離技術(shù) 應(yīng)用硫酸銨鹽試劑、進(jìn)行鹽析法，應(yīng)用乙醇試劑、進(jìn)行有機(jī)溶劑沉淀法對(duì)免疫球蛋白進(jìn)行分離。

2 結(jié) 果

2.1 IgG、IgA、IgM測(cè)定異常情況比較 單擴(kuò)法、免疫透射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率均顯著高于免疫透射比濁法(P<0.05)，但單擴(kuò)法、免疫散射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 3種檢測(cè)方法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率比較 (%)

2.2 免疫球蛋白測(cè)定含量比較 單擴(kuò)法、免疫散射比濁法測(cè)定IgA、IgM含量均高于免疫透射比濁法(P<0.05)，而免疫散射比濁法測(cè)定IgA、IgM含量又均高于單擴(kuò)法(P<0.05)，但3種檢測(cè)方法測(cè)定IgG含量之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 3種檢測(cè)方法測(cè)定免疫球蛋白含量比較 (g/L；±s)

3 討 論

臨床在診斷多種疾病、觀察期療效、評(píng)定其預(yù)后的過程中通常將免疫球蛋白的檢測(cè)作為重要指標(biāo)，尤其是骨髓瘤患者，這是因?yàn)椴煌∫蚝筒〕贪l(fā)展患者的免疫球蛋白含量之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[5]。本研究表明，單擴(kuò)法、免疫透射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率均高于免疫透射比濁法，但單擴(kuò)法、免疫散射比濁法測(cè)定IgG、IgA、IgM的異常率之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明在IgG、IgA、IgM的檢測(cè)中，免疫透射比濁法較單擴(kuò)法、免疫散射比濁法值小。本研究還表明，單擴(kuò)法、免疫散射比濁法測(cè)定IgA、IgM含量均顯著高于免疫透射比濁法，而免疫散射比濁法測(cè)定IgA、IgM含量又均顯著高于單擴(kuò)法，但3種檢測(cè)方法測(cè)定IgG含量之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明在IgA、IgM的檢測(cè)中，免疫透射比濁法具有較大的誤差，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因可能是：(1)可溶性復(fù)合物在抗原或抗體過剩的情況下出現(xiàn)，引發(fā)測(cè)量誤差；(2)血脂濃度對(duì)其造成了直接而深刻的影響，特別是脂蛋白的小顆粒在低稀釋的情況下會(huì)有濁度形成，進(jìn)而提升測(cè)量假性[6-8]。

鹽析法進(jìn)行的前提為將抗體和雜質(zhì)對(duì)鹽濃度的敏感性的不同充分利用起來，將一定范圍的鹽溶液濃度選取出來，使一些雜質(zhì)、抗體成分分別處于沉淀、溶解狀態(tài)[9]。鹽析常數(shù)、pH等很多因素均會(huì)對(duì)鹽析法的分離結(jié)果造成直接而深刻的影響，如果蛋白質(zhì)具有較好的分離效果，那么通常情況下其就會(huì)具有極大的鹽析常數(shù)，同時(shí)具有顯著較大的鹽析范圍，而如果蛋白質(zhì)具有較差的分離效果，那么通常情況下其就會(huì)具有極小的鹽析常數(shù)，同時(shí)具有顯著較小的鹽析范圍[10-12]。在蛋白質(zhì)劑的生產(chǎn)過程中，有機(jī)溶劑沉淀法得到了極為廣泛的應(yīng)用，乙醇是最常用的有機(jī)溶劑[13]。現(xiàn)階段，在國(guó)際范圍內(nèi)，在對(duì)免疫球蛋白進(jìn)行提取的過程中，低溫乙醇Cohn6法是臨床通常采用的冷乙醇分離法，用來對(duì)IgG進(jìn)行制備[14-16]。運(yùn)用低溫乙醇法能夠分血清蛋白為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ六個(gè)組分，其中Ⅱ、Ⅲ組分中主要分布著免疫球蛋白IgG，Ⅴ組分中主要分布著白蛋白[17]。

總之，單擴(kuò)法、免疫透射比濁法測(cè)定免疫球蛋白含量效果較免疫透射比濁法好，值得在臨床推廣。

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(2016-09-20收稿 2017-02-10修回)

(責(zé)任編輯 岳建華)

Detection of immunoglobulin contents and separation technology

WANG Juan1and JIAO Xiaojie2.

1.Department of Clinical Laboratory, Beijing Municipal Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100027, China;2.Department of Clinical Laboratory, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100039, China

Objective To explore the detection methods of contents of immunoglobulin and separation technology.Methods Ninety cases of abnormal serum immunoglobulin treated in our hospital between October 2013 and October 2016 were collected and their serum samples were equally divided into three groups. The contents of IgG, IgA and IgM were detected by the immunodiffusion method, immune nephelometry method, and immune turbidimetric method respectively, while the abnormalities of IgG, IgA, IgM, and the content of immuneglobulin determined with the three detection methods were statistically analyzed.Results The abnormal rates of IgG, IgA and IgM by immunodiffusion method were 22.6%, 12.4% and 7.9% respectively, those by immune nephelometry method were 20.3%, 14% and 9.2% respectively, and those by immune turbidimetric method were 8%, 1.5% and 6.2% respectively.The abnormal rates of IgG, IgA and IgM detected by the single diffusion method and immune turbidimetric method were significantly higher than those by the immune turbidimetric method (P<0.05), but the difference of the abnormal rates of IgG, IgA and IgM between the single expansion method and immunoturbidimetry determination was not significant. The IgA, IgM contents detected by the single expansion method and immune turbidimetric method were significantly higher than those by the immune turbidimetric method (P<0.05), and the IgA and IgM contents detected by the immune nephelometry method were significantly higher than those by the single expansion method (P<0.05), but the difference of IgG contents between the three detection methods was not significant.Conclusions The effect of single expansion method and immune transmission turbidity method is better than that of immune transmission turbidity method.

immunoglobulin; content; detection and separation technology

王 娟,本科學(xué)歷,技師。

1.100027，武警北京總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科；2.100039 北京，武警總醫(yī)院檢驗(yàn)科

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